中藥組方治療鴨疫里氏桿菌、大腸桿菌混合感染試驗

徐光科 吳海港 陳宏智

摘要：對“加味附子瀉心湯”治療鴨疫里氏桿菌、大腸桿菌混感病例進行臨床拆方治療試驗，選用死亡率、治愈率、免疫器官指數(shù)（脾臟指數(shù)、腔上囊指數(shù)、胸腺指數(shù)）、血液生化指標（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽固醇、總蛋白）作為臨床評價體系對“加味附子瀉心湯”治療效果進行綜合評價，最終確定：黃連、黃芩、茵陳、丹參、川芎、附子為最佳有效組方。治愈率86.3%、保護率90.7%；組方能顯著提高提高感染鴨只的免疫力、提高免疫指數(shù)。降低感染鴨只血液膽固醇含量，抑制肝細胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減輕肝細胞的壞死。

關(guān)鍵詞：鴨疫李氏桿菌；大腸桿菌；中藥；治療效果

鴨疫里氏桿菌病是由鴨疫里氏桿菌引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。該病呈急性或慢性敗血癥過程，以纖維性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎為特征。

鴨大腸桿菌病“是由禽致病性大腸桿菌所引起的局部或全身性感染的疾病，兩種病在臨床上常呈混合感染”且二者在臨床癥狀病理變化及流行病學(xué)等方面都存在諸多相似之處不易區(qū)別。

本研究根據(jù)中獸醫(yī)扶正驅(qū)邪、標本兼治的理論，以清熱燥濕、平肝利膽、活血化瘀、溫中為治則，選取黃連、黃芩、茵陳、葉下珠、丹參、川芎、附子等中藥按照一定比例組成組方，對人工感染鴨疫里默氏桿菌、大腸桿菌的鴨只進行治療試驗，觀察中藥復(fù)方治療效果，從而為篩選出療效確實中藥組方提供堅實的理論和臨床依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 原料試驗動物為7日櫻桃谷鴨購信陽華英集團。試驗用菌種RA，血清型為（1型），E.coli，血清（078）購自中國獸藥監(jiān)察所。黃連、黃苓等8味中藥購自信陽市藥材公司；試驗培養(yǎng)基為TSA胰酶大豆瓊脂（TSA）、胰酶大豆肉湯（TSB）、麥康凱培養(yǎng)基。

血清總膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和血清總蛋白質(zhì)測定試劑盒。（南京建成科技有限公司產(chǎn)品）

1.1.2 主要儀器專用培養(yǎng)皿；全自動生化分析儀（SYNCHRON CX5）；紫外一可見分光光度計（UV-1601）；RE10-50旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮）。

1.2 中藥組斤和中藥藥液的制備

1.2.1 中藥組方根據(jù)中藥組方原則，做成6個試驗組分別為：方I黃連、黃芩、葉下珠、丹參、川芎；方Ⅱ黃連、黃芩、茵陳、丹參、川芎；方Ⅲ黃連、黃芩；方Ⅳ黃連、黃芩、葉下珠、丹參、川芎、附子；方V黃連、黃芩、茵陳、丹參、川芎、附子；方Ⅵ黃連、黃芩、附子。

1.2.2 中藥藥液的制備準確稱取中藥粉末（過20目篩），用10倍溫水浸泡12h，100℃煎煮三遍，300目紗布過濾，，合并藥液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器濃縮中藥液濃度為1g/mL，加1%的山梨酸鉀，分裝，滅菌備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 菌懸液的制備

將鴨疫里默氏桿菌接種于10mL的滅菌大豆胰酶肉湯+2%的小牛血清培養(yǎng)基中，在37℃恒溫箱中孵育增菌30h后作為感染原菌液；將原菌液用滅菌生理鹽水稀釋至1×l0⁵CFu/mL備用。

大腸桿菌菌種接種于麥康凱平板，37℃、24h后，挑選出典型菌落，放于肉湯中，在37℃環(huán)境下培養(yǎng)46h取出；用生理鹽水校正至1麥氏比濁管標準，使其含菌量為1×l0⁵CFu/mL備用。

1.3.2 抗感染療效試驗

選7日齡淮南麻鴨隨機分成8個組，每組50只一組，將分好組的試驗鴨除空白對照組外每組鴨腹腔注入預(yù)試驗中的正式攻毒鴨疫里默氏桿菌菌液1×l0⁵CFu/mL，0.5mL，大腸桿菌1×l0⁵CFu/mL，0.5mL于感染后記錄7d內(nèi)鴨的死亡數(shù)；死亡鴨及時解剖。每組分別灌服中藥組方I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V、Ⅵ（感染后2d給藥、1.5mL/羽、每天兩次連用3～5d），Ⅶ組為模型對照組（只感染細菌不給藥），Ⅷ組為空白對照（不感染細菌也不給藥，正常飼養(yǎng)）

各鴨組在相同條件下隔離飼養(yǎng)，連續(xù)觀察7d統(tǒng)計鴨的死亡率、治愈率、有效率。

1.3.3 生理生化試驗

攻毒治療試驗結(jié)束后3d，從各組存活鴨只中隨機抽取5只鴨、清晨6點采血，4000r/min轉(zhuǎn)離心，收集血清測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶，總膽固醇和血清總蛋白。鴨只采血采血后稱重、屠宰，取脾臟、胸腺和腔上囊，去除結(jié)締組織后稱重，計算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=器官重（g）/活體重（kg）

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗調(diào)查數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0軟件進行單因素方差統(tǒng)計分析，試驗結(jié)果以平均值±標準差）表示。

2 結(jié)果分析

2.1 鴨感染細菌后發(fā)病情況和病理變化

雛鴨接種菌液后第3-5天，有鴨只死亡，病鴨（出現(xiàn)拉稀、昏睡、食欲減退等臨床不適癥狀）持續(xù)增多，到第5-7天，新死亡鴨只持續(xù)減少，1周內(nèi)死亡48.2%。病例剖檢，前期死亡鴨只病理癥狀不明顯，后期死亡鴨只肝臟灰黃，個別出現(xiàn)青綠色。其他臟器無明顯癥狀。

2.3 抗感染治療結(jié)果

抗感染試驗的結(jié)果見表1。從表1可以看出，治療組的死亡率極顯著低于Ⅶ組治愈率、保護率、顯著高于Ⅶ組；V組的死亡率最低、治愈率和保護率最高；添加附子各組死亡率低于不添加附子組。

2.4 免疫器官指數(shù)

各試驗組鴨的免疫器官指數(shù)測定結(jié)果見表2。由表2可知鴨接種菌株后其脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)相比健康對照組略有降低、差異不顯著（P>0.05）。第v組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)最高和其他各組相比差異顯著（P<0.05）；第Ⅱ組胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)高于Ⅷ組差異顯著（P<0.05）；第v組胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)高于第Ⅱ組差異顯著（P<0.05）。

2.5 血清生化指標

各試驗組鴨的血清生化指標測定結(jié)果見表3。由表3可知鴨接種菌株后，總膽固醇顯著上升（P<0.05），谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白含量變化不大，差異不顯著（P>0.05）；鴨灌服中藥后總膽固醇量有所下降和第Ⅶ相比差異顯著（P<0.05）；第V組降幅明顯和其他各組相比差異顯著（P<0.05）。灌服第V組中藥能顯著降低發(fā)病鴨的總膽固醇含量。

3 結(jié)論與討論

本試驗以7日齡淮南麻鴨為靶標動物、以RA，血清型為（1型），E.coli，血清（078）為毒株攻毒、7日內(nèi)動物陸續(xù)發(fā)病死亡率48.2%；病死鴨剖檢以纖維性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎為特征；發(fā)病鴨胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、腔上囊指數(shù)略有下滑，差異不顯著；發(fā)病鴨只血清總膽固醇含量下降明顯（P<0.05）。

本試驗對“附子瀉心湯”進行了拆方和加減治療試驗，不同用藥組病鴨死亡率從9.3%～17.2%，治愈率73.6%～86.7%，保護率87.3%～90.7%。第v組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)最高和其他各組相比差異顯著（P<0.05）；鴨灌服中藥后總膽固醇量有所下降和第Ⅶ相比差異顯著（P<0.05）；第V組降幅明顯和其他各組相比差異顯著（P<0.05）。方Ⅱ；治療效果方V>方Ⅳ>方I>方Ⅵ>方Ⅲ>方Ⅱ。

本試驗證實黃連、黃芩、茵陳、葉下珠、丹參、川芎附子組方對鴨疫里氏桿菌、大腸桿菌混合感染有很好的治療效果，促進鴨免疫器官的發(fā)育、改善病鴨的血清生化指標。