廣東佛山地區兒童地中海貧血基因型分析

林業輝 潘志偉 周杏 宋春林

（1.佛山市婦幼保健院兒科；2.佛山市婦幼保健院中心實驗室，廣東 佛山 528000）

地中海貧血（地貧）是由于一種或多種珠蛋白肽鏈合成受阻或完全抑制，導致血紅蛋白成分組成異常，而引起的慢性溶血性貧血，屬于一種常染色體不完全顯性遺傳病。佛山地處珠三角腹地，亦是地貧高發地區，為探討本地區地貧基因型的分布特征，本文對來我院就診和體檢的部分兒童進行地貧基因檢測分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年1月至2011年7月在我院兒科住院部、門診和兒童保健科就診和體檢的兒童平均紅細胞體積（MCV）＜82fl者。

1.2 儀器和試劑（1）Sysmex XT－2000i全自動血細胞分析儀：日本希森美康公司生產，XT－2000i所用測定試劑由該公司提供。（2）CR 擴增儀：美國BioRad 公司生產的icycler擴增儀（或美國ABI公司生產的2720 擴增儀），DNA 抽提試劑盒、α地貧基因診斷試劑盒和β地貧基因診斷試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供，電泳所需0.8% 瓊脂糖凝膠等為自配。

1.3 方法（1）MCV 測定：使用Sysmex XT－2000i全自動血細胞分析儀對全部受檢兒童進行血細胞分析。（2）基因診斷：對經血細胞分析MCV＜82fl者用無菌EDTA 抗凝管抽取靜脈血2mL；采用DNA快速提取試劑盒提取DNA，再用α地貧基因診斷試劑盒，以缺口PCR（gap－PCR）為原理的單管多重PCR（M－PCR）進行α地貧基因檢測；同時用β地貧基因診斷試劑盒，以反向點雜交芯片法進行β地貧基因檢測。具體步驟按說明書進行操作。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0 統計軟件。計數資料用率表示，不同組間率或構成比的比較用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兒童地貧的檢出率 血細胞分析MCV＜82fl者1 341例，其中男896例，女445例，年齡0～14歲。確診地貧848例，男544例（60.7%），女304例（68.3%），男、女檢出率差異有統計學意義。其中α地貧471例，檢出率35.1%；β地貧377例，檢出率28.1%。不同年齡段兒童地貧檢出率不同，嬰兒期（＜1歲）地貧檢出率54.6%（339／621），幼兒期（～3歲）地貧檢出率63.7%（314／493），學齡前期（～7歲）地貧檢出率81.7%（143／175），學齡期（～14歲）地貧檢出率100%（52／52），兒童地貧檢出率隨著年齡增長而逐漸增高（P＜0.01）。

2.2 地貧患兒的基因型和基因頻率（1）α地貧患兒的基因型和基因頻率：本反應體系可擴增出長度約為1.8、2、1.6和1.3kbp的4個條帶，分別代表人類α珠蛋白基因（即正常人）、3.7缺失型、4.2缺失型、SEA組缺失型的擴增產物。陰性對照管無擴增產物，陽性對照管出現長度約為1.3和1.8kbp組的2組個條帶，分別為－SEA缺失型和正常α珠蛋白基因擴增的產物。本組資料471例α地貧患兒中，以－SEA基因最組常組見，占75.3%（389組個組等組位組基組因）；－α3.7組基組因和－α4.2基因分別占17%（88組個等位基因）和7.7%（40組個組等組位組基組因）。并組以－SEA／αα組基組因組型組多組見，占73.2%（345例）；其次為αα／－α3.7基因型，占12.5%（59例）；此外還有－SEA／－α3.7基因型占5.5%（26例），αα／－α4.2基因型占4.2%（20例），－SEA／－α4.2基因型占3.8%（18例），－α3.7／－α4.2組基組因組型組占0.4%（2例），－α3.7／－α3.7基因型占0.2%（1例）。（2）β地貧患兒的基因型和基因頻率：在377例β地貧患兒中檢出11種突變基因，共401個等位基因，居前5位的突變基因依次組為：CD41－42組占40.2%（161組個）、IVS－2－654占24.5%（98個）、CD17占15.5%（62組個）、β－28占8.5%（34個）、CD71－72占4.2%（17個）；其他的突變基因組還組有：CD26（10組個）、CD43（6組個）、β－29（5個）、CD27－28（3組個）、IVS－1－1（3組個）、CD14－15（2個）。共有23組種基因組型，包組括11組種雜合組子（93.6%），分別為：CD41－42（144例）、IVS－2－654（91例）、CD17（53例）、β－28（28例）、CD71－72（13例）、CD26（7例）、CD43（6例）、CD27－28（3例）、β－29（3例）、IVS－1－1（3例）和CD14－15（2例）；9種雙重雜合子（4.5%），分別為：CD41－42／CD26（3例）、IVS－2－654／β－28（3例）、CD41－42／CD17（2例）、CD41－42／CD71－72（2例）、CD41－42／β－28（2例）、IVS－2－654／CD41－42（2例）、CD17／β－29（1例）、CD71－72／β－28（1例）和CD71－72／β－29（1例）；3種純合子（1.9%），分別為：CD17／CD17（3例）、CD41－42／CD41－42（3例）和IVS－2－654／IVS－2－654（1例）。

3 討論

地貧屬于常染色體單基因遺傳性疾病，具有高度的遺傳異質性和明顯的地理分布特征。本病臨床表現為不同程度的溶血性貧血，重型患者常出現嚴重溶血性貧血，往往未成年即已夭折；輕型患者可無臨床癥狀，極易漏診。因此，有必要開展地貧基因的檢測和監控，指導合理婚配，防止地貧基因蔓延。

本研究對1 341例血細胞分析MCV＜82fl兒童進行地貧基因檢測，診斷α地貧471例，檢出率為35.1%，診斷β地貧377例，檢出率為28.1%，α地貧和β地貧檢出率均明顯高于文獻［1－3］報道。這可能與本資料先通過對就診和體檢兒童進行血細胞分析篩查，對MCV＜82fl者才進行地貧基因檢測，因此導致地貧患兒相對集中，而檢出率增高。本資料顯示，隨著年齡增長地貧基因檢出率逐漸增高，學齡期兒童檢出率達100%，提示隨著年齡增長，MCV降低（＜82fl）作為地貧的預測指標越可靠（P＜0.05）。這主要與嬰幼兒時期MCV 值降低除受地貧影響外，亦受缺鐵性貧血的影響，幼兒期以后缺鐵性貧血的發生率顯著下降，因此對MCV 值的影響也明顯降低，故而推斷MCV＜82fl作為年長兒地貧的預測指標較嬰幼兒更可靠。

引起我國α地貧的基因類型主要有3種：（1）右側缺失型（－α3.7）；（2）左側缺失型（－α4.2）；（3）東南亞缺失型（－SEA）。我國南方以－SEA基因型最常見。本研究471例α地貧患兒基因分析結果顯示，東南亞缺失型占主導地位，占75.3%，約是－α3.7和－α4.2兩基因總和組的3組倍，右組側組缺組失組型（－α3.7）是組左組側組缺組失組型（－α4.2）的2.2倍，與黃鈺君等［4］報道結果相似。本地區兒童α地貧基因型以標準型（－SEA／αα）最為常見（占73.2%），與廣州和珠海等地相似［1，5］。目前，我國已發現34種β地貧突變類型，南方β地貧突變基因型居前5 位的分別是CD41－42，IVS－2－654，β－28，CD17和CD71－72［6］。本研究377例β地貧患兒共檢出11種突變基因類型，與廣州、茂名和南寧等地相似［2，7－8］，高組于組國組內組其組他組地組區［5，9］。本組資組料組顯組示居前5位突變基因類型占所有檢出的92.9%。共檢出的β組地貧基因型23組種，其中雜合子11組種（93.6%），雙組重組雜組合組子9組種（4.5%），純組合組子3組種（1.9%）。11組種雜合子臨床上均表現為輕型β組地貧，純合子和部分雙重雜合子表現為重型，部分雙重雜合子表現為中間型。

綜上所述，佛山地區α地貧基因缺失以東南亞缺失型占主導地位，基因型以標準型（－SEA／αα）多見。β地貧以輕型雜合子多見，而重型β地貧較少，主要見于純合子和部分雙重雜合子。地貧是本地區高發的地方性遺傳病，有必要對MCV＜82fl的兒童人群常規進行基因診斷，并建立本地區的地貧基因網絡檔案庫，為計生部門采取有效措施防止重型地貧患兒的出生和地貧基因的蔓延提供參考依據。

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