高效液相色譜內標與外標法測定復方地塞米松軟膏含量比較

王 琦，黃秋波，黃曉梅，王佳坤，陳巧輝，甘惠貞

（中國人民解放軍第180醫院藥學科，福建 泉州 362000）

醋酸地塞米松為腎上腺皮質激素類藥，具有消炎、抗過敏作用［1］。醋酸地塞米松軟膏為常見皮膚科用藥，含量檢測方法在2010年版《中國藥典（二部）》規定采用內標法［2］。筆者比較了采用高效液相色譜（HPLC）內、外標法測定復方地塞米松軟膏中地塞米松的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀；VWD-3400紫外檢測器；梅特勒AE-240型電子天平。復方醋酸地塞米松乳膏（新鄉市琦寧藥業有限公司，批號分別為 130402，130511，130602）；醋酸地塞米松對照品、甲睪酮對照品（均由中國食品藥品檢定研究院提供）；甲醇（美國進口，Fisher）為色譜純，水為經0.45μm濾膜過濾的重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Kromasil100-5C18柱（250mm ×4.60mm，5μm），流動相：甲醇 - 水（70 ∶30）；流速：1.0mL /min；檢測波長：240 nm［2］；柱溫：30℃。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取甲睪酮對照品適量，加甲醇溶液制成每1 mL含0.20 mg的溶液，作為內標溶液。精密稱取醋酸地塞米松對照品13mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取該溶液與內標溶液各5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋到刻度，得對照品溶液。取樣品約1.8 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，精密加入內標溶液5.00mL及甲醇適量，于80℃水浴中加熱使基質溶解后，放冷，濾過，基質用甲醇提取2次，每次10mL，濾過，合并3次濾液于同一50mL容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，將容量瓶置于冰浴中冷卻2 h后，取出，迅速過濾，得濾液，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12，16，20，24 h時進樣20μL，測定地塞米松的峰面積。結果的 RSD＜1.5%（n＝10），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液20μL，在擬訂色譜條件下分別連續進樣6次，測定地塞米松的峰面積。結果的 RSD＜2%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：同一樣品，取樣6份，按擬訂的含量測定方法，制備供試品溶液，在上述色譜條件下采用內、外標法分別測定供試品溶液和對照品溶液的峰面積，計算地塞米松含量。結果樣品中地塞米松含量的 RSD＜2%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密稱取陰性對照樣品5 g（相當于含地塞米松 2.5mg），分別精密加入地塞米松對照品 2.0，2.5，3.0mg，按供試品溶液的制備方法制備溶液，在擬訂色譜條件，測定地塞米松的峰面積，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

分別取對照品溶液和供試品溶液各20μL進樣，依上述色譜條件測定含量。內、外標法測定結果見表2。經查 t值表得t0.01（12）＝ 3.055，本試驗 t＞ t0.01（12），故P＜ 0.01，表明內、外標法的測定結果存在著顯著性差異。

表1 地塞米松加樣回收率試驗結果（n＝9）

表2 樣品內、外標法含量測定結果比較

3 討論

本研究結果顯示，2種方法測定的結果存在顯著性差異，內標法因為將樣品在處理及其進入色譜系統后等的影響因素均考慮在內，其測定結果比外標法更準確。由表1可見，不同樣品通過兩種方法測定的結果有的差別很大，有的差別并不大，這可能與不同廠家所選用的基質、制作工藝不同有一定的關系。因此，參考文獻［3-5］，對于復方醋酸地塞米松軟膏的含量測定，不能輕易用外標法代替內標法。

參考文獻：

［1］陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學［M］.第17版.北京：人民衛生出版社，2011:616.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:593-594.

［3］錢 方，黃 偉，吳 洪.高效液相色譜（HPLC）法測定復方地塞米松乳膏中地塞米松的含量［J］. 藥學服務與研究，2002，2（4）:253-254.

［4］王興華，韓 勇.高效液相色譜法測定皮炎平軟膏中醋酸地塞米松的含量［J］. 中國藥業，2003，12（12）:45.

［5］楊習江，哈 娜，哈 力.反相高效液相色譜法測定地塞米松軟膏中地塞米松含量［J］. 醫藥導報，2011，30（6）:787-788.