BML-111對(duì)野百合堿致大鼠肺動(dòng)脈高壓的作用及其機(jī)制的研究

陳永梅　張昭勇　陳玲　向勇　秦成名

BML-111對(duì)野百合堿致大鼠肺動(dòng)脈高壓的作用及其機(jī)制的研究

陳永梅張昭勇陳玲向勇秦成名

目的 觀察脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)野百合堿（MCT）誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠的作用及其機(jī)制。方法 選擇SD大鼠24只，隨機(jī)分為三組：C組、pH組、B組，pH組和B組大鼠行皮下注射野百合堿50μg/g，C組注射等量生理鹽水，B組腹腔注射BML-1111mg/（kg·d），連續(xù)4周。觀察平均肺動(dòng)脈壓力（MPAP）、右心室收縮壓（RVSP）、右心室（RV）/［左室（LV）+室間隔（S）］、肺組織白介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平的變化。結(jié)果 pH組、B組與C組比較，MPAP、RVSP、RV/（LV+S）、肺組織IL-6及TNF-α水平高于C組（P＜0.05）；B組與pH組比較，MPAP、RVSP、RV/（LV+S）、肺組織IL-6及 TNF-α低于pH組（P＜0.05）。結(jié)論 脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111可減輕野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈壓力，其機(jī)制可能與減輕肺組織IL-6及 TNF-α水平，抑制肺組織炎癥有關(guān)。

脂氧素受體激動(dòng)劑 野百合堿 肺動(dòng)脈高壓 大鼠

肺動(dòng)脈高壓是臨床常見疾病，其發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，傳統(tǒng)治療效果并不滿意［1］。近年來炎癥因素的作用逐步得到重視，炎癥因素導(dǎo)致肺小血管功能紊亂、內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖，平滑肌細(xì)胞過度增生，最終肺部細(xì)小動(dòng)脈管腔狹窄，肺動(dòng)脈高壓形成［2］。BML-111是一種脂氧素類似物，其血管內(nèi)皮受體結(jié)合后可促進(jìn)炎癥介質(zhì)消退，減輕血管內(nèi)皮重構(gòu)，因此有可能成為治療肺動(dòng)脈高壓的藥物。作者自2012年1月至12月在以往研究［3］的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察白介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）在野百合堿（MCT）誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中的變化，并進(jìn)一步分析其是否參與了BML-111的治療作用。

1　臨床資料

1.1一般資料 選擇健康雄性SD大鼠24只，體重200～230g，由湖北醫(yī)藥學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備包括天平、壓力換能器、注射器、水合氯醛、氟利多、肝素等大鼠試驗(yàn)用操作器械。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 （1）實(shí)驗(yàn)分組與模型建立：將24只大鼠分為C組、pH組和B組三組，每組各8只。pH組和B組大鼠給予皮下注射野百合堿50mg/kg；C組注射等量生理鹽水，注射完成后將大鼠放回籠中常規(guī)喂養(yǎng)；B組自野百合堿注射的當(dāng)日起，腹腔注射BML-1111mg/（kg·d），連續(xù)4周，于大鼠麻醉前，術(shù)后第7、14、21、28天記錄體重變化情況。（2）肺動(dòng)脈壓力測量：將10cm硬膜外導(dǎo)管末端1～1.5cm加熱拉伸，并使其彎曲成魚鉤狀，用注射器注水成功表示肺動(dòng)脈導(dǎo)管通暢。飼養(yǎng)4周后將大鼠取出進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，100ml水合氯醛加入5mg氟哌利多，麻醉采用對(duì)大鼠行腹腔注射，劑量為3ml/100g，麻醉后將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)上，術(shù)中持續(xù)面罩給氧。分離大鼠右側(cè)頸外靜脈，將充滿肝素鹽水的右心導(dǎo)管插入，一端連接換能器另一端與監(jiān)護(hù)儀相連，當(dāng)置入導(dǎo)管進(jìn)入右心室穩(wěn)定后記錄其右室收縮壓（RVSP），監(jiān)護(hù)儀出現(xiàn)肺動(dòng)脈波形時(shí)，待其穩(wěn)定后記錄平均肺動(dòng)脈壓力（MPAP）。壓力測量完畢后處死大鼠，游離右室（RV）和左室+室間隔（LV+S）并稱重，計(jì)算（RV）/（LV+S）。（3）肺組織IL-6及TNF-α含量的測定：肺動(dòng)脈壓力監(jiān)測完畢后處死大鼠，取大鼠肺組織保存于-80℃冰箱。檢測時(shí)將組織勻漿按照試劑盒要求，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測肺組織IL-6和TNF-α水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用（x±s）表示，對(duì)各組大鼠體重變化的比較以及對(duì)血流動(dòng)力學(xué)改變和肺部炎癥因子的情況比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1大鼠一般情況 所有大鼠均順利完成實(shí)驗(yàn)。4周結(jié)束后，pH組、B組大鼠與C組大鼠比較，注射后表現(xiàn)為進(jìn)食、活動(dòng)減少，生長減慢，pH組表現(xiàn)更重于B組。三組大鼠之間體重增長速度存在差異，C組增長最快，B組次之，pH組最慢（P＜0.05）。不同時(shí)間點(diǎn)的體重差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　各組大鼠體重變化情況［g，（x±s）］

2.2血流動(dòng)力學(xué)改變 見表2。

表2　各組大鼠MPAP、RV/（LV+S）、RVSP情況

表2　各組大鼠MPAP、RV/（LV+S）、RVSP情況

注：與C組比較，*P＜0.05；與pH組比較，#P＜0.05。1mmHg= 0.133 kPa

測量指標(biāo)MPAP（mmHg）RVSP（mmHg）RV/（LV+S）C組18.4±2.320.6±3.80.238±0.028 pH組36.9±6.2 *49.6±8.2*0.382±0.048* B組28.6±5.5*#37.2±7.2*#0.322±0.039*#

2.3肺組織IL-1β和TF的含量測定 見表3。

表3　各組大鼠肺組織IL-6和TNF-α含量的比較

表3　各組大鼠肺組織IL-6和TNF-α含量的比較

注：與C組比較，*P＜0.05；與pH組比較，#P＜0.05

測量指標(biāo)IL-6（pg/ml）TNF-α（pg/ml）C組72±2266±21 pH組1782±479 *476±128 * B組1268±392*#284±97*#

3　討論

肺動(dòng)脈高壓是臨床眾多疾病發(fā)展的終末階段，其發(fā)病機(jī)制目前仍不完全清楚，其中炎癥反應(yīng)在肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要作用。其中包含有多種炎癥介質(zhì)如白介素、腫瘤壞死因子等，這些炎癥介質(zhì)是導(dǎo)致肺血管發(fā)生形態(tài)學(xué)改變的基礎(chǔ)，并最終形成肺動(dòng)脈高壓［4～7］。本實(shí)驗(yàn)中采用經(jīng)典大鼠皮下注射MCT方法誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓，模型制作成功，實(shí)驗(yàn)大鼠行MCT注射后，pH組大鼠生長明顯減慢，MPAP、RV/（LV+S）、RVSP比C組升高，說明pH組大鼠出現(xiàn)了肺動(dòng)脈高壓。由ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)肺組織IL-6、TNF-α含量均較正常對(duì)照組升高，說明MCT注射后誘發(fā)大鼠肺組織產(chǎn)生了炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步驗(yàn)證了炎癥反應(yīng)在肺動(dòng)脈高壓形成中具有重要作用［1］。

脂氧素是機(jī)體內(nèi)一種抗炎介質(zhì)，它作用于脂氧素受體后可發(fā)揮強(qiáng)大的抗炎作用，促進(jìn)炎癥消退［8，9］，但是關(guān)于其對(duì)肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展過程中的作用研究不多。考慮到肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型較多，但是野百合堿模型建立效果易確切，在實(shí)驗(yàn)中選擇此注射為動(dòng)物模型。在模型的構(gòu)建開始，作者也參考了其他的研究［10］。繼往的研究中作者發(fā)現(xiàn)幾種炎癥因子作用于野百合堿誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓大鼠時(shí)，BML-111通過減輕肺組織IL-8、ICAM-1、MCP-1的水平，減輕肺血管重構(gòu)，從而減輕肺動(dòng)脈高壓嚴(yán)重程度［3］。本實(shí)驗(yàn)延續(xù)了以往的研究，并發(fā)現(xiàn)B組大鼠注射MCT后，4周內(nèi)連續(xù)采用1mg/（kg·d）劑量的BML-111腹腔注射，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MPAP、RV/（LV+S）、RVSP升高幅度小于pH組，進(jìn)一步說明BML-111具有抑制MCT誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈壓力升高的作用。ELISA分析發(fā)現(xiàn)B組大鼠肺組織IL-6、TNF-α的升高幅度與pH組相比明顯減輕，說明B組肺動(dòng)脈壓力升高較小的原因可能與BML-111減輕肺組織IL-6、TNF-α水平有關(guān)，減輕了炎癥所導(dǎo)致的肺血管重構(gòu)，這與其它研究［11］的結(jié)果相一致，通過TNFα阻斷劑可有效抑制肺動(dòng)脈高壓。

總之，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111通過減輕肺組織炎癥反應(yīng)，具有減輕MCT誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈壓力升高的作用。其通過抑制炎癥改善肺動(dòng)脈高壓作用，從而為臨床治療肺動(dòng)脈高壓提供了可能。

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3 龔興瑞，秦成名，王賢裕，等.脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈壓力的影響.湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，32（2）：146～149.

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Objective To investigate the effect of BML-111 on rats pulmonary arterial hypertension induced by monocrotaline and mechanisms . Methods 24SD rats were randomly allocated into three groups： C group，pH group and B group，Both pH group and B group processed subcutaneous injection of 50μg/g monocrotaline while C group received same volume of saline，B group performed intraperitoneal injection of BML-111 1mg/kg/d from the day immediately as monocrotaline was injected. The observation： MPAP，RVSP，RV/（LV+S），the pulmonary tissue IL-6 and TNF-α. Results The pH group and B group developed higher level of MPAP，RVSP，RV/（LV+S），the pulmonary IL-6 and TNF-αas compared with C group（P＜0.05），B group got lower increase of MPAP，RVSP，RV/（LV+S），the pulmonary IL-6 and TNF-αas compared with pH group（P＜0.05）. Conclusions BML-111 can ameliorate pulmonary arterial hypertension，inhibition of the pulmonary tissue infl ammation may be a potential cause.

Monocrotaline Pulmonary Arterial Hypertension Rats

湖北省十堰市科技局指導(dǎo)項(xiàng)目（ZD20111016）

442000 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院