脾酪氨酸激酶在非小細胞肺癌中的表達及對血管內皮生長因子-C的影響

脾酪氨酸激酶在非小細胞肺癌中的表達及對血管內皮生長因子-C的影響

趙云鵬趙小剛叢波孫啟峰彭傳亮郭嘉仲贠燦華郝迎濤

(山東大學第二醫院胸外科，山東濟南250033)

摘要〔〕目的研究非小細胞肺癌組織中脾酪氨酸激酶(Syk)的表達及其與血管內皮生長因子-C(VEGF-C)表達的相關性。方法應用免疫組織化學染色的方法，檢測山東大學第二醫院手術切除的70例非小細胞肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中Syk、VEGF-C的表達。結果非小細胞肺癌組織中Syk、VEGF-C的表達與正常肺組織中及癌旁組織Syk、VEGF-C的表達有顯著差異(P<0.05)，分別為5.7%、95.7%、100%，57.1%、10.0%、7.1%，Syk與VEGF-C的表達呈現負相關(r=-1.000，P=0.000)。結論Syk的表達在非小細胞肺癌發生、發展過程中可能下調VEGF-C的表達從而發揮抑制作用。

關鍵詞〔〕脾酪氨酸激酶；血管內皮生長因子-C；非小細胞肺癌

中圖分類號〔〕R734.2〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：山東省科技攻關計劃資助項目(2009GG10002030)

通訊作者：趙小剛(1969-)，男，博士，教授，博士生導師，主要從事胸外科疾病的基礎及臨床研究。

第一作者：趙云鵬(1987-)，男，碩士，醫師，主要從事胸外科疾病的基礎及臨床研究。

脾酪氨酸激酶(Syk)是一種非受體酪氨酸激酶，目前被認為是一種候選抑癌基因。Coopman等〔1〕首先發現并報道了Syk在不同乳腺組織中的表達差異，這其中包括正常乳腺細胞，乳腺癌細胞等。其后Syk在胃癌〔2〕、胰腺癌〔3〕、食管癌〔4〕等惡性腫瘤中的表達及意義均有研究。在Syk與肺癌方面的研究方面，Su等〔5〕的研究表明，COX-2可能通過EP1和HER-2/Neu受體途徑上調血管內皮生長因子(VEGF)-C的表達，從而通過上述途徑導致肺腺癌的淋巴轉移。Jennifer等〔6〕認為，Syk與HER-2/neu是一對功能相反的基因，由此推測Syk相關信號通路可能通過影響淋巴管生成因子VEGF-C/VEGFR-3通路起作用，從而抑制腫瘤淋巴管生成。本文擬探討Syk與非小細胞肺癌的關系及其與VEGF-C表達的相關性。

1資料與方法

1.1臨床資料2009年1月至2011年12月于山東大學第二醫院術中切除的70例原發性非小細胞肺癌標本，標本包括肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織，常規石蠟包埋，切片。患者在術前均未接受過任何抗腫瘤治療。病理結果(按1981WHO標準)分別為肺腺癌(28例)，肺鱗癌(36例)及肺大細胞癌(6例)。其中男54例，女16例，年齡40～75歲。其中高分化者20例，中分化26例，低分化18例，未分化6例，PTNM分期根據《原發性肺癌診療規范(2011年版)》，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為13例、33例、19例、5例。全部標本均在手術中收集，用于實驗的癌組織均取自于癌腫，且其中不含壞死物質，癌旁組織取材據腫瘤邊緣2 cm，正常肺組織取材嚴格距腫瘤邊緣5 cm以上，且病理結果中均未顯示有癌細胞。

1.2Syk、VEGF-C蛋白表達水平測定采用SP法。兔抗人Syk多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購自美國ZYMED公司，HistoStain免疫組化試劑盒購自上海麥約爾生物技術有限公司。用已知陽性標本作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。由兩位病理科醫師分別雙盲閱片，Syk及VEGF-C陽性者胞質中可見棕黃色顆粒或棕褐色顆粒，每張切片隨機選取10個等倍視野(×200)，計數整張切片中著色的癌細胞或者癌旁細胞的百分數，當陽性胞質染色的細胞<5%時，定為“-”，5%～25%為“+”，25%～50%為“”，>50%為“”。

1.3統計學方法采用SPSS16.0軟件進行χ2檢驗或Fisher確切概率檢驗及Spearman等級相關檢驗。

2結果

2.1Syk、VEGF-C在肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達及相關性見圖1。肺癌組織中Syk蛋白陽性表達率〔4例(5.7%)〕明顯低于癌旁組織〔68例(95.7%)〕和正常肺組織〔70例(100%)，P<0.05〕，癌旁組織和正常肺組織Syk陽性表達率無顯著性差異(P=0.248)，肺癌組織中VEGF-C蛋白陽性表達率〔40例(57.1%)〕明顯高于癌旁組織〔7例(10.0%)〕和正常肺組織〔5例(7.1%)，P<0.05〕，癌旁組織和正常肺組織VEGF-C陽性表達率無顯著性差異(P=0.546)。Syk與VEGF-C的表達在肺組織從正常組織、癌旁組織到肺癌組織這一過程中呈負相關(r=-1.000，P=0.000)。

正常肺組織

肺鱗癌組織

肺腺癌組織

肺大細胞癌組織

2.2 Syk陽性表達與性別、年齡、組織類型、分化程度及分期的關系不同性別、年齡的肺癌患者Syk表達無明顯差異(P>0.05)。Syk在不同非小細胞肺癌組織類型、分化程度、分期的患者中的表達無差異(P>0.05)。見表1。

表1　Syk的陽性表達與不同臨床病理特征的相關性〔 n(%)〕

3討論

蛋白酪氨酸激酶是一個重要的靶分子〔7〕，能夠促進一些重要蛋白質的磷酸化，在調節細胞生長，分化，和死亡等過程中有著重要作用。現已發現〔8〕，原癌基因和癌基因產物半數以上的都具有酪氨酸激酶的活性。

目前國內外關于Syk在肺癌中的研究報道較少。蘭芬等〔9〕的研究結果表明：Syk在非小細胞肺癌中的表達顯著低于正常肺組織，且其表達與淋巴結轉移、分化程度、腫瘤大小、分期無關。段林燦等〔10〕研究結果顯示肺腺癌患者血清Syk水平與淋巴結受累程度成負相關。由于有不少研究表明，在胰腺癌〔3〕、食管鱗癌〔4〕、子宮內膜癌〔11〕、宮頸鱗癌〔12〕等惡性腫瘤中不同分期的病人其Syk的表達有顯著性差異，為進一步判斷Syk在不同分期非小細胞肺癌中的表達是否有顯著性差異，我們又將Ⅰ、Ⅱ期合并，Ⅲ、Ⅳ期合并，分析后發現其仍無統計學差異，究其原因可能是由于非小細胞肺癌中Syk表達很低，70例研究對象相對偏少，因此，我們認為其差異是否具備實際意義還需更大的樣本量驗證或采用其他實驗手段進一步研究確認。

根據Su〔5〕等的研究、Jennifer等〔6〕的研究以及Abtahian等〔13〕關于Syk/SLP-76缺陷的胚胎鼠淋巴管可出芽形成大量的新生淋巴管道的報道，可推測Syk相關信號通路可能通過影響淋巴管生成因子VEGF-C/VEGFR-3通路起作用，在從而抑制腫瘤淋巴管生成。國內方芳等〔14〕提示乳腺癌中Syk的下調可能使VEGF-C、VEGF-D的表達增高。本實驗結果顯示：Syk與VEGF-C的表達在肺組織從正常到癌旁組織、肺癌組織這一過程中呈現負相關，Syk在非小細胞肺癌發生、發展過程中可能會下調VEGF-C的表達從而發揮抑制作用。

4參考文獻

1Coopman PJ .Do MT,Barth M,etal.The Syk tyrosine kinase suppresses malignant growth of human breast cancer cells〔J〕.Nature,2000;406(8):742-7.

2Nakushima H,Natsugoe S,Ishigami S,etal.Clinical significance of nuclear expression of Spleen tyrosine kinase in gastric cancer〔J〕.Cancer Lett,2006;236(1):89-94.

3宋玉琴，周武元，趙文華，等.Syk蛋白在胰腺癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007；14(15)：1149-51.

4臧真真，劉弘基.脾酪氨酸激酶蛋白在食管鱗癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.山東醫藥，2010；50(5)：59-60.

5Su JL,Shih JY,Yen NIL,etal.Gyclooxygenase-2 induces EP 1-and HER-2/Neu- dependent vascular endothelial growth factor-C up-regulation:a novel mechanism of lymphangiogenesis in lung adenocarcinoma〔J〕.Cancer Res,2004;64(2):554-64.

6Jenniferz.Syk:a new player in the field of breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res,2001;3(1):5-7.

7單保恩，董青，王曉玲,等.兔抗體制備和在乳腺癌診斷中的應用〔J〕.細胞分子免疫學雜志，2003；19(5)：486-8.

8丁健.蛋白酪氨酸激酶——前景光明的抗腫瘤靶點〔C〕.第三屆中國腫瘤學術大會教育集，2004，廣州.

9蘭芬，熊盛道，熊維寧，等.Sky在非小細胞肺癌中的表達及與臨床病理特征的關系〔J〕.中國高等學校學術文摘-醫學，2011；3(1)：17-9.

10段林燦，李高峰，黃云超，等.血清SYK水平和肺腺癌淋巴結受累的關系〔J〕.現代腫瘤醫學，2009；17(8)：1465-7.

11王洪蕊，趙淑萍，苗小艷.脾酪氨酸激酶Syk在子宮內膜癌中的表達及臨床意義〔J〕.中國誤診學雜志，2010；10(2)：259-61.

12薛洪燕，杜月光，施紅旗，等.宮頸鱗癌中Syk、VEGF-C的表達及臨床意義〔J〕.檢驗與臨床，2011；49(14)：88-90.

13Abtahian F,Guerriero A,Scbzda E,etal.Regulation of blood and lymphatic vascular separation by signaling proteins SLF-76 and Syk〔J〕.Science,2003;299(5604):247-51.

14方芳，吳佩，洪書劍，等.乳腺癌中脾酪氨酸激酶蛋白表達對血管內皮生長因子-C、血管內皮生長因子-D及淋巴管生成的影響〔J〕.中華實驗外科雜志，2010；27(8)：1088-90.

〔2013-07-04修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)