化痰理氣口服液的祛痰作用與急毒實驗研究*

竇建衛 陳 曦 劉素香 吳文平 徐敏妮 楊利生 白麗君 王顯著

西安市中醫醫院(西安710021)

化痰理氣口服液的祛痰作用與急毒實驗研究*

竇建衛△陳 曦△劉素香▲吳文平 徐敏妮 楊利生 白麗君 王顯著

西安市中醫醫院(西安710021)

目的：評價化痰理氣口服液的祛痰作用并進行急毒實驗。方法：采用小鼠酚紅祛痰實驗觀察其祛痰作用，急毒實驗測定化痰理氣口服液對小鼠的最大給藥量。結果：化痰理氣口服液能顯著增加昆明小鼠氣管酚紅排泌量，以最大濃度，最大給藥體積，測得化痰理氣口服液的最大給藥量為252 g 生藥/kg，相當于推薦人臨床用量的504倍。結論：化痰理氣口服液具有明顯的祛痰功效，且急性毒性小。

化痰理氣口服液源于全國名老中醫黃保中主任驗方蔞貝枳桔二陳湯，由全栝蔞、浙貝母合枳術丸、六君子湯化裁而成，具有健脾益氣，化痰散結，寬胸理氣，止咳平喘之功效[1-2]。臨床療效確切，本實驗通過祛痰的藥效學試驗評價其作用，為進行院內制劑及新藥的開發提供科學依據。并通過觀察小鼠經口24 h內多次灌胃給予化痰理氣口服液流浸膏所產生的急性毒性反應和死亡情況，為臨床安全用藥提供依據。

1 小鼠酚紅祛痰實驗 1.1 材料 1.1.1 藥物與試劑：化痰理氣口服液(批號：20130301)。鹽酸氨溴索沐舒坦片(批號: H 20030360 )，酚紅(批號： 20131225)伊文思藍(批號：WC20090209)，醋酸(批號：20100329)，0.9%氯化鈉注射液(批號：A100712031)。

1.1.2 實驗動物：72只昆明小鼠，SPF級，體重18～22 g，雌雄各半，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證：SCXK(陜)2012-003號，實驗動物使用許可證號：SYXK(陜)2012-005。

1.1.3 主要儀器：Stat Fax 2100型分光光度計(Awareness Technology Inc., Palm City, FL, USA)，JM型電子天平(余姚紀銘稱重校驗設備有限公司)。

1.2 實驗方法[3]1.2.1 繪制標準酚紅曲線[4]：準確稱取酚紅200 μg，加5%碳酸氫鈉溶液溶解至2 mL，配成1 mL含100 μg的溶液，然后順次稀釋成每毫升含7.0、5.0、3.0、2.0、1.5、1.0、0.5 μg酚紅的溶液，利用分光光度計，測546 nm處的OD值。以酚紅劑量為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線。根據所測出的OD值，即可由標準曲線查出各鼠酚紅的排泌量。

1.2.2 實驗步驟:72只昆明小鼠，體重18～22 g，雌性。隨機分為6組，即模型對照組、陽性藥鹽酸氨溴索組(0.27 g/kg)、橘紅丸組(4.8 g/kg)化痰理氣口服液高、中、低劑量組(3.0 g/kg,1.5 g/kg,0.75 g/kg)，每組12只。各組小鼠按20 mL/Kg灌胃給藥，共7d,1d1次。其中模型對照組給等體積蒸餾水。實驗前小鼠禁食不禁水12 h，末次給藥后0.5 h，各小鼠按劑量20 mL/Kg腹腔注射5%酚紅溶液，注射后0.5 h，頸椎脫臼處死小鼠，仰位固定于手術板上，剪開頸前皮膚，剝離氣管周圍組織，分離氣管，剪下甲狀軟骨下緣至氣管分叉處的氣管，用0.5 mL 5%碳酸氫鈉溶液沖洗氣管，連續3次，合并洗出液，用分光光度計測546 nm波長處的光密度(OD)值，并根據實驗前制定的標準曲線計算出氣管沖洗液中酚紅濃度。

1.4 實驗結果 1.4.1 酚紅排泌的標準曲線:酚紅排泌標準曲線為Y=0.1376X+0.0608(R=0.9823)，結果表明標準曲線線性良好，達到準確測定酚紅含量的第1步。

1.4.2 化痰理氣口服液對小鼠氣管酚紅排泌的作用:與模型對照組相比，鹽酸氨溴索組、橘紅丸組、化痰理氣口服液高、中劑量組小鼠酚紅排泌量明顯增多(P<0.01)。提示，鹽酸氨溴索、橘紅丸組、化痰理氣口服液高、中劑量均使昆明小鼠呼吸道酚紅排泌量增多，見表1。

表1 化痰理氣口服液對小鼠氣管酚紅排泌的作用

2 急毒實驗 2.1 實驗材料 2.1.1 受試藥物：化痰理氣口服液，試驗時用流浸膏(批號：20130301)。

2.1.2 試驗動物及飼養環境：SPF級KM小鼠40只，體重為18～22 g，雌雄各半。由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證：SCXK(陜)2012-003號，實驗動物使用許可證號：SYXK(陜)2012-005。動物購入實驗室后，雌雄分開，分籠飼養于SPF實驗室內。動物適應性馴養 3 d。小鼠籠具及托盤清洗消毒后使用。動物飲水、進食自由，飼料為滅菌全價營養顆粒飼料。動物飼養條件：室溫23±2oC，相對濕度40%～70%，每天光照12h。

2.2 試驗方法[5]取KM小鼠，40只，雌雄各半，分性別隨機分為2組，即空白對照組和給藥組，每組20只，雌雄各10只。空白對照組灌胃生理鹽水，每10 g體重灌胃0.4 mL；給藥組灌胃化痰理氣口服液流浸膏2.1g生藥/mL，每10 g體重灌胃0.4 mL，1日內給藥3次，給藥間隔6 h。給藥首日每次給藥后立刻、2 h、4 h、6 h連續觀察動物活動情況，包括小鼠的呼吸、運動、反射、眼瞼指征、唾液分泌、豎毛、肌張力、大便、尿液、皮膚反應，以及中毒或死亡等情況，見表2。給藥后第2d～14d，每天觀察一般表現及死亡情況，連續觀察14d。7d時稱體重，14d稱體重(JM型電子天平，余姚紀銘稱重校驗設備有限公司)后處死小鼠，將中毒死亡動物及處死動物尸檢，肉眼觀察主要臟器的病變情況，若有異常變化，進行病理組織學觀察記錄體重變化。

表2 動物急性毒性試驗觀察表

2.3 試驗結果 經口灌胃給予化痰理氣口服液流浸膏日劑量合計252 g生藥/kg，給藥當日小鼠活動減少，大便呈黑褐色，便稀軟，次日排便恢復正常。兩組小鼠呼吸正常，行為活動與自主活動未見異常，角膜、翻正、牽張反射存在，無流淚、無眼球突出。14d觀察期間，動物一般情況良好，攝食正常，體重增長，毛色光滑，尿液無明顯變化。整個實驗期間未見動物死亡。實驗結束時，處死動物，解剖并觀察心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺、氣管、食管、胃、十二指腸、結腸、膀胱、睪丸、子宮、卵巢等臟器，未見到明顯的病理性改變。實驗期間空白對照組和給藥組體重增長一致，兩組動物分性別進行比較，體重增長未見差異(P>0.05)，結果見表3。提示本實驗測得最大給藥劑量為252g生藥/kg，相當于推薦人臨床日用劑量的504倍。

表3 化痰理氣口服液急性毒性小鼠體重表

3 討 論 本實驗采用經典的氣管酚紅排泌量實驗來評價化痰理氣口服液的化痰作用。酚紅是一種顯示劑，腹腔注射后，可通過血液循環達到肺部，可通過氣管的分泌作用在氣管壁檢測到酚紅，因此酚紅排泌量能夠反映氣管的排痰量。小鼠酚紅祛痰實驗研究結果表明，化痰理氣口服液高、中劑量組小鼠酚紅排泌量明顯增加，顯示出本品具有明顯的化痰功效。急毒試驗以最大濃度，最大給藥體積，測得化痰理氣口服液的最大給藥劑量為252 g生藥/kg，相當于推薦人臨床用量的504倍。試驗結果表明化痰理氣口服液急性毒性小。

[1] 楊利生，徐敏妮，王婷霄，等. 化痰理氣口服液配合吸入劑治療慢性阻塞性肺疾病穩定期臨床研究[J].陜西中醫，2015，36(3)：302-304.

[2] 徐敏妮，劉素香.樓貝枳桔二陳湯治療慢性阻塞性肺疾病痰氣交阻證療效觀察[J].陜西中醫，2013，33(12)：1573-1574.

[3] 徐叔云,卞入濂,陳 修.藥理實驗方法學[M].第3版.北京:人民衛生出版社,2002:1359-1363.

[4] 魏 偉,吳希美,李元建.藥理試驗方法[M].第4版.北京:人民衛生出版社,2010:1174-1191.

[5] 陳奇主編.中藥藥理研究方法學[M].第2版.北京：人民衛生出版社，2006:107-110.

(收稿2015-07-10；修回2015-08-31)

*陜西省中醫藥管理局課題(13-LCO32)

@化痰理氣口服液 動物，實驗 小鼠

R271.11

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.12.055

國家級名老中醫黃保中工作室

△西安交通大學醫學部藥學院(西安 710061)

▲通訊作者