藤梨根藥材中多糖的含量測定及不同來源樣品質量評價

王亞瓊溫芝琪鐘水生張華峰

（1蘇州市食品藥品檢驗所，江蘇 蘇州 215104；2蘇州大學藥學院，215123）

藤梨根藥材中多糖的含量測定及不同來源樣品質量評價

王亞瓊1溫芝琪2鐘水生1張華峰1

（1蘇州市食品藥品檢驗所，江蘇 蘇州 215104；2蘇州大學藥學院，215123）

目的：研究藤梨根藥材中多糖的提取及含量測定方法，以評價藤梨根藥材的質量。方法：采用水提醇沉法提取多糖，用苯酚-硫酸法，在485 nm處測定不同來源藤梨根多糖的含量。結果：原藥材多糖含量為24.37～56.96 mg/g，商品藥材多糖含量為8.53～22.49 mg/g，原藥材中多糖含量明顯高于市售飲片中多糖的含量，皮部多糖的含量是木部的2～4倍。結論：該方法簡單，準確，重復性好，可作為藤梨根藥材的質量控制方法。

藤梨根；多糖；苯酚-硫酸法；含量測定；來源；質量評價

多糖是藤梨根中的重要抗腫瘤成分，具有顯著的生物學活性［1-3］。然而，目前關于藤梨根多糖含量的評價分析研究報道甚少。多糖的定量方法一般有苯酚-硫酸法，蒽酮-硫酸法及3，5-二硝基水楊酸比色法等。苯酚-硫酸法原理是糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛可與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在一定范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485 nm左右波長處有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。由于苯酚-硫酸顯色反應穩定性更好［4-6］，方法較為簡單，快速，因此本實驗采用苯酚-硫酸法測定藤梨根藥材中多糖的含量。

1 儀器、試劑及材料

1.1 儀器

DFY-300粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；標準藥篩（遼寧省遼陽金屬制品廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海躍進醫療器械有限公司）；Lambda 35紫外分光光度計（Perkin Elmer，USA）；Sorvall ST 8臺式離心機（Thermo，USA）；AG245電子天平（METTLER，Switzerland）。

1.2 試劑

無水乙醇，苯酚及硫酸均為分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司。超純水（Millpore，USA）。

1.3 材料

D-無水葡萄糖（批號：110833-201205，中國食品藥品檢定研究院），3批藤梨根原藥材分別產自安徽大別山，南京六合，福建寧德，由蘇州市食品藥品檢驗所鑒定為中華獼猴桃（Actinidia chinensis Planch.）的干燥根。其他商品藥材均來源于市場。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備

取供試藥材細粉 2 g，精密稱定，加超純水60 mL沸水浴熱回流，放冷后，3 500 rpm/min離心5 min，精密量取上清液2 mL，置15 mL離心管中，精密加入無水乙醇，搖勻，冷藏過夜，取出，7 000 rpm/min離心5 min，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2 對照品溶液的制備

取D-無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL含90 μg的溶液，即得。

2.3 最大波長的確定

取適量對照品溶液及樣品溶液測定全波長掃描圖，如圖1，因此選擇485 nm為測定波長。

2.4 測定

精密量取供試品溶液1.0 mL，置10 mL具塞試管中，精密加入5%苯酚溶液1 mL（臨用配制），搖勻，再精密加入硫酸5 mL，搖勻，置沸水浴中加熱20 min，取出，置冰浴中冷卻5 min，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》（2015年版）四部通則 0401）［7］，在 485 nm的波長處測定吸光度。

圖1 全波長掃描圖

2.5 多糖提取條件優化

根據文獻報道［4-6］，并結合實驗的實際情況，針對浸提時間，浸提次數，醇沉倍數及時間進行考察，以確定提取多糖的最佳實驗條件。

2.5.1 提取時間供試品按“2.1”方法分別浸提1，2，3，4，5，6 h后，按“2.4”方法測定，結果如圖2，發現在3 h內，多糖含量呈遞增趨勢，但隨時間延長，多糖的溶出達到平衡狀態，因此浸提時間選擇為3 h。

圖2 提取時間考察

2.5.2 浸提次數供試品按“2.1”方法分別浸提1，2，3次，按“2.3”方法測定，結果發現 2次及 3次提取后多糖含量并無顯著增加，1次已能將樣品中的多糖基本提取完全。

2.5.3 醇沉倍數供試品按“2.1”方法分別以2，3，4倍體積的無水乙醇沉淀，按“2.4”方法測定，結果如圖3，發現3倍體積的沉淀含量最大，因此選用3倍體積的無水乙醇沉淀多糖。

圖3 醇沉倍數

2.5.4 醇沉時間供試品按“2.1”方法加入3倍體積的無水乙醇沉淀后分別于0，1，2，4，6，18 h后離心，按“2.4”方法測定，結果如圖4，發現1小時后，沉淀的多糖量已達平衡。

2.6 穩定性

取3批供試液，于停止反應后0，0.5，1，2，4，6 h按“2.4”方法測定，結果如圖5，發現供試液在冰浴中更加穩定，以1 h內完成測定為宜。

圖4 醇沉時間

圖5 供試液穩定性

2.7 線性關系的考察

精密量取對照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分別置10 mL具塞試管中，各加水補至1.0 mL，按“2.3”方法測定。以質量濃度C（mg/mL）為橫坐標，吸光度A為縱坐標做標準曲線，得回歸方程：

A=11.95C－0.048，

r2=0.999，表明在0.018 17～0.090 85 mg/mL濃度范圍內呈良好線性。

2.8 精密度

精密量取高、中、低濃度對照品溶液（濃度分別為0.090 85，0.054 51，0.018 17 mg/mL）及樣品溶液，按“2.4”方法測定，結果對照品RSD分別為0.27%（高），0.16%（中）及0.08%（低）。樣品RSD 為0.54%。

2.9 重復性

取同一批樣品6份制備供試液，按“2.4”方法測定，結果RSD為4.22%。

2.10 回收率

于苯酚-硫酸反應前樣品溶液中分別加入適量D-無水葡萄糖，按“2.4”方法測定，結果見表1，高、中、低平均回收率分別為97.54%，100.32%及95.56%。

表1 分析方法回收率　（%）

2.11 樣品測定

將收集的12批商品藥材及3批自采原藥材按“2.1”方法制備，“2.4”方法測定，結果如表2。

表2 樣品多糖含量

3 討論

3.1 苯酚-硫酸法是測定多糖常用的方法，但苯酚不穩定，需要臨用現配，同時需要嚴格控制反應時間，精確到秒，反應結束后立即放入冰浴中保存待測。

3.2 藤梨根的商品藥材和自采原藥材有著較大的差別，由于藤梨根的根部較難挖取，商品藥材往往采用的是靠近根莖的部位（地表附近），在木質部多數帶有小孔，即根莖類藥材特有的髓部。從測定結果可以看出商品藥材的多糖含量普便偏低，同時，自采原藥材的皮部與木部比例也普遍略高于商品藥材，多糖的測定結果顯示，皮部多糖的含量是木部的2～ 4倍。根據藤梨根的來源，根莖并非藥用部位，進一步規范藥材市場上藤梨根的藥用部位來源，對于保證藥材的質量和用藥安全具有重要的意義。

［1］張昕.藤梨根多糖的分離純化與活性研究［D］.杭州：浙江大學，2010：58-60.

［2］ 龍凱花，王小平，白吉慶，等.中藥藤梨根抗腫瘤研究［J］.中國現代中藥，2013，15（10）：846-849.

［3］ 赫軍，馬秉智，趙鐵，等.藤梨根的化學成分研究［J］.中國藥學雜志，2014，49（3）：184-186.

［4］ 郝旭亮，張永文.中藥質量標準中建立多指標含量測定的必要性淺析［J］.中國執業藥師，2009，6（9）：31-33.

［5］ 鐘方曉，任海華，李巖.多糖含量測定方法比較［J］.時珍國醫國藥，2007，18（8）：1916-1917.

［6］ 張媛媛，張彬.苯酚-硫酸法與蒽酮-硫酸法測定綠茶茶多糖的比較研究［J］.食品科學，2016，37（4）：158-163.

［7］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2015年版）四部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：38-40.

Determination of Polysaccharide Content in Radix Actinidiae Chinensis and Quality Evaluation of Samples from Various Origins

Wang Yaqiong1，Wen Zhiqi2，Zhong Shuisheng1，Zhang Huafeng1（1 Suzhou Institute for Food and Drug Control，Jiangsu Suzhou 215104，China；2 School of Pharmacy，Suzhou University，215123）

Objective：To investigate the method for extraction and content determination of polysaccharide in radix actinidiae chinensis so as to evaluate the quality of the drug material.Methods：The polysaccharide was extracted by water and precipitated by ethanol，and determined for polysaccharide content by phenol-sulfuric acid method at 485 nm. Results：The content of polysaccharide was 24.37～ 56.96 mg/g in crude drug substance，and 8.53～22.49 mg/g in commercial pieces.The content of polysaccharide in crude drug substance was significantly higher than that in commercial pieces，and was 2～4 times higher in cortex than in xylem.Conclusion：This method is simple，accurate and reproducible，which may be used for quality control of radix actinidiae chinensis.

Radix Actinidiae Chinensis；Polysaccharide；Phenol-sulfuric Acid Method；Content Determination；Origin；Quality Evaluation

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.09.005

2016-04-27）

蘇州市科技局科技計劃項目（SYSD2013139，SYS201584）

王亞瓊，女，主管中藥師。主要從事中藥質量評價相關問題研究。通訊作者E-mail：317888898@qq.com