薯莨鞣質粗提物體外抗霉菌作用及對人腫瘤細胞生長的影響

鄧先擴　陳　明　許義紅　張林甦*

（貴州省黔南民族醫學高等專科學校藥學教研室，貴州 都勻 558000）

· 實驗研究 ·

薯莨鞣質粗提物體外抗霉菌作用及對人腫瘤細胞生長的影響

鄧先擴陳明許義紅張林甦*

（貴州省黔南民族醫學高等專科學校藥學教研室，貴州 都勻 558000）

目的 考查薯莨水提物的化學成分及其鞣質粗提物的體外抗霉菌等藥理作用。方法 經典鑒定方法鑒定薯莨的化學成分；紙片法考查薯莨鞣質粗提物對大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉的作用；MTT法檢測其對人肺癌細胞A549、人卵巢癌細胞A2780、人胃癌細胞SGC-7901生長的影響。結果 薯莨水溶性成分包括蛋白類、糖類或苷類、鞣質和有機酸等，未檢測到生物堿；薯莨鞣質粗提物對大腸桿菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用，對黑霉沒有抑制作用；薯莨鞣質粗提物在體外對人肺癌細胞A549和人胃癌細胞SGC7901有刺激作用，對人卵巢癌細胞A2780生長沒有影響。結論 薯莨鞣質粗提物具有一定的抗霉菌活性，對某些腫瘤細胞有刺激作用，作用機制還有待深入研究。

薯莨；成分分析；細菌；癌

薯莨（Dioscorea cirrhosa Lout.）是薯蕷科薯蕷屬的一種多年生藤本野生植物，分布在我國中、南部地區，藥用其塊莖。薯莨的化學成分主要是鞣質，還含有酚類，苷類及蛋白質、糖類、黏液等成分，具有止血、抗菌、抗氧化和清熱化瘀等功效，也有抗輻射和延緩衰老作用。但有關其藥理活性研究也僅基本上局限于傳統的民間用法，有效部位、有效成分尚不明確［1］。為了深入研究薯莨的藥理活性，我們對其鞣質粗提物的抗霉菌、對腫瘤細胞生長的影響作用進行了研究。

1　資料與方法

1.1資料

1.1.1藥材：薯莨（干藥材）由貴州青草堂藥業有限責任公司提供，品種鑒定由貴陽醫學院藥學院覃容貴教授完成。

1.1.2供試菌種及腫瘤試劑：大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌種由貴州大學生命學院韓麗珍副教授惠贈。人肺癌細胞A549、人卵巢癌細胞A2780、人胃癌細胞SGC-7901由中國醫學科學院藥用植物研究所藥理中心提供。

1.1.3試劑與儀器：YX-400智能型全自動不銹鋼立式電熱高壓滅菌鍋，常州諾基有限公司生產；DHP-2000型電熱恒溫培養箱，天津市華北試驗有限公司；RE-52AA型旋轉蒸發器，上海亞榮生化儀器廠；HWS-24型電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科技儀器有限公司；VERT.A1倒置顯微鏡，ZEISS公司；HF 151UV二氧化碳培養箱，由上海力申科學儀器有限公司；VICTOR X3型酶標儀，PerkinElmer公司；無菌操作臺，江蘇蘇州潔凈技術研究所。噻唑藍（MTT）和胰蛋白酶為Sigma公司產品，PRMI-1640培養基GIBCO公司產品，胎牛血清杭州四季青公司產品，胰蛋白胨，酵母提取物，瓊脂粉為國產微生物培養用，氯化鈉、乙酸鋅、氨水、氯化銨、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA·2Na）、鉻黑T、乙醇等其余試劑均為國產分析純。

1.2方法

1.2.1薯莨水提物性質鑒定：薯莨塊10 g磨粉加水浸沒，浸泡過夜，得水提物，按常規方法檢測氨基酸、蛋白質，糖類、多糖、苷、皂苷、有機酸、生物堿、鞣質等項目。

1.2.2提取與分離：薯莨塊100 g粉碎成粗粉，加75%的酒精250 mL， 4 ℃下浸泡2 d，過濾，得乙醇濾液220 mL，用旋轉蒸發儀50 ℃濃縮，60 ℃水浴過夜，得干燥的深紅色鞣質粗提物17.33 g。

1.2.3測定鞣質含量：采用絡合滴定法［2］測定，利用鋅離子只與鞣質反應的特性，用鋅離子沉淀溶液中的鞣質，剩余鋅離子以鉻黑T作指示劑，用EDTA-Na溶液滴定。稱取樣品適量50 mg，置100 mL量瓶中，精密移取配制好的0.05 mol/L的鋅滴定液10 mL及氨一氯化銨緩沖溶液（pH=10）10 mL，加入100 mL量瓶中，以蒸餾水定容至100 mL，超聲3 min，待沉淀穩定后過濾，精密吸取續濾液10 mL，置錐形瓶中，加配制好的氨一氯化銨緩沖溶液（pH=10）10 mL、鉻黑T指示劑適量，用0.05 mol/L的EDTA-Na滴定液滴定至溶液顯藍綠色，即為終點。測得鞣質純度為78.4%。

1.2.4抗霉菌實驗

1.2.4.1薯莨鞣質粗提物用水溶解，配制成高劑量（100 mg/mL）和低劑量（25 mg/mL）組。

1.2.4.2菌液的制備：將大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌種的單個菌落分別接種于培養基中，37 ℃恒溫增菌培養18～24 h，用無菌水配制成1×106～1×107CFU/mL的菌液（OD590=0.6）。

1.2.4.3藥敏紙片法：制作含有不同濃度薯莨且直徑為10 mm的藥敏紙片。將不同的菌種100 μL涂布于瓊脂培養基，當培養基表面干燥后，將紙片貼于培養基表面，37 ℃培養24 h后，觀察并測定抑菌環直徑。

1.2.5體外抗腫瘤實驗：按文獻方法培養細胞至對數生長期，調節細胞濃度為1×105個/mL，各取100 μL加入96孔板，置5% CO2培養箱37 ℃培養48 h，加入不同濃度供試品，將薯莨鞣質用DMSO溶解成高劑量100 μg/mL和低劑量20 μg/mL組，每組設3個平行，繼續培養48 h，每孔加入10 μL 0.5 g/L MTT，4 h后終止反應，傾棄培養液，加入100 μL DMSO，酶標儀上490 nm處測吸光值A，按下式計算細胞生長抑制率：細胞生長抑制率=｛［（陰性組OD值的平均值一空白組OD值的平均值）一（實驗組OD值的平均值一空白組OD值的平均值）］/（陰性組OD值的平均值一空白對照組OD值的平均值）｝×100%。

2　結　果

2.1薯莨化學成分鑒定結果：薯莨水溶性物質含有蛋白類、糖類或苷類、鞣質和有機酸，未檢測到生物堿類成分。

2.2薯莨主要成分鞣質抑菌結果：薯莨鞣質粗提物對大腸桿菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用，呈現劑量依賴性，但是對黑霉沒有抑制作用。

2.3薯莨主要成分鞣質體外抗腫瘤實驗結果：MTT法檢測薯莨鞣質粗提物對腫瘤細胞生長的影響，薯莨鞣質粗提物在高劑量時對人肺癌細胞A549和人胃癌細胞SGC7901有刺激作用，而對人卵巢癌細胞A2780沒有影響。低劑量組對以上三種細胞的影響都不顯著（數據未展示）。

3　討　論

從薯莨鞣質粗提物對大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌的抗菌作用來看，其對大腸桿菌TG1、黃曲霉、木霉菌有一定抗菌作用，而大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌均與食品保鮮有關，這進一步證實薯莨可用于食品保鮮，其有效部位可能是鞣質。當然薯莨鞣質粗提物需進一步分離純化，抗菌有效部位需進一步確定，抗菌機制也需闡明，有報道認為薯莨鞣質能與蛋白質作用，凝固微生物體內的原生質而具有抑菌作用，這有待進一步探明［1-2］。

薯莨抗腫瘤作用目前未見報道，我們對薯莨鞣質粗提物進行了體外抗腫瘤實驗探索，實驗結果證實一定劑量薯莨鞣質粗提物在體外對A549人肺癌細胞株及人胃癌細胞株SGC-7901有刺激生長的作用，而對人卵巢癌A2780細胞株的生長則無明顯影響。鞣質具有一定的抗癌活性［2］，但薯莨鞣質粗提物表現出刺激A549人肺癌細胞株及人胃癌細胞株SGC-7901生長作用，究竟是薯莨鞣質引起還是其他成分引起，或者是對哪些腫瘤細胞有抗癌活性，哪些腫瘤細胞沒作用這有待進一步研究。各種腫瘤細胞生長的微環境不同，受到不同因子的影響從而不斷生長。目前的認知中，鞣質作為可以直接與蛋白作用的物質，可能可以更加直接參與影響信號通路中的某些因子，從而刺激了某些腫瘤細胞的生長。

［1］ 王慶蓉，馬麗，雷呈祥.薯莨的藥用價值［J］.職業與健康，2009，25（6）:647-649.

［2］ 安靜波，郭健，宋文東等.薯莨提取物止血效果及化學成分的初步研究［J］.食品工業科技，2013（12）:344-346.

R282.710.5；R73

B

1671-8194（2016）29-0022-02

貴州省黔南州科技基金

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