外植體選擇和滅菌對(duì)杧果組織培養(yǎng)影響的初步研究

岑湘濤 沈偉

摘 要：該文以杧果為試驗(yàn)材料，研究了不同外植體與不同滅菌方法對(duì)杧果組織培養(yǎng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：杧果組織培養(yǎng)適宜外植體為室內(nèi)沙培杧果帶腋芽莖段；最適滅菌處理為酒精30s+0.1%HgCl2滅菌8min。

關(guān)鍵詞：杧果；外植體；組織培養(yǎng)；滅菌

中圖分類號(hào) S66 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）02-16-02

杧果（Mangifera indica Linnaeus）為漆樹科（Anacardiaceae）杧果屬（Mangifera Linnaeus）植物，是我國(guó)重要的熱帶果樹之一。其果實(shí)芒果具有獨(dú)特的風(fēng)味，富含維生素，被譽(yù)為“熱帶水果之王”，已在熱帶、亞熱帶多個(gè)國(guó)家及地區(qū)廣泛種植[1]。杧果種子在貯藏時(shí)極易失去生活力，所以一般多采用無性繁殖[2]。利用組織培養(yǎng)技術(shù)建立杧果快速繁殖體系，能在較短時(shí)間和較小空間內(nèi)獲得大量純合無性系組培苗，對(duì)加速杧果良種繁育推廣有著積極的意義。本文就杧果莖段離體培養(yǎng)中的外植體選擇和滅菌進(jìn)行了探索性的研究，以期為杧果組培快繁體系的完善提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 本研究供試品種為桂七杧，品種來源及特征特性如下：桂七杧又名桂熱82號(hào)，樹勢(shì)中等，枝條開張花期較遲，屬晚熟品種，成熟期8月中、下旬。豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)。桂熱杧82號(hào)主要在百色市田東縣及南寧市種植。2014年百色市杧果種植面積8.66萬hm2，投產(chǎn)面積1.43萬hm2，年產(chǎn)量17.43萬t，杧果總產(chǎn)值6.28億元[3]。本試驗(yàn)以桂七杧帶腋芽莖段為外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 取材地點(diǎn)和取材天氣 取材地點(diǎn)設(shè)：A室外基地植株，B實(shí)驗(yàn)室沙盆植株，共2個(gè)地點(diǎn)。取材天氣設(shè)：a連續(xù)陰天的一天，b雨后第二天，c連續(xù)晴天的一天，取材時(shí)間都為中午14：30左右。

1.2.2 外植體的預(yù)處理 從室外基地及室內(nèi)沙盆植株中選擇生長(zhǎng)良好的枝條，剪取距幼嫩植株頂端約15cm長(zhǎng)的莖段，去除頂端3節(jié)，剪去葉片，留1cm葉柄。將材料用洗衣粉溶液浸泡10～15min，再用自來水沖洗10～15min，放在超凈工作臺(tái)上。

1.2.3 不同滅菌處理對(duì)不同類型外植體滅菌效果的影響 在超凈工作臺(tái)里，分別采用以下的滅菌方法對(duì)不同類型杧果外植體進(jìn)行滅菌：（1）75%酒精浸泡30s，振蕩，棄去浸泡液，無菌水沖洗1次，加有吐溫的0.1%HgCl2的溶液浸泡加搖晃7min，棄去浸泡液，無菌水沖洗5次；（2）75%酒精浸泡30s，振蕩，棄去浸泡液，無菌水沖洗1次，加有吐溫的0.1%HgCl2的溶液浸泡加搖晃8min，棄去浸泡液，無菌水沖洗5次；（3）75%酒精浸泡30s，振蕩，棄去浸泡液，無菌水沖洗1次，加有吐溫的0.1%HgCl2的溶液浸泡加搖晃9min，棄去浸泡液，無菌水沖洗5次。

1.2.4 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 將已進(jìn)行滅菌處理的莖段切成約芽上0.5cm，芽下1cm，葉柄0.5cm的單芽莖段，分別接種至MS培養(yǎng)基中。試驗(yàn)材料均在25±5℃的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，每天光照10h，光照強(qiáng)度1 600～2 000lx。7d后開始觀察外植體污染及腋芽萌發(fā)情況，并統(tǒng)計(jì)污染率及萌發(fā)率。計(jì)算公式如下：

污染率（%）=污染的外植體個(gè)數(shù)/接種的總外植體個(gè)數(shù)×100；

無菌率（%）=100-污染率；

褐化率（%）=褐化的外植體個(gè)數(shù)/接種的總外植體個(gè)數(shù)×100

2 結(jié)果與分析

2.1 不同取材地點(diǎn)和取材天氣對(duì)外植體滅菌效果的影響 由圖1、圖2可知，對(duì)于室外基地取材，連續(xù)陰天和雨后天氣取材以及連續(xù)晴天取材，滅菌效果都很差，外植體接種的無菌率分別為13.3%、5.6%、17.8%，褐化率都為100%，可以看出連續(xù)晴天取材，滅菌效果略好，但污染仍較嚴(yán)重；對(duì)于室內(nèi)沙盆取材，連續(xù)陰天、雨后及連續(xù)晴天取材滅菌效果差異不顯著，無菌率分別約為93.3%、90%、93.3%，褐化率分別為64.4%、65.6%、64.4%。試驗(yàn)結(jié)果表明，取材地點(diǎn)對(duì)于滅菌效果影響很大，大田取材滅菌效果很不理想，而室內(nèi)沙盆取材滅菌效果較大田取材好。取材天氣對(duì)滅菌效果也有影響，但對(duì)于不同的取材地點(diǎn)影響程度不同，對(duì)于室外基地植株影響很大，而對(duì)于室內(nèi)植株則影響很小。因此，以室內(nèi)栽培植株為外植體，可得到很理想的滅菌效果，若以室外栽培植株為外植體，則建議晴天取樣。

2.2 滅菌處理對(duì)不同類型外植體滅菌效果的影響 試驗(yàn)中酒精滅菌時(shí)間固定為30s，0.1%HgCl2的滅菌時(shí)間設(shè)7、8、9min3個(gè)處理，7d后觀察并記錄外植體的污染和褐化情況，試驗(yàn)結(jié)果見圖3、圖4。升汞是重金屬鹽殺菌劑，0.1%HgCl2溶液是一種滅菌效果很好的滅菌劑，但消毒時(shí)間要求極為嚴(yán)格，如果時(shí)間過短，殺菌不徹底，外植體污染嚴(yán)重。時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)對(duì)組織細(xì)胞有殺傷作用，導(dǎo)致植物組織褐化嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致外植體死亡。由圖3及圖4可知，在的杧果外植體滅菌過程中，室外基地取材的外植體滅菌效果不理想，3種滅菌處理的外植體褐化率達(dá)到100%且外植體無菌率都低于25%，3種處理差異不顯著。相較于室外基地取材，室內(nèi)沙培植株?yáng)x果外植體的無菌率最高能達(dá)到93.3%，3種處理差異不顯著但褐化率隨著滅菌時(shí)間的延長(zhǎng)而提高。

3 結(jié)論與討論

外植體選擇和滅菌是杧果組培快繁體系建立的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從試驗(yàn)結(jié)果可知，外植體取材地點(diǎn)應(yīng)該是杧果組培外植體選擇的關(guān)鍵因素，取材天氣對(duì)于室內(nèi)植株則影響很小，室內(nèi)沙盆取材滅菌效果較大田取材好。原因可能是微生物的生長(zhǎng)和活動(dòng)與外界環(huán)境有一定的關(guān)系，溫暖潮濕的環(huán)境容易滋生各種菌類，有利于微生物的繁殖室外大田環(huán)境復(fù)雜，可能存在的菌類種類和數(shù)量相對(duì)室內(nèi)來說較多，且大田植株直接與地面接觸，植物體上塵土較多，因此附著在植物體上的菌類多且復(fù)雜，滅菌很困難[4]。而室內(nèi)環(huán)境則相對(duì)比較穩(wěn)定，植株帶菌量少，同樣的滅菌處理便可得到更好的效果。因此，建議選擇室內(nèi)沙培植株帶腋芽莖段作為建立杧果組培快繁體系的外植體。從滅菌效果和腋芽萌發(fā)率2方面因素綜合考慮，室內(nèi)沙培杧果帶腋芽莖段最適滅菌處理為酒精30s+0.1%HgCl2滅菌8min。

參考文獻(xiàn)

[1]鐵萬祝，羅關(guān)興，王友富，等.我國(guó)杧果產(chǎn)業(yè)發(fā)展概況與主要問題[J].中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)，2013（5）：16-19.

[2]F.CorbineauM.kanteD.Come.杧果種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)[J].種子，1990（2）：72-73.

[3]平少華.杧果的前世今生[J].中國(guó)果蔬，2015（5）：45-48.

[4]朱廣廉.植物組織培養(yǎng)中的外植體滅菌[J].植物生理學(xué)通訊，1996，32（6）：444-949. （責(zé)編：張宏民）