細胞凋亡調控因子-2、p53基因、細胞增殖因子-67、細胞角蛋白-7在腺性膀胱炎與膀胱上皮癌組織中表達的研究

顏明根，馬小兵，張 勇，劉雪梅

有學者認為，腺性膀胱炎(cystitis g1andu1aris，CG)與慢性炎癥有關，而更多證據顯示其中有部分或全部病變為癌前病變［1－2］。細胞凋亡調控因子－2(bc1－2)、p53 基因(p53)、細胞增殖因子－67(ki－67)、細胞角蛋白－7(ck－7)是臨床上常見腫瘤免疫組化檢測方法。我院通過檢測腺性膀胱炎、膀胱癌組織以及正常膀胱黏膜組織中 bc1－2、p53、ki－67、ck－7 的表達，并行相關性分析，探討腺性膀胱炎和膀胱上皮癌的發生、發展的關系。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選用我院2005年1月至2008年12月手術切除并經病理學證實的腺性膀胱炎組織標本46例，為腺性膀胱炎組，其中男36例，女10例;年齡20～75歲;膀胱上皮癌石蠟組織標本21例，為膀胱上皮癌組，其中男16例，女5例;年齡45～85歲;正常膀胱黏膜30例為對照組，其中男21例，女9例;年齡19～65歲。

1.2 研究方法 免疫組化試劑盒及 p53、bc1－2、ki－67、ck－7單抗購自基因有限公司(丹麥DAKO)產品，均為工作液。石蠟包埋組織連續切片5張，層厚3 μm。其中1張行蘇木精－伊紅(HE)染色確定病理診斷，其余3份標本采用Envision兩步免疫組化染色法，分別檢測 p53、bc1－2、ki－67、ck－7。用 PBS(緩沖液)代替抗體作為陰性空白對照，所購DAKO公司的陽性片作為陽性對照。對免疫組織化學結果進行評估:p53以細胞核中有棕黃色顆粒為陽性細胞;bc1－2陽性表現為胞質彌漫性著色;ki－67陽性染色位于上皮細胞核內，判斷標準是陽性細胞≥25%為陽性病例。未及上述標準包括顯色強度與空白無明顯差別者為陰性。1.3 統計學處理 用SPSS 11.0統計軟件對數據進行處理，數據采用百分比表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 bc1－2陽性表達率比較 對照組陽性率是90.91%，腺性膀胱炎組陽性率是69.57%，膀胱上皮癌組陽性率是4.76%，3組人群bc1－2陽性率比較，差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

表1 3組人群bcl-2陽性表達率比較(例)

2.2 p53陰性表達率比較 膀胱上皮癌組陰性率是9.52%，與腺性膀胱炎組(84.78%)及對照組(81.82%)比較，差異有統計學意義(P＜0.01)。見表2。

表2 3組人群P53陰性表達率比較(例)

2.3 ki－67陰性表達率比較 對照組陰性率是72.73%，腺性膀胱炎組陰性率是71.74%，膀胱上皮癌組陰性率是23.81%，膀胱上皮癌組與前2組比較，差異有統計學意義(P＜0.01)。見表3。

表3 3組人群ki-67陰性表達率比較(例)

2.4 ck－7陰性表達率比較 對照組ck－7陰性率是9.09%，腺性膀胱炎組陰性率是21.74%，膀胱上皮癌組陰性率是9.52%。3組間比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

表4 3組人群ck-7陰性表達率比較(例)

3 討論

自德國醫生Von 1imbeck在1887年首次描述腺性膀胱炎，其發病機制至今仍未完全明了。以往有研究認為腺性膀胱炎是一種臨床上較為少見的膀胱上皮增生樣病變，國外有報道其發病率在0.1% ～1.9%［1］，但近年來國內有關腺性膀胱炎的報道明顯增多［2－3］。主要表現為血尿、尿頻、尿急、尿痛等。其一般病理過程為:上皮增生凹入成Brunn巢，其內出現裂隙，或形成分枝狀、環狀管腔，中心出現腺性化生形成腺體結構，同時伴有淋巴細胞和漿細胞的浸潤，故稱之為腺性膀胱炎［3］。目前許多學者認為腺性膀胱炎為癌前病變［4－5］。某些不典型的腺性膀胱炎可以診斷為膀胱癌，部分膀胱癌(具有假良性的形態)亦可低診斷為囊－腺性膀胱炎［6］。在分子學的研究上，毛全宗等［7］指出，腺性膀胱炎患者外周血淋巴細胞端粒長度明顯大于健康對照組，此結果的重要解釋是腺性膀胱炎患者體內存在端粒酶活性增強的可能性，進一步支持腺性膀胱炎是膀胱癌癌前病變的觀點。因此對腺性膀胱炎生物學轉歸的判斷顯得尤為重要。有些腺性膀胱炎患者要面臨膀胱全切的方案［8］。

標記物 bc1－2、p53、ki－67、ck－7 對于腫瘤的診斷和生物學轉歸在臨床上已廣泛應用。p53基因研究已成為腫瘤分子生物學的熱點，具有野生型和突變型兩種構型，突變型p53基因能促進癌細胞的生長、分化，維持基因組DNA的穩定。Fujimatot等［9］通過PCR方法研究認為腺性膀胱炎患者中，p53突變與膀胱腫瘤的分級、臨床分期及血管侵襲性等密切相關。張淑敏等［10］也發現p53、p21在膀胱腺癌中的表達高于腺性膀胱炎，發生腺性膀胱炎時，反復長期的感染可能導致p21、p53基因突變，導致細胞轉化。以上研究與本研究結果一致。本研究顯示:p53在正常膀胱粘膜組織、腺性膀胱炎以及膀胱癌組織中的表達依次上升，提示p53表達是組織發生惡變的指標之一。

bc1－2家族是細胞凋亡最重要的調控因子之一，稱為“存活基因”。bc1－2家族分為促凋亡蛋白(bax、bad 等)和抑凋亡蛋白(bc1－2、bc1－xL 等)，它們通過抑制細胞凋亡、誘導耐受放化療以及促進新生血管形成等機制在腫瘤發生、發展中起著重要的促進作用。越來越多的實驗表明，bc1－2家族成員在細胞凋亡的線粒體途徑中起重要調控作用［11－12］。本研究結果顯示bc1－2在正常膀胱黏膜組織、腺性膀胱炎以及膀胱癌組織中的表達依次下降。這一結果與桂律等［13］的研究結果相符，與 Robin 等［14］的研究結果相近，表明bc1－2在早期或低侵襲性尿路上皮癌中發揮作用。

ki－67是一種與細胞增殖相關因子，主要定位于細胞核，與細胞周期密切相連，在有絲分裂中起著維持DNA有規則結構的重要作用。ki－67在細胞周期的G、S、G2和M期均有表達，而在G0期缺如。由于其半衰期短，脫離細胞周期后迅速降解，能反映腫瘤細胞的增殖速率。ki－67是目前應用最廣泛的增殖細胞標志之一，己成為檢測腫瘤增殖活性最可靠的指標。而細胞過度分裂與增殖是腫瘤惡變的重要環節，因此檢測ki－67抗原表達有助于判斷腫瘤的生物學特性。本研究顯示:ki－67在正常膀胱黏膜組織、腺性膀胱炎以及膀胱癌組織中的表達依次上升，而且3組之間有顯著性差別。結合以上文獻提示，ki－67偏高表達是細胞過度分裂，組織發生惡變的指標之一。

細胞角蛋白(ck)是細胞骨架成分之一，迄今已發現20多種的亞型。ck－7是人細胞角蛋白一個亞型，正常表達于上皮細胞如乳腺、肺、胰腺、膀胱等腺上皮。ck－7在一些特異表型的腺癌(如:卵巢腺癌、乳腺癌、肺腺癌等)中表達。本研究顯示:ck－7在正常膀胱黏膜組織、腺性膀胱炎以及膀胱癌組織中的表達3組之間無顯著性差別。這有可能說明ck－7在腺性膀胱炎生物學轉歸中無意義;腺性膀胱炎生物學轉歸是移行細胞癌，而不是腺癌。當然，這點需要進一步研究。

抑癌基因野生型p53和凋亡抑制基因bc1－2表達的異常與尿路上皮癌的癌變中起重要作用。bc1－2表達的丟失，p53的高表達是浸潤型及低分化尿路上皮癌的特征之一。總之腺性膀胱炎向尿路上皮癌的發生、發展是一個涉及多因素、多基因、多分子水平變化的多階段過程，同時檢測 bc1－2、p53 和 ki－67對腺性膀胱炎預后及治療有一定的指導價值。

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