高效液相色譜法測定止咳定喘丸中苦杏仁苷含量

楊慈海，劉冬梅，鐘戈銳

（1.湖北省荊門市食品藥品監督檢驗所，湖北 荊門 448124； 2.湖北百科亨迪藥業有限公司，湖北 荊門 448000）

Yang Cihai1,Liu Dongmei1 Zhong Gerui2（1.Jingmen Municipal Institute for Food and Drug Control,Jingmen，Hubei，China 448124；2.Hubei Biocause Heilen Pharmaceutical Co.,Ltd.,Jingmen,Hubei,China 448000）

止咳定喘丸由苦杏仁（炒）、麻黃、石膏、紫蘇子（炒）、厚樸（姜制）、陳皮、甘草、罌粟殼（蜜炙）、茶葉等組方，具清熱宣肺、止咳平喘的功效，臨床用于咳嗽氣喘、久咳不止等癥。原質量標準［1］中既無鑒別也無含量測定。為提高質量控制標準，筆者參閱《中國藥典》及文獻［2-5］，采用高效液相色譜法測定苦杏仁苷的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000 pump液相色譜儀；BP211D型電子天平（德國 Sartorius公司）；AS51050A型超聲波清洗儀；GZX-9140MBE型數顯鼓風干燥箱；DZKW電子恒溫水浴鍋。苦杏仁苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110820-201305，供含量測定用，含量為 85.8%）；止咳定喘丸（批號為 121218，130103，130104，東芝堂藥業＜安徽＞有限公司）；水為純化水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agela VenusilMPC18柱（250mm ×4.6mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水（20 ∶80）；檢測波長：210 nm；流速：1.0mL /min；柱溫：室溫；進樣量：10μL。理論板數按苦杏仁苷峰計算應不低于7 000。

2.2 溶液制備

取苦杏仁苷對照品13.25mg，精密稱定，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇約60mL，超聲15min，冷卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含0.132 5mg的對照品貯備溶液。精密吸取對照品貯備溶液10mL，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含0.026 5mg的對照品溶液。取裝量差異下樣品（批號為121218），研細，取0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加二氯甲烷適量，加熱回流2 h，藥渣揮干，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇30mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液10 mL，精密加入流動相10mL，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方制備工藝制得不含苦杏仁的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取2.2項下3種溶液按擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。可見，在對照品溶液色譜主峰處，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰，表明樣品中其他成分對苦杏仁苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別吸取對照品溶液（0.026 5 g /L）2，4，8，16，32 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值。以進樣量（μg）為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程Y＝1.76×105X+8.47×104，r＝0.999 9（n＝5）。結果表明，苦杏仁苷進樣量在0.053 0～0.848 0μg范圍內與峰面積積分值具有良好的線性關系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續進樣6次，記錄色譜圖。結果的 RSD為0.92%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，避光放置，分別在0，2，4，6，8，10，16，20，24 h 時測定。結果苦杏仁苷峰面積的 RSD 為0.75%（n＝9），表明供試品溶液在避光條件下24 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品（批號121218）6份，依法測定。結果苦杏仁苷平均含量為3.75mg/g，RSD為0.83%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（3.75 mg/g，批號121218）約0.25 g，精密稱取6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入 2.2 項下苦杏仁苷對照品貯備溶液 5.0，5.0，7.0，7.0，9.0，9.0mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法處理，以外標法計算含量。結果批號為121218，130103，130104樣品中苦杏仁苷的含量分別為3.75，3.82，3.72mg /g。

3 討論

苦杏仁具有降氣、止咳、平喘的功效［2］，為方中主藥之一。苦杏仁苷含量高且性質穩定，常常作為質量控制指標，故選擇制劑中苦杏仁苷作為含量測定指標。

本試驗中以甲醇為溶劑，分別采用超聲、加熱回流和索氏提取3種方法進行比較，結果超聲30min處理提取效果最差，含量約為加熱回流和索氏提取的70%；加熱回流和索氏提取含量相近，因苦杏仁含脂肪油（杏仁油）較多，約50%［6］，加熱回流提取雜質峰較多；而索氏提取法先加二氯甲烷適量，加熱回流除去油脂成分后，再用甲醇加熱回流提取，可減少雜質峰干擾，達到較好的分離效果。故選擇索氏提取除雜質后，再水浴加熱回流方法提取。

文獻［2-5］報道有3種流動相，分別是乙腈-0.1%磷酸溶液（8 ∶92）、甲醇 -0.1%磷酸溶液（20 ∶80）和甲醇 -水（20 ∶80）。經試驗證明，3種流動相都可達到較好的分離效果。因流動相甲醇-水（20∶80）不含無機酸且對色譜柱影響小，好配制，故選擇甲醇-水（20∶80）作流動相，分離效果較好。

參考文獻：

［1］YBZ07852006，國家食品藥品監督管理局標準（試行）［S］.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:187-188.

［3］李 翔，劉皈陽，馬建麗，等.HPLC法測定克咳膠囊中苦杏仁苷含量［J］. 中國藥師，2013，16（7）:1 010-1 011.

［4］狄永良，徐海波.血府逐瘀湯顆粒質量標準研究［J］.中國藥業，2014，23（9）:31-32.

［5］周政政，郭永輝.苦杏仁苷純度標準物質研制和純度標準值及不確定度分析方法研究［J］. 醫藥導報，2014，32（4）:504-510.

［6］江蘇新醫學院.中藥大辭典（上冊）［M］.上海：上海科學技術出版社，1977:1 100-1 103.