血清轉化生長因子β1水平與肺結核活動性的關系

姜君

（宜昌市第三人民醫院，湖北 宜昌 443000）

結核病主要免疫保護機制是細胞免疫，在結核病中轉化生長因子β1（TGF－β1）能夠抑制T 細胞的反應，也能使巨噬細胞失活，可能是結核病免疫發病中的一個關鍵因素［1］。為此，我們對726例患者TGF－β1濃度水平進行測定，探討其濃度水平與肺結核活動性的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年5月至2014年3月在我院門診或住院診療的患者共726例，分為活動性肺結核組（活動組）、非活動性肺結核組（非活動組）、肺炎組及健康志愿者組，以健康志愿者為對照組。其中男379例，女347例，年齡18～77歲，平均45.5歲。

1.2 診斷標準 活動性肺結核組235例，按照肺部病灶范圍分為≥4 個肺野組92例，＜4 個肺野組143例，均符合活動性結核病診斷標準，診斷標準以中華醫學會結核分會制定的《肺結核診斷和治療指南》為依據。非活動肺結核組為175例，入選標準：（1）X 線檢查肺部僅有鈣化、纖維化條索影或硬結灶，痰結核菌檢查陰性；（2）痰結核細菌學陽性患者完成規定的療程后連續3次涂片結果陰性，其中2次在完成治療時；（3）痰結核菌檢查陰性患者抗結核治療＞6個月，終端治療＞2個月后，X 線檢查肺部結核病灶病變較上次無增多。肺炎組153例，均符合肺炎診斷標準［2］。健康志愿者163例為對照組。所有病例均履行了告知義務，本研究獲得醫院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署了知情同意書。

1.3 方法（1）標本采集：入選病例1周內抽取外周靜脈血做細胞因子測定。外周血2mL 收集在非抗凝無菌試管，以每分鐘3 000 轉離心10 min后，留取血清儲存在－30 ℃冰箱，等待測定。（2）細胞因子檢測：γ－干擾素（IFN－γ）及腫瘤壞死因子－α（TNF－α）檢測試劑盒均由上海西唐生物科技有限公司提供，采用ELISA 試劑盒測定，檢測方法嚴格按照試劑盒說明書操作步驟進行。TGF－β1檢測試劑盒采用美國RD Biosciences公司生產的試劑盒，測定血清標本中人轉化生長因子β1濃度水平。用純化的人轉化生長因子β1抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入轉化生長因子β1，再與HRP標記的轉化生長因子β1抗體結合，形成抗體－抗原－酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉化生長因子β1呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人轉化生長因子β1的含量。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0統計分析，計量資料用（±s）表示，兩組間均數比較采用t檢驗，計算ROC曲線下面積（AUC），采用SPSS 16.0軟件處理，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 組間血清細胞因子濃度水平比較 活動組血清中TGF－β1濃度水平顯著高于非活動組，差異有統計學意義（P＜0.01）。活動組IFN－γ 和TNF－α濃度水平分別低于非活動組（P＜0.01）。活動組血清中TGF－β1濃度水平與肺炎組比較差異有統計學意義（P＜0.01），IFN－γ和TNF－α濃度水平分別低于肺炎組（P＜0.01）。活動組血清中TGF－β1濃度水平與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.01），IFN－γ組和TNF－α組濃組度組水組平組分組別組低組于組肺組炎組（P＜0.01）。對照組、肺炎組及非活動組血清TGFβ1、IFN－γ及TNF－α濃度水平組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組血清TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

表1 各組血清TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

注：與對照組比較，＊均P＜0.01；與肺炎組比較，＃均P＜0.05；與非活動組比較，▲P＜0.01。

2.2 活動組內細胞因子濃度水平比較 病灶范圍≥4個肺野組TGF－β1水平明顯高于病灶＜4個肺野組（P＜0.05）；病灶范圍≥4個肺野組TNF－α和IFN－γ水平與病灶＜4個肺野組分別比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 活動組中不同病灶范圍TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

表2 活動組中不同病灶范圍TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

2.3 活動組與非活動組細胞因子的相關性 活動組中TGF－β1與TNF－α、IFN－γ水平有顯著負相關（r值分別為－0.815和－0.823，均P＜0.05）。非活動組血清中TGF－β1 與TNF－α和IFN－γ水平有顯著負相關（r值分別為－0.762和－0.889，均P＜0.05）。兩組中TNF－α與IFN－γ水平比較無明顯相關性（r值分別為0.229和0.102，均P＞0.05）。

2.4 TGF－β1 濃度水平與肺結核活動性關系分析采用ROC 計算AUC 0.873，篩選血清TGF－β1濃度判定肺結核活動性的敏感度及特異度交點最大值（Q 值）為0.86，結果組顯組示TGF－β1組濃組度組值34.21ng／mL組作為最佳截值，敏感性及特異性分別為85.4%和91.2%，TGF－β1濃度水平與活動性的判定呈高度相關一致性。

3 討論

肺結核病由于其痰菌陽性率低、臨床癥狀及X影像學缺乏特異性等特點，肺結核活動性的判定常是困擾臨床的一個難題。結核病主要是由T 淋巴細胞介導的免疫反應，TGF－β1 作為一種免疫抑制因子具有抑制T 淋巴細胞的增殖及其功能，TGFβ1可能通過Fas／FasL系統增強結核病T 細胞的凋亡，并調節其他免疫細胞的凋亡［3］，TGF－β1可以促進結核分支桿菌的胞內生長，因此認為TGF－β1 可影響著結核病的活動性變化。與之相反，IFN－γ和TNF－α能夠適度增加人單核巨噬細胞抗結核分支桿菌活性，這些細胞因子在結核患者體內能成功地抑制結核分支桿菌復制。本文通過對4組血清TGF－β1、TNF－α和IFN－γ濃度水平分別進行檢測，結果顯示血清TGF－β1水平活動組明顯高于非活動組、肺炎組及對照組，而活動組的TNF－α和IFN－γ水平低于其他組，可能與活動性肺結核患者體內過量表達的TGF－β1 抑制T 細胞免疫應答有關，與TGF－β1下調了IFN－γ、TNF－α的產量和活性有關。國外也有研究［4－5］報道其在結核病患者血清中表達升高，升高的TGF－β1 與結核病活動有密切關系。本文還發現肺部病灶范圍≥4 個肺野組的血清TGF－β1水平明顯高于肺部病灶＜4個肺野組，分析可能為過量的TGF－β1不僅可以引起結核分支桿菌感染的慢性過程，而且可以導致廣泛組織破壞、空洞形成和纖維化的結核病病變特征，TGF－β1 作為結核病免疫功能損害的指標，其水平越高，免疫損害越重。本組結果還顯示肺結核活動性與TGF－β1濃度水平間存在正相關，可能與結核分支桿菌及其有效成分可以刺激單核巨噬細胞過量表達TGF－β1 有關，血清TGF－β1濃度水平與活動性的判定呈高度相關一致性，對肺結核活動性的分析判斷有一定的價值，且實驗操作簡單，值得進一步推廣應用。

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［2］中華醫學會呼吸病學分會.社區獲得性肺炎診斷和治療指南［J］.中華結核和呼吸雜志，2006，29（10）：478－450.

［3］孫志平，劉建輝，呂翠環，等.糖尿病合并肺結核患者的轉化生長組因組子β1組與Fas／FasL組系組統組檢組測［J］.河組北組醫藥，2010，32（6）：649－651.

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［5］Ross－Taraco AG，Higgins DM，Sdnchez－Campillo J，et al.I.ocal pulmonary immunotherapy with siRNA targeting TGF 171enhances antimicrobial capacity in Mvcobacterium tuberulosis infectedmice［J］.Tuberclosis（Edinb），2011，91（1）：98－106.