聯合檢測血漿中BIRC5、MYC的自身抗體水平在宮頸癌診斷中價值分析*

麥麗萍　麥志周

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聯合檢測血漿中BIRC5、MYC的自身抗體水平在宮頸癌診斷中價值分析*

麥麗萍①麥志周②

【摘要】目的：探討聯合檢測血漿中BIRC5、MYC的自身抗體水平在宮頸癌診斷中的價值，以期尋找早期診斷宮頸癌的新型腫瘤標志物。方法：選取2014年2月-2015年7月本院收治的宮頸癌患者91例作為宮頸癌組，另選取同期在本院體檢的86例健康女性作為對照組。采用ELISA法檢測兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平，并進行組間比較。結果：宮頸癌組外周血中BIRC5、MYC自身抗體水平均高于對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；兩組BIRC5 與MYC混合抗原的自身抗體水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）；ROC分析結果顯示，BIRC5自身抗體檢測的曲線下面積（AUC）、特異性、敏感性、陽性預測值、陰性預測值依次為0.680、91.28%、21.05%、66.48%、52.49%；MYC自身抗體檢測的AUC、特異性、敏感性、陽性預測值、陰性預測值依次為0.662、89.64%、8.14%、44.65%、49.52%；BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平檢測的AUC、特異性、敏感性、陽性預測值、陰性預測值依次為0.752、92.34%、28.43%、73.58%、55.50%。結論：BIRC5、MYC自身抗體均與宮頸癌具有一定的相關性，BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測診斷宮頸癌的敏感性和特異性明顯優于單一抗原自身抗體檢測，聯合檢測可提高檢測效率。

【關鍵詞】宮頸癌； BIRC5； MYC； 混合抗原； 診斷

①廣東省佛山市順德區第一人民醫院附屬杏壇醫院 廣東佛山 528325

②廣東省佛山市第一人民醫院禪城醫院

First author’s address：Xingtan Hospital Affliated to Shunde District First People’s Hospital of Foshan City，Foshan 528325，China

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月-2015年7月本院收治的宮頸癌患者91例作為宮頸癌組，年齡34~64歲，平均（50.18±5.83）歲；其中Ⅰ期44例，Ⅱ期47例。納入標準：（1）首次經臨床表現、體征、細胞學檢查、陰道鏡檢查及病理組織學檢查確診為宮頸癌患者，國際婦產科聯盟（FIGO）分期為Ⅰ~Ⅱ期；（2）未曾接受過化學治療、放射治療等抗腫瘤治療，無宮頸手術史。排除標準：（1）合并自身免疫性甲狀腺疾病、強制性脊柱炎、系統性紅斑狼瘡等嚴重自身免疫系統疾病史或合并其他惡性腫瘤；（2）器官移植，需長期應用免疫抑制劑；（3）有嚴重宮頸炎癥性疾病。另選取同期在本院體檢的86例健康女性作為對照組，年齡31~62歲，平均（49.87±6.05）歲。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經本院醫學倫理委員會審批，所有納入對象均對本研究相關事項了解，并簽署書面知情同意書。

1.2方法 所有研究對象均于清晨無菌采集空腹肘靜脈血2~3 mL，于室溫下靜置，待血細胞和血漿自然分層后離心（2500 r/min）10 min，取上層清液于離心管中，并置于-20 ℃冰箱中保存待測。所有檢測操作均于冰浴條件下進行。將新合成的抗原采用抗原包被緩沖液稀釋至適宜濃度（BIRC5 10 μg/mL，MYC 10 μg/mL，BIRC5與MYC混合抗原15 μg/mL，對照抗原20 μg/mL），按照棋盤法設計96孔酶標板，每孔加入100 μL的抗原工作液。采用封板膜將96孔酶標板封閉，搖勻后置于4 ℃條件下孵育過夜。摘除封板膜，將包被緩沖液和殘留液體棄掉后置于自動洗板機中進行洗滌。每孔加入100 μL含有血漿樣本的分析緩沖液（血漿樣本：分析緩沖液=1∶200），封板膜封閉，搖勻后置于20 ℃條件下孵育1.5 h。摘除封板膜，將分析緩沖液和殘留液體棄掉后置于自動洗板機中進行洗滌。每孔加入100 μL稀釋于分析緩沖液的辣根過氧化物標記的羊抗人抗體（酶標抗體：分析緩沖液=1∶25000），封板膜封閉，搖勻后置于20 ℃條件下孵育1.0 h。摘除封板膜，將分析緩沖液和殘留液體棄掉后置于自動洗板機中進行洗滌。每孔加入100 μL的TMB顯色液，搖勻后置于25 ℃、避光條件下孵育20 min。每孔加入50 μL硫酸（10.9%）終止顯色反應。利用酶標儀檢測光密度值，計算抗原與抗體的特異結合指數（SBI），即血漿中抗原自身抗體水平。以健康對照組第95百分位數的SBI值作為陽性閾值，統計陽性率。

1.3統計學處理 所有數據均經SPSS 17.0統計學軟件進行分析，計量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料用率（%）表示，比較采用Χ2檢驗，采用受試者工作曲線（ROC曲線）分析抗原自身抗體水平檢測價值，以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體水平比較 宮頸癌組外周血中BIRC5、MYC自身抗體水平均高于對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；兩組BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

表1 兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體水平比較（±s）

表1 兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體水平比較（±s）

組別　BIRC5　MYC　BIRC5+MYC宮頸癌組（n=91）1.301±0.192　1.400±0.241　0.872±0.098對照組（n=86）　1.172±0.211　1.288±0.269　0.857±0.087 t值　4.258　2.921　1.075 P值　0.001　0.006　0.089

2.2血漿中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體檢測診斷宮頸癌的ROC曲線分析 ROC分析結果顯示，BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測診斷宮頸癌的敏感性和特異性明顯優于單一抗原自身抗體檢測，見表2及圖1。

表2 血漿中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體檢測診斷宮頸癌的ROC分析

圖1 血漿中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原身抗體檢測診斷宮頸癌的ROC曲線

3　討論

研究證實，腫瘤相關抗原可誘導機體產生自身抗體，可否以腫瘤相關抗原的自身抗體作為腫瘤標志物已成為臨床研究熱點之一[4-6]。BIRC5是一種癌基因，在正常生理狀態下，其表達受P53抑制，故當P53發生突變時，其表達水平異常升高，進而通過阻斷細胞凋亡信號通路，促進細胞增殖和細胞轉化，最終導致腫瘤的發生[7-9]。MYC是一種定位于人體的第8號染色體上的原癌基因，編碼與細胞增殖相關的轉錄因子，其異常表達可導致細胞增殖和凋亡調控紊亂，導致細胞過度增殖，最終導致腫瘤的發生、發展[10-12]。

本研究在傳統的ELISA法的基礎上對腫瘤相關抗原自身抗體檢測方法進行改進，通過導入與人類無同源性的山羊抗原作為對照抗原，以重復孔OD值的離散度和質控血的OD值判斷結果的穩定性，同時優化結果評價公式，可有效降低非特異性信號的干擾，提高外周血BIRC5、MYC及BIRC5 與MYC混合抗原的自身抗體的檢測效率。本研究結果顯示宮頸癌患者外周血中BIRC5、MYC自身抗體水平明顯高于健康女性，而BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平無明顯差異，與國外多項研究結果一致[13-15]。利用ROC曲線分析外周血BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測在宮頸癌診斷中的應用價值，結果顯示宮頸癌BIRC5、 MYC及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測的AUC分別為0.680、0.662、0.752，且BIRC5、BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測的特異性、敏感性、陽性預測值、陰性預測值尚可，與自身抗體檢測一般水平相匹配，故BIRC5、BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測均具備一定的宮頸癌診斷價值，而MYC自身抗體檢測的陽性預測值、陰性預測值均較低，故其在宮頸癌診斷中有待進一步改善和提高。此外，本研究結果表明，BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測宮頸癌的敏感性和特異性均明顯優于單一抗原自身抗體檢測，提示聯合檢測BIRC5、MYC自身抗體可提高診斷效率，利于宮頸癌早期診斷。

綜上所述，BIRC5、MYC自身抗體均與宮頸癌具有一定的相關性，BIRC5與MYC混合抗原自身抗體檢測宮頸癌的敏感性和特異性明顯優于單一抗原自身抗體檢測，聯合檢測可提高檢測效率。由于血漿成分復雜，未能完全避免非特異性交叉結合，仍存在非特異性干擾，且本研究樣本量較少，導致腫瘤相關抗原自身抗體的檢測效率較低，故在臨床工作中仍需總結經驗，進一步優化ELISA法，以改善并提高特異性結合的信號強度，同時增加樣本數量，提高檢測效率。

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*基金項目：佛山市醫學類科技攻關項目（201208229）

通信作者：麥麗萍

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.10.003宮頸癌是女性較為常見的惡性腫瘤之一，具有發病率高、復發率高和預后不佳等特點，近年來其發病率呈逐年上升趨勢，已成為嚴重威脅女性身心健康的重要疾病。早期宮頸癌經有效治療后可完全治愈，而隨著疾病進展，其治愈率逐漸降低，故宮頸癌早期診斷并予以有效治療對提高宮頸癌治愈率具有十分重要的臨床意義[1]。近年來，甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）等多種腫瘤相關抗原已逐漸應用于惡性腫瘤早期診斷與預測中，但臨床實踐中發現上述抗原在惡性腫瘤早期診斷和預測中缺乏特異性和敏感性[2]。有研究表明，腫瘤相關抗原自身抗體的檢測具有特異性強、靈敏度高、檢測速度快、操作簡便等特點[3]。故本研究采用ELISA法檢測宮頸癌患者和健康女性外周血中BIRC5、MYC 及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平，分析三者在早期宮頸癌診斷中的檢測效果，以期尋找早期診斷宮頸癌的新型腫瘤標志物，現報道如下。

收稿日期：（2015-11-27） （本文編輯：王利）

Value Analysis of Combined Detection of BIRC5，MYC Autoantibody Levels in the Diagnosis of Cervical Cancer/MAI Li-ping，MAI Zhi-zhou.//Medical Innovation of China，2016，13（10）：008-011

【Abstract】Objective：To discuss the combined detection of BIRC5，MYC autoantibody levels in the diagnosis of cervical cancer in order to find a new type of tumor markers for early diagnosis of cervical cancer. Method：91 cases of patients with cervical cancer in our hospital from February 2014 to July 2015 were selected as cervical cancer group，and 86 cases of healthy women who took physical examination in our hospital at the same period were selected as control group.The plasma levels of BIRC5，MYC and BIRC5 mixed MYC（mixed antigen）autoantibody were detected and compared between the two groups.Result：Compared with the control group，the plasma levels of BIRC5，MYC autoantibody of the cervical cancer group were higher，the differences were statistically significant（P<0.05），and there was no statistically significant difference in the autoantibody level of mixed antigen between the two groups（P>0.05）.ROC analysis showed that the AUC，specificity，sensitivity，positive predictive value，negative predictive value of BIRC5 autoantibody were 0.680，91.28%，21.05%，66.48%，52.49%，MYC autoantibody were 0.662，89.64%，8.14%，44.65%，49.52% and mixed antigen were 0.752，92.34%，28.43%，73.58%，55.50%.Conclusion：BIRC5，MYC autoantibody are correlated with cervical cancer.Combined detection of BIRC5，MYC autoantibody in the diagnosis of cervical cancer has better specificity and sensitivity than a single antigen，it can improve detection efficiency.

【Key words】Cervical cancer； BIRC5； MYC； Mixed antigen； Diagnosis