丹紅注射液對兔急性心肌梗死的影響

郝光++沈啟明++王馨+馬麗紅++王增武

[摘要]目的探討丹紅注射液對兔急性心肌梗死的影響。方法結扎日本大耳兔冠狀動脈左前降支建立急性心肌梗死模型，制模成功后隨機分為模型組，丹紅注射液低、中、高劑量組及果糖二磷酸鈉組，另設假手術組。治療兩周，期間測量不同時間段心肌酶。兩周后取心臟進行梗死面積測定。結果各組間心肌酶水平（谷草轉氨酶、肌酸激酶同工酶及乳酸脫氫酶）及心肌梗死面積差異無統計學意義，但丹紅中劑量組（2ml/kg）心肌酶水平及心肌梗死面積較模型組都有降低或縮小趨勢。結論丹紅注射液對兔心肌梗死可能有一定的保護作用，但是還需要實驗進行證實。

[關鍵詞]丹紅注射液；急性心肌梗死；日本大耳兔

中圖分類號：R544.2 文獻標識碼：A

文章編號：1009-816X（2015）05-0369-03

急性心肌梗死（acute myocardial infarCtion，AMI）是在冠狀動脈粥樣硬化基礎上突然出現斑塊破裂、血栓形成或血管痙攣而致血管性閉塞，相應血管所支配心肌出現持久而嚴重的急性缺血壞死。AMI在中醫屬于“胸痹”或“真心痛”范疇。丹紅注射液是把中藥丹參、紅花按科學方法提取的復方制劑。有研究表明丹參主要成分丹參酮ⅡA具有抗動脈粥樣硬化、縮小心肌梗死面積、抗氧化自由基、拮抗鈣離子、減輕心肌肥厚、改善血管內皮功能等作用；紅花的主要提取物紅花苷、紅花胺、紅花黃素等，具有擴張血管增加冠狀動脈血流量、抗氧化自由基作用、降低心肌酶水平減小梗死范圍等作用。丹紅注射液治療冠心病具有較理想的療效，其作用機理可能是多方面的，研究發現丹紅注射液可明顯改善微循環和血液粘滯度，阻止血栓形成和促進血栓溶解；還可以有效地抑制Adenosine diphos-phate（ADP）誘導的血小板凝聚、血小板TXA2合成和內皮素等縮血管物質的釋放，促進纖維蛋白溶解酶的產生。迄今為止，國內有關丹紅注射液治療急性心肌梗死的動物研究非常有限，對作用機制進行研究相對更少。本研究擬通過建立兔急性心肌梗死模型，觀察不同劑量丹紅注射液對心肌梗死兔的影響，同時為今后動物研究提供一定的參考依據。

1.材料與方法

1.1.實驗動物和儀器：實驗用清潔級健康日本大耳白兔（阜外心血管病醫院動物實驗中心提供），共48只，雌雄不限，平均體重（2.4±0.4）千克。丹紅注射液由步長集團提供，氯化硝基四氮唑藍購自南京卓爾生化技術有限公司，天門冬氨酸氨基轉氨（aspar-tateaminotransf erase，AST）、肌酸激酶同工酶（creatine ki-nase isoenzvme，CK-MB）、乳酸脫氫酶（laCtate dehydroge-nase，LDH）由阜外醫院化驗室進行檢測，心肌切片由病理切片全景掃描系統LEICASCN400掃描并分析（中國科學院生物物理研究所）。

1.2.方法：

1.2.1.動物處理：兔固定于手術臺上，前胸手術部位剪毛，常規碘酒、乙醇消毒，用氯胺酮全麻后，沿胸骨左緣2-4肋間切開皮膚。分離皮下組織暴露肋骨，以開胸器撐開，暴露心臟。剪開心包，用眼科小圓針帶7號手術線在前降支近根部心肌內穿過，然后結扎。電生理記錄儀上顯示ST段抬高O.lmV為制模成功。假手術組只穿線不結扎。制模成功后關閉胸腔、縫合。術后給與耐樂品肋間神經封閉止痛，術后前3天給與青霉素常規抗感染治療。之后14天按分組情況每天進行腹腔給藥。

1.2.2.動物分組和給藥：將兔子隨機分成6組：假手術組，模型組，丹紅注射液低、中、高劑量組，果糖二磷酸鈉組。假手術組和模型組分別給予2ml/kg生理鹽水腹腔注射，丹紅注射液低、中、高劑量組分別按0.4mI/kg、2ml/kg、4ml/kg：給予丹紅注射液腹腔注射，果糖陽性對照組給予2.8mg/kg糖注射液腹腔注射。每日給藥1次，連續給14天。

1.2.3.標本處理：實驗動物于術前和術后1d、2d、3d和14d經耳緣靜脈采血1-2ml，3小時內送檢，測定AST、CK-MB和LDH。術后2周處死動物，分離心臟并去除周圍脂肪，0.9%氯化鈉注射液沖洗后，垂直于心臟縱軸方向自心底向心尖將心臟均勻切成6份。即刻進行氯化三苯四氮唑Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTc）染色，福爾馬林固定后進行石蠟包埋。制作切片后，采用病理切片全景掃描系統LEICASCN400掃描切片并測定心肌梗死面積。

1.3.統計學處理：使用SAS9.2軟件包進行統計學分析，連續資料使用（x±s）表示，采用重復測量方差分析，方差分析及SNK-q檢驗進行分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1.不同組間AST檢測值的比較：各項生化指標使用方差分析發現，同一時點各組間差異無統計學意義（P>0.05），見表1。但是從絕對值來看，丹紅中劑量組和果糖組在第3天及第14天時，AST和CK-MB的水平較其它組相對較低。

2.4.不同組間心肌梗死面積的比較：病理標本采用最大梗死面積進行分析，各組間的差異無統計學意義。丹紅中劑量組的心肌梗死面積最小，果糖組次之。

3.討論

血清AST、LDH、CK及CK-MB等心肌酶主要來源于心、肝、腎、肺及骨骼肌等，血清酶活性增高可能是一種或多種組織或器官受損的結果。血清AST、CK-MB、CK和LDH活性水平可反映心肌梗死程度，而且相對于CK而言，CK-MB更敏感。故本研究選取AST、CK-MB、 LDH為觀察指標。

AST廣泛存在于人體各組織，心肌組織含量豐富，由于AST不存在組織特異性，且敏感性不高，故單純的AST升高不能診斷為AMI。乳酸脫氫酶是體內能量代謝過程中的一個重要的酶，此酶幾乎存在于所有組織中。組織中的LDH的活力比血清中高得多，所以當少量組織壞死時，該酶即釋放入血而使其在血液中的活性升高，即只有在細胞受損時才可能大量溢出，LDH水平增加可反映細胞膜的損傷。CK是心肌中重要的能量調節酶，是有M和B兩個亞基組成的二聚體。CK-MB作為其中一種同工酶臨床上用于較早期診斷AMI，估計梗死范圍大小。本研究發現中劑量丹紅組和果糖組的LDH和CK-MB水平第3天及第14時較其它組明顯為低，差異無統計學意義，可能是由于樣本量較少造成的。

動物及臨床研究發現丹紅注射液能顯著降低心肌酶活性，明顯縮小心肌梗死面積，對心肌梗死具有保護作用。李惠民對82例不穩定心絞痛患者的研究發現，在常規治療下丹紅注射液能明顯提高不穩定心絞痛的療效，并且有較小的不良反應。劉愛國等對117例AMI患者的研究發現，丹紅注射液能改善AMI患者的心功能，抑制AMI后的心肌重構。目前丹紅注射制劑已廣泛應用于臨床AMI的治療，在常規治療基礎上，丹紅注射液能改善患者缺血癥狀，具有較理想的療效。

本實驗結果顯示，與模型組相比，盡管沒有發現丹紅注射液及果糖組心肌酶的降低及心肌梗死面積的減小具有統計學意義，但是結果總體上呈現隨著劑量上升，梗死面積下降趨勢，中度劑量丹紅注射液組和果糖組的治療效果最好，其組內的大耳兔心肌酶較其它組有降低的趨勢，同樣心肌梗死面積在這兩組內減小也最為明顯。以上結果說明適當劑量的丹紅注射液對心肌梗死可能有改善作用，此外也證明果糖同樣有與中等劑量丹紅注射液相當的效果。所以統計學的沒有差異一方面可能是由于樣本量不足造成的，另一方面可能由于丹紅實驗劑量選擇不合適導致的，所以今后類似研究建議以2ml/kg為基礎選擇更為合適的劑量，以期達到試驗最佳的效果。另外本實驗在不同時點心肌酶水平波動較大，甚至在14天的時候心肌酶的水平還是處于較高的水平，這可能和實驗期間每天腹腔注射給藥，或者在抽血過程中對兔子肌肉組織損傷有關。

綜上所述，丹紅注射液對心肌梗死可能具有一定的保護作用，且從絕對值來看，中度劑量的丹紅注射液對心肌的保護作用可能較其它劑量及果糖組為好，但是以上結論還需要進一步細分丹紅注射液實驗劑量實驗驗證。endprint