HOXA10啟動子區基因多態性與女性生殖能力的相關性研究

符免艾，李 娟，黃 林，冼梅蘭，周立花，胡 英，張云霞

(1.海南省農墾總醫院生殖科，海南 海口 571100；2.海南醫學院，海南 海口 571199)

HOXA10啟動子區基因多態性與女性生殖能力的相關性研究

符免艾1，李 娟1，黃 林2，冼梅蘭2，周立花1，胡 英1，張云霞2

(1.海南省農墾總醫院生殖科，海南 海口 571100；2.海南醫學院，海南 海口 571199)

目的 探討HOXA10啟動子區基因多態性與女性生殖能力的關聯性。方法選擇我院2013年7月至2014年7月施行輔助生殖術(ART)的女性患者240例作為不孕組，其中三次施行ART未懷孕的患者歸為ART失敗組，同期產科自然懷孕且年齡偏大的女性250例作為自然懷孕組。檢測兩組患者HOXA10基因啟動子區SNP位點rs3779456多態性，利用統計學軟件SPSS19.0探討其基因型及等位基因與女性生殖能力的關聯性。結果三種基因型TT、CC、CT在不孕組和自然懷孕組間比較差異無統計學意義(P＞0.05)，在ART失敗組和自然懷孕組間差異有統計學意義(P＜0.05)。CC基因型和其余兩種基因型的分布頻率差異有統計學意義(P＜0.05)，且CC在不孕組和自然懷孕組分布頻率的OR值為1.24。等位基因T和C的分布頻率差異有統計學意義(P＜0.05)，且T在自然懷孕組和不孕組的分布頻率OR值為1.15。結論基因型CC可能不利于自然懷孕，等位基因T可能與女性生殖能力呈正相關。

HOXA10；女性；生殖能力；胚胎移植技術；啟動子；基因多態性

生殖是物種繁衍的正常生理現象，孕育后代是一個女性基本的權利和義務，新生兒的誕生往往給家庭帶來難以言喻的喜悅。目前我國約有超過10%的女性患有不孕不育癥，這給她們的生活和人生帶來了難以估量的痛苦。輔助生殖技術(Assisted reproductive technology，ART)為不孕不育的治療帶來了希望，然我們在施行ART的過程中發現影響成功率的因素眾多，且難以形成評估患者受孕率的體系[1-3]。為此，我們試圖從基因途徑尋找影響女性生殖能力的相關位點，以期指導臨床評估體系的構建。HOXA10基因的表達量隨月經周期呈現周期性變化，且在著床窗口期表達增加，與胚胎著床密切相關[4]。我們認為啟動子區的堿基變化(如SNP多態性)可能影響啟動子的活性及HOXA10基因的表達量，進而影響HOXA10所調節的下游基因的表達，最終影響女性的子宮內膜容受性及生殖能力。本文通過不孕人群與自然受孕人群的比對研究進一步探討其啟動子多態性位點對女性生殖能力的關聯性，為開展女性生殖能力評價及開展個體化醫療提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年7月至2014年7月在我院生殖醫學中心接受ART并在3次或3次內移植結束后有妊娠結局的不孕患者240例歸為不孕組，其中包括成功受孕并繼續妊娠患者117例，成功受孕并流產患者20例，ART失敗患者103例(歸為ART失敗組)。選擇同期產科自然懷孕且年齡偏大者250例作為自然懷孕組。不孕組婦女平均年齡37.8歲，自然懷孕組婦女平均年齡34.5歲，兩組婦女在年齡、體重等方面比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。排除子宮內膜異位癥等其他子宮問題導致的不孕和因男方因素導致的不孕患者。

1.2 不孕患者評估標準 3次以內(含3次)成功受孕且胎兒正常發育者歸為成功受孕并繼續妊娠患者，3次以內(含3次)成功受孕但發生生化妊娠或者妊娠過程中胎兒停止發育、流產等不能成功產下嬰兒者判定為成功受孕并流產患者，3次以內(含3次)未能移植成功者判定為ART失敗患者。

1.3 基因多態性檢測方法 采集所有研究對象空腹靜脈血于EDTA抗凝管中，采用北京天根生物技術有限公司提供的全血基因組DNA提取試劑盒提取患者基因組DNA，DNA編號排序后委托生物公司進行多態性分析，公司提供各患者的三種基因型檢測結果。

1.4 統計學方法 采用EXELE錄入研究對象的相關信息，采用SPSS19.0軟件對數據進行統計學分析。檢驗水準α=0.05，對組間差異采用四表格χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 自然懷孕組與不孕組受試者三種基因型比較 自然懷孕組和不孕組中均可檢驗出TT、CT、CC三種基因型，χ2檢驗結果為P=0.10，說明三種基因型的組間差異無統計學意義。TT基因型和其他兩種基因型的比較差異亦無統計學意義(P＞0.05)，而CC基因型與其他兩種基因型比較差異則有統計學意義(P＜0.05)，且自然懷孕組相對不孕組的OR值為0.75，說明不利于自然懷孕。等位基因T和C間比較差異有統計學意義(P＜0.05)，且T對C的OR值為1.24，見表1。

表1 自然受孕組與不孕組的三種基因型比較[例（%）]

2.2 自然懷孕組與ART失敗組受試者三種基因型比較 自然懷孕組和ART失敗組中均可檢驗出TT、CT、CC三種基因型，χ2檢驗結果為P=0.02，說明三種基因型的組間比較差異有統計學意義。TT基因型和CC+CT基因型比較差異無統計學意義(P＞0.05)， CC基因型與其他兩種基因型比較差異有統計學意義(P＜0.05)，且自然懷孕組相對不孕組的OR值為0.65，說明不利于自然懷孕。等位基因T和C間比較差異有統計學意義(P＜0.05)，且T在自然懷孕組中分布頻率為ART失敗組的1.28倍，見表2。

表2 自然受孕組與ART失敗組受試者三種基因型比較[例(%)]

3 討論

HOXA10屬于同源框基因家族的成員，因該基因家族中都含有一段183 bp的同源盒而得名[4]。該基因定位于人類7號染色體，基因組DNA全長12 573 bp，在子宮內膜特異性表達，表達產物為含有410個氨基酸的蛋白質。該蛋白具有轉錄因子的功能，目前已經被證實參與雌性生殖系統的發育和正常子宮內膜形態的構建，并對子宮內膜的增殖與分化、子宮內膜容受性的建立、胚胎的定位及粘附、胞飲突的形成、子宮內膜的蛻膜化以及血管通透性的增強中發揮著重要作用[5-6]。近些年來的研究表明基因多態性是個體差異和諸多疾病的重要分子基礎。HOXA10基因啟動子區目前已經報道的SNP位點共有24個，其中突變頻率超過0.1的共有3個(NCBI數據)，但到目前為止，尚未見HOXA10基因啟動子區SNP多態性與女性生殖能力的相關報道。

我們對240例施行ART的不孕患者及250例自然懷孕女性啟動子區rs3779456(T→C突變)位點的多態性進行了比對研究，三種基因型無組間差異，但CC基因型在自然懷孕組的分布頻率是ART組的0.75倍，且與其他兩種基因型的總和比較差異具有統計學意義，說明該基因型可能不利于自然懷孕。而對等位基因T和C的分析表明，T可能有利于自然懷孕。為了進一步確認上述結果，我們對ART患者按照妊娠結局進行了進一步的篩選，選擇103例經3次種植均失敗的患者與自然懷孕患者進行比較，比較結果與上述基本相符，不同的是三種基因型的組間分布出現了差異。

綜上所述，在海南女性人群中HOXA10基因啟動子區多態性位點rs3779456的多態性與其生殖能力密切相關，其中等位基因T有利于自然受孕，而CC基因型不利于自然受孕。我們的研究結果進一步證明HOXA10基因多態性可能密切影響著女性的生殖能力，而相關機制的闡明尚需更深入的研究。

[1]高愛梅,郭東曉,裴凌云,等.不孕不育癥影響因素的研究[J].中國婦幼保健,2011,26(21):3280-3281,3290.

[2]王思慧,傅 萍,姜 萍.不孕不育與遺傳學相關因素的研究進展[J].中國優生與遺傳雜志,2012,20(1):126-128.

[3]符免艾,李 娟,冼梅蘭,等.體外授精—胚胎移植后早期自然流產相關因素分析[J].海南醫學,2014,25(24):3637-3639.

[4]Zanatta A,Rocha AM,Carvalho FM,et al.The role of the Hoxa10/ HOXA10 gene in the etiology of endometriosis and its related infertility:a review[J].JAssist Reprod Genet,2010,27(12):701-710.

[5]Smith CC,Taylor HS.Xenoestrogen exposure imprints expression of genes(Hoxa10)required for normal uterine development[J]. FASEB J,2007,21(1):239-246.

[6]Cermik D,Selam B,Taylor HS.Regulation of HOXA-10 expression by testosterone in vitro and in the endometrium of patients with polycystic ovary syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab,2003,88 (1):238-243.

Investigation on the relationship of polymorphism of Hox110 promoter with the reproductive ability of females.

FU Mian-ai1,LI Juan1,HUANG Lin2,Xian Mei-lan2,ZHOU Li-hua1,HU Ying1,ZHANG Yun-xia2.
1.Department of Reproduction,Hainan Provincial Nongken General Hospital,Haikou 571100,Hainan,CHINA;2.Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

Objective To investigate the polymorphism of the HOXA10 promoter and the female reproductive ability.MethodsA total of 240 female infertile patients undergoing assisted reproductive technology(ART)in our hospital from July 2013 to July 2014 were enrolled as infertility group,among which the patients was not pregnant after 3 times of ART were collected as the ART failure group.Two hundred and fifty aged females with normal reproductive ability were chosen as the control group.The polymorphism of rs3779456 located in the HOXA10 promoter was detected and the data were analyzed by SPSS19.0.ResultsThere was no significant difference in the three genotypes(TT,CC,CT)between the infertility group and the control group(P＞0.05),while there was statistically signifi-cant difference between ART failure group and the control group(P＜0.05).The frequency of CC and the other two genotypes was significantly different(P＜0.05),the OR value of CC in the infertility group and the control group was 1.24.The allele frequency of T and C between infertility group and the control group were significantly different with an OR value of 1.15.ConclusionThe genotype CC may be a dangerous factor for natural pregnancy,while the allele T is beneficial for the reproductive ability.

HOXA10;Female;Reproductive ability;In vitro fertilization and embryo transfer(IVF-ET);Promoter;Gene polymorphism

R339.2+2

A

1003—6350（2015）13—1887—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0680

2014-12-2)

海南省衛生廳科研項目（編號：瓊衛2013自籌-20）

張云霞。E-mail：zhangyunxia1977@qq.com