高效液相色譜法測定復方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度

范亞剛 張利 李萍

摘要：目的采用高效液相色譜法測定復方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度。方法采用Kron.asil 100 -5C18（150 x4.6 mm）色譜柱，流動相為乙晴：水（55：45），柱溫30℃，流速1.0mL- min-1，檢測波長210 nm。結果復方磷酸萘酚喹片中青蒿素進樣量在1.32-26.4μg· mL-1范圍內線性關系良好（r=1），平均回收率為100. 83% ，RSD=1.76%（n=9）。結論本方法測定簡便、快速，結果準確、可靠，重現性好，適用于復方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度的測定。

關鍵詞：高效液相色譜；復方磷酸萘酚喹片；青蒿素；溶出度測定

中圖分類號：R284

文獻標志碼：A

文章編號：1007-2349（2015） 03-0062-03

復方磷酸萘酚喹片是昆藥集團與軍事醫學科學院微生物流行病所合作開發研究的磷酸萘酚喹與青蒿素以1：2.5的比例組成的復方抗瘧口服制劑，臨床上主要用于惡性瘧、間日瘧的治療，能快速控制臨床癥狀與殺蟲速度迅速，不良反應輕微，惡性瘧復燃率低等優點，具備了青蒿素的速效和萘酚喹殺蟲徹底且持效的特點，具有高效、速效、長效作用，復燃率低，毒副反應小，使用方便的優點，且符合復方配伍原則，是一個非常安全、有效的、理想的創新復方抗瘧藥，屬于我國基本藥物。

復方磷酸萘酚喹片現行質量標準為國家食品藥品監督管理局藥品標準ws-772（X- 617）- 2001（規格為125mg）和YBH00312007（規格為250mg）。但現行標準中青蒿素溶出度的檢驗方法設定有差異，限度值也不一致，所采用的溶出介質不一樣，造成溶出度結果精密度偏低（見表1）。

青蒿素溶出度采用堿水解30min后加酸中和用高效液相色譜法測定，操作繁瑣、誤差較大，液相色譜圖中青蒿素分解為兩個峰，不易分離，且樣品不穩定，造成測定誤差，對準確評價藥品質量產生影響。復方磷酸萘酚喹片中的青蒿素為難溶性組份，難溶性口服固體制劑在體內的生物利用度是當前對藥品質量關注的一個重點。基于上述原閑，筆者認為應統一并合理修訂質量標準，減少操作誤差，使測定結果更為準確，以便更為科學、合理的評價藥品質量，故參照《中國藥典》[1]現行標準[2-3]進行了溶出度新方法的研究。1 儀器與試藥

Agilent technologies HP1200高效液相色譜儀；電子天平BP-211D； RCZ-8M自動取樣溶出儀；ZKT-18M真空脫氣儀。

十二烷基硫酸鈉（國藥集團化學試劑有限公司；批號：F20110804）；青蒿素對照品（中國藥品生物制品鑒定所；批號：100202-201004；含量為98.8%）；乙腈（Merck KGaA批號：JA024730）為色譜純；純水；復方磷酸萘酚喹片（昆明制藥集團股份有限公司，批號：12JK1、12DB、14FR1、131A2、14CD2、14FL）。2方法與結果2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil 100 - SC18（ 150×4.6 mmE82180）色譜柱；流動相：乙腈一水（55：45）；檢測波長：210 nm，流速1.0mL.min-1，柱溫30C，進樣量：20μL。在該色譜條件下，青蒿素出峰結果見圖l。2.2對照品貯備液的制備 精密稱取青蒿素對照13.2 mg置于50 mL容量瓶中加流動相（乙腈：水=55：45）溶解并稀釋至刻度搖勻即得對照品貯備液。2.3 方法學考察2.3.1 線性關系的考察取“2.2”項下對照品儲備液適量，依次取5、10、20、50、100¨l注入液相色譜儀中，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程

為：y，= 899.84x - 2.9185（r=1.000），表明進樣量在1.32-26.4μg之間線性關系良好。（見圖2）2.3.2精密度試驗取“2.2”項下對照品儲備液進行檢測，照液相色譜條件重復進樣5次（n=5），RSD為0.09%，表明精密度良好。2.3.3穩定性試驗取“2.2”項下對照品儲備液進行檢測，照液相色譜條件分別于0、2、6、12、24 h進行測定，RSD為0. 33%，表明青蒿素在2 h內基本穩定。2.3.4檢測限和定量限測定精密量取“2.2”項下對照品溶液適量，加流動相定量稀釋，照液相色譜條件測定，按信噪比S/N=3計算檢測限為41.66 ng，S/N=10計算定量限為137ng2.3.5重復性試驗 取復方磷酸萘酚喹片（批號：131A2規格為125 mg）按照溶出度測定法，于45 min取樣測定，同法平行測定3次（n=18）；青蒿素溶出平均值為79. 31%，RSD%為1. 99%，表明本方法重現性良好。2.3.6耐用性試驗取樣品溶液，分別采用不同比例的流動相、不同規格的色譜柱、不同柱溫進行測定，結果表明該方法耐用性良好。2.3.7 回收率試驗按溶出度測定法，于45 min取樣作為供試品貯備液；分別取一定量供試品貯備液，加入對照品溶液制成80%、l00%、120%的供試品溶液各3份，照液相測定方法測定，平均回收率為100. 83%，RSD%為1.74%，表明該方法的回收率良好。結果見表2。2.4.1溶出條件溶出方法漿法；溶出介質：為0. 5%十二烷基硫酸鈉水溶液；轉速：lOOr/min；溫度：37℃2.4.2溶出曲線參考文獻資料[4-6]和現行標準，我們采用4種不同pH值的溶出介質（pH值分別為1.2、4.0、6.8和水，分別添加表面活性劑），對樣品進行了溶出曲線考察（規格為125 mg樣品溶出介質為500 mL，規格為250 mg樣品溶出介質為1000 mL），取樣時間為5、10、30、45、60、90、120 min，以溶出時間為橫坐標，以溶出量為縱坐標，繪制溶出曲線（見圖2），確定了最終的溶出條件和限度。3討論

1.經試驗證明該法簡便、快速、靈敏度高、結果準確，兩種規格均可使用該方法測定，并且可以普遍用于青蒿索類復方制劑溶出度測定，6批樣品的溶出量均在70%以上，故溶出限度應定為標示量的70%。

2.藥物溶出度能區分同一制劑生物利用度的差異，是口前較能反應藥物體內外相關性的體外測試項日，對于控制藥物質量保證藥物的有效性有重要意義。由于復方磷酸萘酚喹片為我國獨創品種，尚未進行生物利用度方面的考察，無法獲得與生物利用度相關的標準溶出曲線及參比制劑，我們采用參考文獻中使用的4種不同pH值的溶出介質來進行溶出曲線考察，青蒿素組份在四種介質中溶出行為均符合難溶性藥物的溶出規律，比較四種介質的溶出曲線，最后選擇了溶出相對較快及區分力較好的0. 5%十二烷基硫酸鈉水溶液作為最終的溶出介質。參考文獻：[1]衛生部.中國藥典[M].北京：化工出版社，2001.[2]國家食品藥品監督管理局藥品標準WS- 772（X- 617）- 2001.[3]國家食品藥品監督管理局藥品標準YBH00312007.[4]李慧義，閆研，等.HPLC法測定青蒿素哌喹片中青蒿素的溶出度殷果[J].藥物分析雜志，2014.（2）：[5]張啟明，謝沐風.采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內在質量[J].中國醫藥工業雜志，2009，40（12）.[6]日本醫療用醫藥品品質情報集（日本參比制劑目錄、橙皮書）

（收稿日期：2014-12-15）