GCC mRNA在早期老年直腸癌患者淋巴結中的表達與預后的關系

周小青　曾桂芳　楊斌　葉斌　李才勝　曾祥泰

【摘要】 目的：探討早期老年直腸癌淋巴結中GCC mRNA表達與預后的關系及能否作為判定淋巴隱匿性轉移的有效指標。方法：應用RT-PCR技術檢測48例早期老年直腸癌淋巴結中GCC mRNA表達水平（GCC mRNA陽性組12例，GCC mRNA陰性組36例），并分析患者的局部復發率、遠處轉移率、3年無瘤生存率（DFS）、3年總生存率（OS）與不同GCC mRNA表達水平的關系。結果：GCC mRNA陰性組患者的局部復發率、遠處轉移率更低，3年無瘤生存率更高（P<0.05）。兩組3年總生存率無明顯差異。結論：早期老年直腸癌淋巴結中GCC mRNA不同表達狀態患者的預后有差異，GCC mRNA可以作為直腸癌淋巴結微轉移的有效檢測指標，可以作為甄別早期老年直腸癌高危患者的可靠分子學指標，有利于高?；颊吆罄m輔助治療的選擇。

【關鍵詞】 GCC mRNA； 早期； 老年； 直腸癌； 淋巴結； 預后

The Relationship between Lymph Node GCC mRNA Expression and Prognosis in Elder Patients of Early Stage Rectal Cancer/ZHOU Xiao-qing，ZENG Gui-fang，YANG Bin，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（06）：001-004

【Abstract】 Objective：To explore the relationship between GCC mRNA expression of lymph nodes and prognosis in elder patients of early stage rectal cancer .Method： The expression of GCC mRNA in lymph nodes of 48 elder patients of early stage rectal cancer were detected by RT-PCR method，they were divided into the GCC mRNA positive group for 12 cases and the negative groups for 36 cases. The relationship between local recurrence， distant metastasis rate， disease-free survival of 3 years （DFS），over-all survival （OS） and GCC mRNA expression levels of the two groups were analyzed.Result： The GCC mRNA negative group had lower local recurrence and distant metastasis rate， disease-free survival of 3 years was higher（P<0.05）.There was no significant difference in the overall survival rate of 3 years between the two groups.Conclusion： Lymph node GCC mRNA expression level is closely related to the prognosis of early stage rectal cancer in elder patients. It can be used as an effective molecular marker in lymph node micrometastase of rectal cancer.

【Key words】 GCC mRNA； Early stage； Elder patients； Rectal cancer； Lymph nodes； Prognosis

First-authors address：The Second Affiliated Hospital of Gannan Medical University，Ganzhou 341600，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.06.001

直腸癌是一種常見消化道腫瘤，好發于中老年患者，隨著社會經濟的高速發展，環境污染的加劇，高熱卡、高脂、低素等不良飲食方式及缺乏運動等不良生活方式，直腸癌的發病率呈逐年增加趨勢，我國大中型城市尤為明顯，雖然隨著直腸癌外科TME技術的推廣及新的化療藥物與放療技術的發展，直腸癌的綜合治療取得長足進步，但5年生存率仍徘徊在50%左右，大約50%的患者死于復發和轉移，其中局部淋巴結轉移是直腸癌復發的重要因素，早期患者，尤其是老年患者，總體預后相對較好，但其復發與轉移率也高達20%～30%。臨床一般將無淋巴結與遠處轉移的Ducks A、B期稱為早期直腸癌，對于早期直腸癌患者，是否需要化療，NCCN 指南明確Ducks A期術后無需化療已成共識，對于Ducks B期患者目前爭議仍很大，主要根據年齡、病理類型、脈管浸潤與否、有無穿孔、淋巴結清掃數目等危因素綜合考慮是否化療，老年患者部分因基礎疾病及高齡，耐受化療相對較差，是否化療仍缺乏共識。早期直腸癌淋巴結中癌細胞的隱匿性轉移是其術后復發轉移的重要因素。鳥苷酸環化酶 C（Guanylyl cyclases C，GCC/GUCYC）是受體鳥苷酸環化酶家族成員之一，在腸道上皮細胞高度表達，普遍過表達于結腸直腸癌細胞（>80%），但在正常淋巴中無表達，可作為結直腸癌的特異性標志分子[1]。本研究應用RT-PCR檢測早期老年直腸癌患者淋巴結中GCC mRNA的表達狀態，并分析患者預后與不同GCC mRNA表達狀態的關系，以探討GCC mRNA能否作為一個判斷淋巴結微的可靠指標及其對直腸癌的分子分期以及預后判斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月-2012年6月本院收住的術前腸鏡病理證實為直腸癌的患者，手術后即刻對標本中淋巴結進行解剖，以淋巴結縱軸為中心切開淋巴結，一分為二，編號處理，其中一份送病理檢查，另一份留取冰凍保存，待病理回報后證實系直腸癌；清掃淋巴結數≥12枚且常規病理淋巴結為陰性的老年患者，選取對應患者的冰凍保存淋巴結進行解凍。共選取48例患者，其中男30例，女18例，年齡（66±5.6）歲，其中低分化腺癌10例，

中-高分化腺癌38例，TNM分期：T1 14例，

T2 16例，T3 10例，T4 8例。

1.2 試劑與方法 （1）實驗方法詳見操作規范[2-3]。（2）將48例患者根據PT-PCR檢測GCC mRNA的表達分為陽性組12例與陰性組36例，對兩組患者進行密切隨訪，第1～2年，每3個月一次，第3年以后，每6個月一次，隨訪期間常規體格檢查，并予查血CEA、CA19-9、CA72-4，腹盆腔CT，胸部X-Ray，如癌標指標升高，常規腹盆腔CT未發現病灶時，予行PET-CT檢查以明確。（3）復發與轉移患者治療：對于局部復發者，身體耐受良好，選擇再次手術切除，而對于患者耐受差或拒絕手術者，選擇局部放療；對于轉移者，如廣泛轉移者，選擇mFOLFOX6或XELOX方案，部分患者根據K-RAS狀況，選擇聯合C225等單抗治療，如果局灶性肝轉移，患者身體耐受良好，選擇手術轉移灶切除，如患者耐受差，筆者選擇TACE或RF治療，局部治療后予FOLFOX6或XELOX方案化療。

1.3 觀察指標 比較兩組患者的局部復發率、3年總生存率、無瘤生存時間等指標的差異。

1.4 統計學處理 采用SPSS 14.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以百分比表示，比較采用 字2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

淋巴結GCC mRNA陽性表達組局部復發率、遠處轉移率較陰性組高，3年無瘤生存率較陰性組差（P<0.05）；陰性組3年總生存率略高，但與陽性組比較差異無統計學意義（P>0.05）。相同T分期患者淋巴結GCC mRNA陽性組預后較陰性組差，陽性組脈管浸潤率較陰性組高，其中T3～4淋巴結GCC mRNA表達陽性率明顯高于T1～2，見表1～3。

3 討論

直腸癌是一種常見消化道腫瘤，好發于中老年患者，隨著社會經濟的高速發展，老齡化進程的步入，環境污染的加劇，高熱卡、高脂、低素等不良飲食方式及缺乏運動等，直腸癌的發病率在逐年增加，尤其在老年患者，成為危害人民生命健康的主要惡性腫瘤之一。隨著各類新的抗腫瘤藥物出現及新技術進展，尤其是1982年Heald教授提出全直腸系膜技術的應用（TME），直腸癌復發率由傳統20%～40%下降至5%～10%，TME已成為中低位直腸癌根治術的金標準，但5年生存率仍徘徊在50%左右，大約50% 的患者最終死于直腸癌術后復發及肝轉移，其中復發以會陰、盆壁、前列腺、陰道、子宮附件、吻合口、直腸周圍組織及直腸系膜淋巴結多見，其中淋巴結轉移是直腸癌復發與轉移的重要原因，嚴重影響患者預后[4-5]；即使是不存在局部淋巴結轉移的早期直腸癌患者，在復發患者中占比達20%～30%，如何降低患者的復發與轉移成為難點。放化療可降低復發與轉移的發生，但既往對于早期直腸癌患者是否化療，主要依據年齡、病理類型、腫瘤浸潤深度、脈管浸潤與否、有無穿孔、淋巴結清掃數目等高危因素綜合考慮；然而老年患者，尤其是合并有基礎疾病或高齡患者，化療是否受益仍無共識，準確識別高?；颊哂葹橹匾渲邪┘毎诹馨徒Y中的隱匿性轉移則是導致直腸癌術后復發轉移的重要因素，目前是研究的熱點[6]。

傳統分期方法主要根據常規組織病理學檢測結果，其主要缺點是常規病理僅檢測少數淋巴結或僅能檢測一個淋巴結的數個切面進行分析，組織病理學檢查本身的敏感性相對局限，最高分辨率僅能從200個正常細胞中檢出1個腫瘤細胞，易遺漏陽性淋巴結，尤其是對于隱匿性淋巴結轉移患者，微轉移灶癌細胞數偏少，容易造成假陰性，有低估患者實際分期之疑；故常規病理淋巴結陰性并不代表淋巴結沒有腫瘤細胞浸潤。隨著基因組學與蛋白組學等分子生物技術的發展，尤其是逆轉錄多聚酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction， RT-PCR ） 技術的成熟和完善， 檢測隱匿性轉移腫瘤細胞已成為目前研究的熱點[7-10]。RT-PCR技術檢測隱匿性轉移的優于測定蛋白質的免疫學技術，主要優點體現在：（1） 技術更簡便易行，RT-PCR 相對免疫學技術易行， 只要待測基因序列， 即可設計引物作RT-PCR， 而免疫學技術則需不斷生產特異性抗體；（2） 特異性更高，首先有些腫瘤細胞可轉錄組織特異性抗原的mRNA ，但無該抗原蛋白合成，其次mRNA 在細胞外很不穩定， 故只要在組織或體液中測出特異性RNA ， 就意味著有腫瘤細胞的存在，故檢測mRNA特異性更高； （3） 敏感性更高，很少量的癌細胞即可被檢出，可以檢出約106～107個正常細胞中夾雜的一個腫瘤細胞，較傳統病理200個正常細胞中檢出1個腫瘤細胞敏感性更高； （4） 遺漏率低，提取整塊淋巴結組織的RNA 進行檢測， 克服了傳統組織學檢查和免疫組織化學方法只能切取數個淋巴結切面的缺點； （5） 更為省時省力，可以同時對大量標本進行檢測并且整個過程只需1～2 d。

GCC是受體鳥苷酸環化酶家族成員之一，人類GUCYC基因定位于12號染色體[9-11]，約85 kb，有27個外顯子，含3745 bp核苷酸序列；GUCYG在正常小腸黏膜上皮及直腸惡性腫瘤中表達，是直腸癌一個高度特異性的生物學指標[1，11-12]。

本研究利用RT-PCR檢測早期老年直腸癌患者淋巴結中GCC mRNA的表達情況，分析不同表達與預后之間的關系，淋巴結GCC mRNA陽性組復發2例（16.67%），盆骶復發1例，髂血管旁淋巴結復發合并肝轉移1例，多發肝轉移1例，淋巴結GCC mRNA陰性組復發2例（5.56%），盆骶復發1例，腹主動脈旁淋巴結轉移1例，肝單發轉移1例。淋巴結GCC mRNA陽性組復發率較陰性組高，同時發現患者復發中位時間多在2年內，2年后復發率明顯減少；3年無瘤生存期陽性組較陰性組短，相同T分期患者淋巴結GCC mRNA表達陽性組預后較陰性組差，其中T3、T4淋巴結GCC mRNA表達陽性率明顯高于T1、T2；GCC mRNA陽性表達者預后差，3年總生存率目前無明顯差異，可能同復發與轉移后采取積極的手術與化療及靶向治療有關，其對于5年總生存率有無影響還需進一步隨訪觀察，對于GCC mRNA表達者預后差，具體機制還有待探索，可能同GCC mRNA通過cGMP依賴的相關機制來調節大腸癌細胞的增殖和分化有關[13-16]。

本研究提示GCC mRNA可作為淋巴結隱匿性轉移的可靠指標，對直腸癌的分子生物學分期以及預后判斷有一定指導意義，有可能作為早期老年直腸癌輔助治療的重要參考指標。

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（收稿日期：2015-10-20） （本文編輯：蔡元元）