高效液相色譜法測定不同品種番木瓜果實中維生素C含量

謝軼 蘇冰霞 周鵬

摘 要 通過優化實驗條件，使用高效液相色譜法對海南省種植范圍較廣的幾種番木瓜（中白、大青、小青）維生素C（Vc）含量進行測定。選取3個番木瓜品種成熟果實，通過HPLC方法測定Vc的標準溶液線性、精密度、回收率等，并比較該法與國標方法的重復性。結果顯示，獲得線性回歸方程y=35.41x-4.16（r=0.999），Vc在 60～300 μg/mL 的濃度范圍線性關系良好，方法回收率為98.56%～103.21%，精密度RSD為0.69%；測得中白、大青、小青果肉Vc含量分別為49.12、43.38、46.31 mg/hg。HPLC法結果重現性RSD為0.68%；2，6-二氯靛酚滴定法結果重現性RSD為5.45%，表明HPLC法是檢測番木瓜等深顏色水果Vc含量可靠的方法。

關鍵詞 番木瓜 ；維生素C ；高效液相色譜

分類號 S668.2 Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.02.010

An Optimized HPLC Method for Analyzing

Vc Content in Different Breeds of Papaya

XIE Yi1，2） SU Bingxia1，2） ZHOU Peng1，2）

（1 Analysis & Testing Center， CATAS，Haikou，Hainan 571101；

2 Hainan Provincial Key Laboratory of Quality and Safety for Tropical Fruits and Vegetables，

Haikou， Hainan 571101）

Abstract In order to develop an optimal method for isolating and analyzing Vc in breeds of papaya which were widely planted. extracting solution，chromatographic conditions were improved and optimized on the basis of former reported High Performance Liquid Chromatography（HPLC） methods. The results showed that The calibration curves of Vc was in good linearity over the ranges of 60～300 μg/mL（r=0.999）， and the average recovery rates was 100.75% （RSD=0.69%）. The content of Vc in "Zhongbai"，"Daqing"， "Xiaoqing" is 49.12， 43.38， 46.31 mg/100 g. The method of HPLC is better in repeatability（RSD=0.68%） than 2，6-dichlorindophenol titration（RSD=5.45%）. Therefore HPLC could be used for the determination of Vc in papaya and other fruits which had high level of Vc.

Keywords papaya ； Vc ； HPLC

維生素C是維持人體生理機能的重要營養素，是人體需求量最大而又自身無法合成，必須從外界攝取的一類維生素。研究表明，Vc還具有抗癌、抗氧化作用[2-3]。番木瓜中維生素C的含量是蘋果的20～30倍[1]，半個中等大小的番木瓜足以供成人整天所需的維生素C。因此，準確測定番木瓜中Vc含量，對番木瓜資源的開發利用有十分重要的意義。

傳統的紫外分光光度分析法[4]、碘量法[5]、2，4-二硝基苯肼比較法[6]等存在操作繁瑣、費時、結果不準確等問題，常用的國標方法（2，6-二氯靛酚滴定法）對深色水果突變終點顯色不明顯，造成結果誤差大等問題。用高效液相色譜法測定水果中 Vc 含量已較為常見[7-9]。本研究采用HPLC方法檢測3種番木瓜Vc含量，并用2，6-二氯靛酚滴定法對該法的結果重現性進行比對，建立了較為快速準確的測定番木瓜Vc含量的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器

METTLER TOLEDO 電子天平；Waters alliance e 2695液相色譜儀；Waters XBridge C18色譜柱。

1.1.2 試劑

Vc 標準品（分析純含量>99.0%，上海生工生物工程公司）；草酸、偏磷酸（MPA）均為分析純；水為去離子水；2，6-二氯靛酚鈉、白陶土（上海華藍化學科技有限公司）；新鮮番木瓜（基地采樣）。

1.2 方法

1.2.1 Vc標準溶液制備

精確稱取Vc對照品100 mg于 50 mL 棕色容量瓶中，用0.1% 草酸流動相定容，配成 2 000 μg/mL 的對照品溶液，待用。

1.2.2 供試品溶液的制備

將各品種番木瓜去皮、去籽，分別取50 g果肉，加50 mL 2%草酸浸提劑，迅速研磨成勻漿，用布氏漏斗過濾后置于100 mL容量瓶中，定容，最后用0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。2，6-二氯靛酚滴定法制樣參見國家標準[1]。

1.2.3 色譜條件

HPLC色譜柱：Waters XBridge C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相：0.1% 草酸溶液；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；紫外檢測器檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。

1.2.4 線性關系測定

分別準確吸取 Vc 對照品溶液 1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 mL于50 mL 棕色容量瓶中，用流動相溶液將其稀釋至刻度，搖勻，分別配成 60、120、180、240、300 μg/mL的標準系列溶液。按“1.2.3”中色譜條件，采用HPLC法測定各標準液的峰面積，記錄色譜圖。

1.2.5 “中白”樣品測定

取同批“中白”供試品溶液，按“1.2.3”的色譜條件連續進樣 6 次，采用HPLC法檢測。

1.2.6 方法重復性比對

HPLC法重復性測定：取同批“中白”番木瓜樣品，按照“1.2.2”的制樣方法制備供試品溶液，準確稱5份，按“1.2.3”的色譜條件測定，通過計算 RSD來考查其方法的重復性。

2，6-二氯靛酚滴定法重復性測定：具體操作方法參見國家標準[1]。

1.2.7 回收率測定

用移液器吸取等量“中白”樣品溶液至相應編號的容量瓶中，在已知濃度的樣品中分別準確加入50、100、150、200、250 μg的標準品，采用HPLC法依次進行峰面積測定。

1.2.8 提取液的選擇

取5份“中白”番木瓜并分為2組，分別以2%草酸和2%偏磷酸作為樣品提取液，參照“1.2.2”的方法制樣；檢測方法參照“1.2.3”，分別以0.1%草酸[10]和0.2%MPA[11]作為流動相測定Vc含量。

1.2.9 3個番木瓜品種的Vc含量

通過實地調研，選取海南普遍種植的3個番木瓜品種（中白、大青、小青），從海南昌江、東方、三亞基地分別摘取這3個品種的成熟番木瓜，按照“1.2.2”方法，分別制得6份待測樣品，按照“1.2.3”的色譜條件，用HPLC法檢測。

2 結果與分析

2.1 線性關系分析

以峰面積對濃度求回歸方程和相關系數，結果見圖1。得到線性回歸方程y=35.41x-4.16（r=0.999），Vc含量在 60～300 μg/mL 的濃度范圍內線性關系良好。

2.2 樣品測定及精密度

由表1可知，“中白”Vc含量平均值為49.17 mg/hg，標準偏差（RSD）為0.69%，表明HPLC法精密度良好。

2.3 重復性比對

結果表明，HPLC法重現性良好，RSD為0.68%；國標方法2，6-二氯靛酚滴定法測得的RSD為5.45%（表2）。從表2的數據可知，HPLC法測定的Vc數據穩定，重現性明顯優于滴定法。分析原因如下：其一，番木瓜為深顏色果肉，雖通過高嶺土褪色，但仍有殘留底色，并且通過脫色過濾，延長了Vc溶液的處理時間，容易造成Vc氧化損失；其二，滴定法通過肉眼觀察顏色突變終點，勢必會存在人為誤差。故HPLC法更能客觀準確地測定Vc含量。

2.4 回收率分析

將測得的峰面積帶入回歸方程y=35.41x-4.16（r=0.999），得到各組Vc含量，經計算得到回收率，結果見表3。方法回收率在98.56%～103.21%，平均回收率為100.75%，RSD為0.68%?；厥章瘦^穩定，說明采用HPLC法測定番木瓜Vc含量數據可靠。

2.5 提取液的選擇

結果表明，這2種提取液對Vc含量的測定沒有明顯影響（表4），說明草酸和偏磷酸均可作為較好的抑制劑阻止Vc氧化。但由于偏磷酸遇熱不穩定，本研究選擇2%草酸作為樣品浸提劑。液態Vc有較強的還原性，在酸性溶液中較穩定，為保證在整個測試過程中Vc呈現較穩定的狀態，故流動相應保持酸性。本研究選用0.2% MPA水溶液及0.1%草酸水溶液作為流動相進行測試，結果均呈單峰且出峰快。出于與浸提劑一致性考慮，本研究選擇0.1%草酸作為相關實驗的流動相。

2.6 不同品種番木瓜果實中Vc含量比較

通過對海南常見的3個番木瓜品種Vc含量的測定，發現這3種番木瓜品種Vc含量總體差異不大，含量從高到低依次為中白、小青、大青（表5）。

3 討論與結論

利用全波長掃描Vc標準溶液，發現在254 nm處有最大吸收值，因此選擇254 nm作為色譜的檢測波長。本研究結果表明，HPLC法線性范圍較寬，線性關系良好，說明在測試過程中，Vc受環境干擾少；通過重復性測試可知，HPLC法的RSD為0.68%，說明該方法重現性好，結果穩定、可靠，明顯優于傳統滴定法，大大減少了肉眼觀察滴定終點的誤差，提高了測定的準確度。HPLC法的回收率為98.56%～103.21%，說明該方法準確、可靠。綜上所述，采用高效液相色譜法測定番木瓜中Vc含量具有選擇性好、靈敏度高、操作簡單、結果可靠等優點，是測定Vc含量的理想方法。本研究測定了海南常見的3個番木瓜品種果實的Vc含量，發現這3個番木瓜品種Vc含量總體差異不大，從高到低依次為中白、小青、大青。本研究結果可為喜好生食番木瓜的民眾提供一定的參考價值。

參考文獻

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