S?100和HPA蛋白在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達及意義

王尚凱，崔　瑩，劉　紅，高　冰?。ê幽鲜》馇鹂h人民醫(yī)院病理科，河南 封丘 500；鄭州市衛(wèi)生學(xué)校病理教研室，河南省武警總隊醫(yī)院，鄭州大學(xué)護理學(xué)院，河南鄭州50000）

S?100和HPA蛋白在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達及意義

王尚凱1，崔瑩2，劉紅3，高冰4（1河南省封丘縣人民醫(yī)院病理科，河南 封丘 453300；2鄭州市衛(wèi)生學(xué)校病理教研室，3河南省武警總隊醫(yī)院，4鄭州大學(xué)護理學(xué)院，河南鄭州450000）

目的：探討 S?100和 HPA在涎腺腺樣囊性癌（SACC）中的表達以及在嗜神經(jīng)侵襲和轉(zhuǎn)移方面的意義．方法：采用免疫組化SP法檢測44例涎腺腺樣囊性癌中S100 和HPA的表達．結(jié)果：S?100與HPA在腺樣囊性癌（SACC）中的表達與腫瘤嗜神經(jīng)侵襲性、局部侵襲性和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0．05）；與患者的年齡、性別和臨床分期無關(guān)（P＞0．05）．結(jié)論：S?100與HPA蛋白在腺樣囊性癌的嗜神經(jīng)侵襲與遠處轉(zhuǎn)移中起重要作用．

S?100；乙酰肝素酶；腺樣囊性癌；嗜神經(jīng)侵襲；遠處轉(zhuǎn)移

涎腺腺樣囊性癌（saliary gland adenoid cystic carcinoma，SACC）在涎腺腫瘤中的發(fā)病率較高，侵襲性強，遠處轉(zhuǎn)移率高，有典型的嗜神經(jīng)性，早期即可發(fā)生神經(jīng)侵襲和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致面癱、疼痛及麻木等神經(jīng)受損［1］和手術(shù)范圍難以確定的癥狀．在腺樣囊性癌的神經(jīng)侵襲研究中，發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞的施萬分化可能與侵襲神經(jīng)有關(guān)［2］，而S?100作為施萬細胞的標志物，最早被發(fā)現(xiàn)存在于膠質(zhì)細胞和神經(jīng)膜細胞以及它們的腫瘤中．S?100蛋白是一種高度酸性鈣結(jié)合蛋白，富含苯丙氨酸，相對分子質(zhì)量為21 000．乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是近年來發(fā)現(xiàn)的與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移以及腫瘤新生血管形成有關(guān)的一種重要功能酶［3］．本研究采用免疫組化霉菌抗生物素蛋白?過氧化物酶連結(jié)（streptavidin?perosidase，SP）法，檢測腺樣囊性癌中S?100和HPA蛋白的表達，探討表達的意義．

1　資料和方法

1．1臨床資料選取2000～2012年鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔外科手術(shù)切除資料詳實的腺樣囊性癌病例44例，所有病例術(shù)前均無放療、化療史且均經(jīng)過病理確診．男20例，女24例；年齡19～78（中位52）歲；有區(qū)域淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移15例；TNM臨床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期16例，Ⅲ期10例，Ⅳ期7例；有神經(jīng)侵襲癥狀13例，無侵襲11例．

1．2主要試劑兔抗人S?100多克隆抗體，兔抗人HPA單克隆抗體，即用型免疫組化SP法檢測試劑盒，DAB顯色試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司．

1．3實驗方法免疫組化SP法按試劑盒說明進行操作，每例蠟塊進行連續(xù)切片3張，每張4 um．一張染HE作對照觀察，兩張分別作S?100和HPA抗體染色．以PBS代替一抗作空白對照，用已知陽性表達的神經(jīng)鞘瘤和乳腺癌分別作S?100和HPA的陽性對照．

1．4結(jié)果判定免疫組化結(jié)果以細胞質(zhì)和細胞核中呈棕黃色染色為陽性表達．以染色強度和陽性細胞比例判斷陽性表達情況：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，深褐色為4分；陽性細胞數(shù)占所有腫瘤細胞的百分率≥5%判定為陽性［4］，陽性細胞率＜5%為0分，5%≤陽性細胞率＜10%為1分，10%≤陽性細胞率＜50%為2分，陽性細胞率≥50%為3分．表達強度＝染色強度×陽性細胞比例，0～2分為（－），3～4分為（＋），5～7分為（＋＋），8～9分為（＋＋＋）．

1．5統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13．0進行統(tǒng)計學(xué)分析，比較采用x2檢驗；相關(guān)分析使用Spean?man相關(guān)分析，P＜0．05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義．達率為97．73%，HPA表達率為63．64%，二者的表達呈正相關(guān)（r＝0．76，P＜0．05）．S?100與HPA蛋白在腺樣囊性癌（SACC）組織中的表達與腫瘤嗜神經(jīng)侵襲性、局部侵襲性和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0．05）；與患者的年齡、性別和臨床分期無關(guān)（P＞0．05，表1）．

2　結(jié)果

S?100表達于腺樣囊性癌細胞的細胞核，陽性細胞染色較深（圖1A），HPA表達于腫瘤細胞的細胞質(zhì)中（圖1B）．二者在腺樣囊性癌均呈高表達，S?100表

圖1　S100和HPA在腺樣囊性癌中的表達

表1　S100與HPA在腺樣囊性癌中的表達及與臨床病理之間的關(guān)系［n（%）］

3　討論

腺樣囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）可發(fā)生于任何大小的涎腺，約占涎腺上皮性腫瘤的10%，涎腺惡性上皮性腫瘤的21．1%［5］．由于腺樣囊性癌發(fā)病隱匿，具有局部浸潤性生長和沿神經(jīng)血管束擴散的特性［1］，術(shù)后易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，難以控制．侵襲和轉(zhuǎn)移是腺樣囊性癌的重要生物學(xué)特征，也是目前研究的熱點．其過程復(fù)雜，腫瘤細胞穿越細胞外基質(zhì)（extracel?luler matrices，ECM）和基底膜（basement membrane，BM）組成的組織學(xué)屏障以及腫瘤新生血管形成是這一過程的重要環(huán)節(jié)．腫瘤沿神經(jīng)浸潤是指腫瘤細胞包繞神經(jīng)纖維，并進入神經(jīng)束膜內(nèi)沿其擴展的局部浸潤轉(zhuǎn)移現(xiàn)象．大量研究證明［6］腺樣囊性癌出現(xiàn)嗜神經(jīng)侵襲性是癌細胞向施萬細胞分化的內(nèi)在原因．

1965年，Moore發(fā)現(xiàn)了S?100蛋白，其可溶解在100%硫酸銨溶液中形成鈣結(jié)合蛋白［7］，它是一種小分子酸性蛋白，由兩個亞基組成．S?100是施萬細胞的標志物，在腺樣囊性癌中高表達，提示腺樣囊性癌可能發(fā)生施萬細胞分化，而這些肌上皮來源的腺樣囊性癌細胞發(fā)生了神經(jīng)膜細胞分化進而具有了嗜神經(jīng)侵襲能力．

乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是新近克隆出來的一種作用于細胞外基質(zhì)多聚糖成分的酶—即腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵酶，它不僅破壞組織屏障，促進腫瘤細胞侵入基質(zhì)和血管壁，而且通過調(diào)節(jié)生長因子的活性誘發(fā)新生血管的生成，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［3］．在正常情況下，HPA主要分布在胎盤、免疫器官（如脾臟、淋巴結(jié)、胸腺等）、免疫細胞（如中性粒細胞、單核巨噬細胞、淋巴細胞、血小板等）、平滑肌細胞和培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞中，而在成熟組織中如心、腦、肺、肝、骨骼肌、腎和胰腺等則無明顯表達［8］，而在生長和轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤細胞中該酶普遍存在，大部分研究觀測到該酶定位于胞漿［9］．在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，S?100與HPA在腺樣囊性癌蛋白上的表達是一致的，與腫瘤嗜神經(jīng)侵襲性、局部侵襲性和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0．05）；與患者的年齡、性別和臨床分期無關(guān)（P＞0．05）．特異性的標志物可以使我們更好的了解腺樣囊性癌的特性，不僅可以指導(dǎo)臨床，也為腺樣囊性癌的轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵襲的研究提供依據(jù)．

［1］高太虎，王旭紅，米玉錄．涎腺腺樣囊性癌130例療效分析［J］．中國藥物與臨床，2004，12（4）：966－967．

［2］孫沫逸，陳偉，楊連甲，等．許旺氏標記物GFAP與肌上皮細胞標記物α?SMA在涎腺腺樣囊性癌中共表達［J］．中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2006，41（8）：461－463．

［3］Elkin M，Ilan N，Ishai?Michaeli R，et al．Heparanase as mediator of angiogenesis：mode of action［J］．FASEB J，2001，15（9）：1661－1663．

［4］Kawasaki H，Altieri D C，Lu C D，et al．Inhibition of apoptosis by survivin predicts shorter survival rates in colorectal cancer［J］．Cancer Res，1998，58（22）：5071－5074．

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Expression and significance of S?100 protein and HPA protein in salivary gland adenoid cystic carcinoma

WANG Shang?Kai1，CUIYing2，LIU Hong3，GAO Bing4
1Department of Pathology，People's Hospital of Fengqiu，F(xiàn)engqiu 453300，China；2PathologyStaff Room，ZhengzhouHealth School，Zhengzhou 450000，China；3Armed Police Corps Hospital in Henan Province，Zhengzhou 450000，China；4Nursing School of Zhengzhou University，Zhengzhou 450000，China

0　引言

A IM：To explore the protein expression of S?100 and heparanase（HPA）in saliary gland adenoid cystic carcinoma （SACC），and its significance in perineural invasion and metastasis．M ETHODS：The expression of S?100 and HPA of 44 patients with saliary gland adenoid cystic carcinoma were detected by immunohistochem ical streptavidin?perosidase（SP）method．RE?SULTS：The protein expression of S?100 and HPA in SACC was related to tumor perineural invasion，local aggressive and distant metastasis（P＜0．05），and no relation was observed between protein expression of S?100 and HPA in SACC in patient's age，gender as well as clinical stages（P＞0．05）．CONCLUSION：S?100 protein and HPA protein plays an important role inperineural invasion and distantmetastases of adenoid cystic carcinoma．

S?100；HPA；SACC；perineural invasion；distant metastasis

R739．8

A

2095?6894（2015）08?004?03

2015－07－25；接受日期：2015－08－10

王尚凱．E?mail：WANGshk01＠163．com