CK2β、VEGF和p53蛋白表達對宮頸癌患者預后的預測價值研究

陳曉露，張　波，吳蓉宜

(1.樂山職業技術學院病理教研室，四川樂山 614000；2.四川省成都市第六人民醫院病理科　610051)

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CK2β、VEGF和p53蛋白表達對宮頸癌患者預后的預測價值研究

陳曉露1，張波1，吳蓉宜2

(1.樂山職業技術學院病理教研室，四川樂山 614000；2.四川省成都市第六人民醫院病理科610051)

[摘要]目的探討蛋白激酶CK2β、血管內皮生長因子(VEGF)和p53蛋白表達對宮頸癌患者預后的預測價值。方法選取成都市第六人民醫院婦科宮頸癌手術患者123例作為研究組，同期選取慢性宮頸炎手術患者119例作為對照組，采用免疫組化法檢測CK2β、VEGF和p53蛋白表達水平，比較兩組陽性表達差異和分析3者對預后的預測價值。結果研究組CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達率明顯高于對照組，兩組比較差異具有統計學意義(P<0.05)，CK2β、VEGF和p53蛋白表達與臨床分期、病理分級、淋巴結轉移具有明顯的相關性，其中臨床分期和病理分級越高，合并淋巴結轉移者CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達率越高，差異具有統計學意義(P<0.05)，宮頸癌患者5年生存率為47.97%(59/123)，其中預后狀況與臨床分期、病理分級、淋巴結轉移、CK2β、VEGF及p53表達顯著相關，臨床分期和病理分級越高，合并淋巴結轉移及CK2β、VEGF與p53陽性表達者5年生存率更低，差異具有統計學意義(P<0.05)，其中Cox多因素分析顯示，CK2β、VEGF與p53表達是預后狀況的獨立影響因素。結論宮頸癌組織CK2β、VEGF和p53陽性表達顯著上調，其中三者陽性表達預示疾病預后欠佳，對疾病的預后狀況具有重要的預測價值。

[關鍵詞]宮頸腫瘤；CK2β；血管內皮生長因子；預后

宮頸癌是婦產科常見的惡性腫瘤，其中發展中國家宮頸癌的發生率約占婦產科惡性腫瘤的20%～30%，嚴重威脅女性身心健康[1]。目前受性傳播疾病和環境改變的影響，宮頸癌發生率呈逐漸增高的傾向，且發生年齡呈逐漸年輕化趨勢[2]。蛋白激酶CK2β可能參與惡性腫瘤的發生和發展；血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在惡性腫瘤中的表達明顯增加，且與腫瘤細胞浸潤、轉移和預后具有明顯的相關性；即生型p53是一種抑癌基因，p53結構和功能異常改變與宮頸癌的發生和發展具有緊密的關系。但關于CK2β、VEGF和p53蛋白表達對宮頸癌患者預后的預測價值研究甚少，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2008年1月至2010年1月成都市第六人民醫院婦科宮頸癌手術患者123例作為研究組，納入標準：全部患者均經組織病理學檢查明確宮頸癌的診斷標準[3]，均經倫理委員會同意，全部患者簽署知情同意書，并實施第1次手術治療，術前未經化療、放療和免疫性治療等輔助治療措施，隨訪資料完整，患者年齡23～75歲，平均(49.51±7.65)歲，腺癌21例，鱗癌102例，腫瘤直徑測量根據婦科檢查和MR檢查結果確定，直徑小于4 cm 64例，直徑大于或等于6 cm 59例，臨床分期：Ⅰ期56例，Ⅱ～Ⅲ期67例；病理分級：Ⅰ～Ⅱ級98例，Ⅲ級25例，合并淋巴結轉移43例，無淋巴結轉移80例。同期選取慢性宮頸炎 [人乳頭瘤病毒(HPV)檢測排除HPV陽性轉化為癌前病變或癌變]手術患者119例作為對照組，年齡24～76歲，平均(50.13±6.98)歲，兩組患者年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑兔抗人多克隆CK2β抗體(1∶200)，鼠抗人多克隆VEGF抗體(1∶200)，鼠抗人單克隆p53抗體(1∶800)，抗體稀釋液均由上海基因科技有限公司提供，Elivision二步法工作試劑盒，PBS緩沖液、DAB顯色劑均有北京金橋生物技術有限公司提供。

1.3方法采用Elivision免疫組織化學方法檢測CK2β、VEGF和p53蛋白表達水平。全部宮頸組織標本均采用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續5 μm厚切片，乙醇梯度水化處理，PBS緩沖液洗滌3次，采用高溫高壓修復3 min，3%H2O2孵育10 min，PBS緩沖液洗滌3次，滴加CK2β、VEGF、p53一抗，室溫下孵育120 min，滴加二抗，室溫下孵育60 min，棄PBS緩沖液，采用DAB顯色劑顯色操作，蘇木精復染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，實驗步驟嚴格參照Elivision二步法工作試劑盒操作。

1.4觀察指標

1.4.1臨床分期評估標準采用2009年國際婦產科協會(FIGO)關于國際宮頸癌分期標準[4]，0期：原位癌；Ⅰ期：癌癥病灶局限于宮頸，不累及子宮體部；Ⅱ期：癌癥病灶超出子宮頸，但尚未達到盆壁或陰道下1/3；Ⅲ期：癌癥病灶累及盆壁及陰道下1/3，合并癌癥相關性腎盂積水或腎無功能者；Ⅳ期：癌癥病灶擴散超出真骨盆，臨床侵犯直腸黏膜或膀胱黏膜。

1.4.2病理分級采用三級分級系統[5]，Ⅰ級：高分化，癌巢中合并多數角化現象；Ⅱ級：中度分化，宮頸上皮中層細胞分化，細胞大小不一，癌巢中無明顯角化現象；Ⅲ級：低分化和未分化的小細胞。

1.4.3免疫組化結果判定[6]對于細胞核出現黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞，200倍顯微鏡下隨機選取5個視野，計數100個細胞，采用陽性細胞率與染色強度的半定量積分法評估，陽性細胞率0～10%評定0分，11%～25%評定為1分，26%～50%評定為2分，51%～75%評定為3分，76%～100%評定為4分；染色強度無色評定為0分，染色強度淡黃色評定為1分，染色強度棕黃色評定為2分，染色強度棕褐色評定為3分。陽性細胞率積分+染色強度積分=0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～5分為中度陽性，6～7分為強陽性，最終陰性和弱陽性作為陰性表達，以中度陽性和強陽性作為陽性表達。

1.4.4隨訪全部患者均采用信訪、電話和門診等方式實施隨訪，以出院之日開始實施隨訪，以死亡、失訪及最后1次隨訪時間(2015年5月1日)作為隨訪截止日期。生存期是指確診之日至死亡之日，采用年作為計算單位。

1.5統計學處理采用SPSS18.0統計軟件進行分析，兩組間的計數資料采用χ2檢驗，預后生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線，采用Cox風險回歸模型分析預后的獨立影響因素，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組CK2β、VEGF和p53蛋白表達比較研究組CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達率明顯高于對照組，兩組比較差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1，圖1。

表1　兩組CK2β、VEGF和p53蛋白表達比較[n(%)]

A：CK2β；B：VEGF；C：p53；→：陽性細胞。

圖1CK2β、VEGF和p53蛋白在宮頸癌組織中呈強陽性表達(免疫組織化學法×200)

2.2CK2β、VEGF和p53蛋白表達與臨床病理參數的關系CK2β、VEGF和p53蛋白表達與臨床分期、病理分級、淋巴結轉移具有明顯的相關性，其中臨床分期和病理分級越高，合并淋巴結轉移者CK2β、VEGF和p53蛋白陽性表達率越高，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3宮頸癌預后狀況及其相關因素分析研究組5年生存率為47.97%(59/123)，其中預后狀況與臨床分期、病理分級、淋巴結轉移、CK2β、VEGF及p53表達顯著相關，臨床分期和病理分級越高，合并淋巴結轉移及CK2β、VEGF與p53陽性表達者5年生存率越低，不同臨床病理特征差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3；CK2β、VEGF與p53表達是預后狀況的獨立影響因素，見表4。

表2　CK2β、VEGF和p53蛋白表達與臨床病理參數的關系

表3　宮頸癌預后狀況的單因素分析[n(%)]

表4　宮頸癌預后狀況的多因素分析

3討論

蛋白激酶CK2β廣泛存在于真核細胞中的絲氨酸/蘇氨酸激酶內，具有高度結構穩定性，存在與細胞核基質相關的半胱氨酸殘基，可作為CK2β信號通路細胞內傳遞間的位點。相關文獻報道表明，CK2β通過調節細胞內腫瘤轉移侵襲相關的信號通路，促進惡性腫瘤細胞增殖，抑制腫瘤細胞凋亡，增強惡性腫瘤細胞多重耐藥表型，促進腫瘤新生血管形成等[7]。CK2β異常表達與臨床病理特征和疾病預后狀況具有明顯的相關性。食管癌組織CK2β陽性表達率明顯高于食管正常組織，且與食管癌臨床分期具有緊密的關系[8]。CK2β與惡性腫瘤臨床分期、組織學分化程度和浸潤深度等臨床病理特征緊密相關，可作為惡性腫瘤預后評估指標之一。同時，CK2β在部分惡性腫瘤化療耐藥期間具有一定的作用，化療藥物可通過干擾CK2β因子介導的磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase，PI3K/Akt)途徑顯著增強惡性腫瘤細胞對化療藥物的敏感程度，從而誘導惡性腫瘤細胞凋亡。但關于CK2β用于預測宮頸癌預后狀況的價值研究甚少。本研究結果顯示，CK2β表達在宮頸癌組織中顯著增強，其臨床分期、病理分級越高，CK2β陽性表達率越高；合并淋巴結轉移者CK2β陽性表達率更高。本研究進一步的預后相關因素分析顯示，CK2β陽性可作為宮頸癌預后的獨立預測指標，其中，CK2β陰性表達者5年生存率是CK2β陽性表達者的4.285倍。因此，CK2β陽性表達預示宮頸癌預后欠佳，CK2β表達對宮頸癌患者預后具有重要的預測價值。

VEGF是目前發現的特異性血管內皮生長刺激因子之一，其在腫瘤組織中顯著性高表達，通過促進新生血管內皮細胞形成，從而促進腫瘤新生血管形成。大量研究證實，VEGF與腫瘤發生和發展的關系密切，采用免疫組織化學法、原位雜交法和PT-PCR法檢測VEGF表達均顯示子宮內膜癌、肺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、食管癌、胃癌、結直腸癌和乳腺癌等多種惡性腫瘤中的臨床分期、病理分級和淋巴結轉移程度均與VEGF表達水平具有明顯的相關性[9]。相關研究顯示，VEGF具有誘導宮頸癌組織周圍新生淋巴管形成，增強惡性腫瘤淋巴結轉移和浸潤侵襲程度。同時，VEGF表達上調現象更容易發生于合并盆腔淋巴結轉移者[10]。因此，VEGF過表達和宮頸癌的發生和發展具有明顯的關系。VEGF作為下游信號傳遞關鍵因子，其通過促進HPV持續感染宮頸上皮過表達增加HPV含量，并促進HPV持續感染形成VEGF，誘導腫瘤細胞新生血管和淋巴管形成過程，參與宮頸上皮內瘤變向宮頸癌的發展過程，同時促進宮頸癌的轉移、侵襲和浸潤。因此，VEGF在宮頸癌的診斷中具有一定的價值，但關于其對宮頸癌疾病預后的預測價值研究甚少。本研究結果顯示，宮頸癌組織VEGF陽性表達率顯著增加，其增加程度與臨床分期、病理分級和淋巴結轉移顯著相關，其中VEGF陽性表達的宮頸癌患者5年生存率顯著下降，甚至為VEGF陰性表達者的0.334倍(1/2.996)。因此，VEGF陰性表達預示宮頸癌預后狀況良好，VEGF表達對宮頸癌預后具有重要的預測價值。

p53基因是目前發現與人類腫瘤發生和發展緊密相關的基因，正常細胞中存在野生型p53基因，具有參與細胞凋亡和細胞周期、細胞分化、血管形成和DNA代謝等生理活動過程。但p53基因突變則導致正常生理功能喪失，且具有癌基因活性，促進細胞惡變和細胞過度增殖，促進腫瘤發生和發展。相關研究顯示，人類大部分惡性腫瘤普遍存在突變型p53基因，其產物p53蛋白表達在骨巨細胞瘤惡變或復發者中明顯增強，提示p53基因在細胞惡性轉化過程中發揮重要的作用，進一步生存分析研究顯示，p53蛋白陽性表達患者總生存時間顯著縮短，可作為評估骨巨細胞瘤預后的預測指標[11]。但關于p53蛋白對宮頸癌預后預測價值研究甚少，本研究結果顯示，p53蛋白表達對宮頸癌預后狀況具有重要的預測價值，其中p53蛋白陽性表達者預后狀況欠佳，5年生存率顯著降低，僅為p53蛋白陰性表達者的0.327倍(1/3.056)，分析其原因可能與p53蛋白陽性表達者臨床分期、病理分級及合并淋巴結轉移率更高等因素顯著相關，最終導致p53蛋白陽性表達的宮頸癌預后狀況欠佳，反之，p53蛋白陰性表達者疾病預后狀況良好。大量研究表明，p53在惡性腫瘤組織中的表達顯著增高[12]。但關于其對宮頸癌臨床療效的評估價值研究甚少。

綜上所述，宮頸癌組織CK2β、VEGF和p53陽性表達顯著上調，三者均通過調控腫瘤細胞凋亡過程，從而在惡性腫瘤的發生與發展中發揮重要的作用，其中三者陽性表達預示疾病預后欠佳，對疾病的預后狀況具有重要的預測價值。

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doi:·經驗交流·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.08.027

作者簡介：陳曉露(1977-),學士，副教授，主要從事病理學方面的研究。

[中圖分類號]R711.74

[文獻標識碼]B

[文章編號]1671-8348(2016)08-1083-04

(收稿日期：2015-09-15修回日期：2015-11-06)