住院兒童呼吸道標本病原菌分布及耐藥性分析

羅宇鵬

(成都市第五人民醫院檢驗科，四川　成都　611130)

住院兒童呼吸道標本病原菌分布及耐藥性分析

羅宇鵬

(成都市第五人民醫院檢驗科，四川成都611130)

目的:了解我院兒童下呼吸道標本分離病原菌分布對常見抗菌藥物的耐藥性。方法:收集我院2014年兒童呼吸道標本，通過培養和抗菌藥物敏感性和耐藥性試驗，對結果進行統計分析。結果:2 051份標本分離病原菌283株，主要為流感嗜血桿菌(占58.30%)、肺炎鏈球菌(占20.14%)和卡他莫拉菌(占18.73%)。藥敏試驗顯示流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌產β－內酰胺酶陽性率分別為41.8%和100.0%，青霉素耐藥的肺炎鏈球菌檢出率為3.8%。結論:流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和卡他莫拉菌是引起我院2014年兒童呼吸道感染的主要病原菌，提示定期分離病原菌并進行耐藥性監測統計有助于及時了解其耐藥性的變遷，起到監督、管理及指導對兒童抗菌藥物合理應用的作用。

兒科;病原菌;敏感性;耐藥率

優先數字出版地址:http://www．cnki．net/kcms/detail/51.1688．R.20151228.1702.038．htm l

下呼吸道感染是兒童的常見病，迄今為止仍是我國小兒首位的感染性疾病，也是導致兒童抗菌藥物使用頻率最高、數量最大的疾病［1］，常引起發熱、咳嗽、咳痰、氣緊等呼吸道癥狀，嚴重影響兒童的生活質量。而社區獲得性肺病最常見致病菌是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌及卡他莫拉菌，這幾種菌對營養要求較高，稱為苛養性細菌，也是引起兒童社區獲得性呼吸道感染的主要致病菌，還可引起肺炎、支氣管炎、支氣管肺炎、咽炎、腦膜炎甚至敗血癥。由于抗菌藥物在臨床的廣泛應用，細菌耐藥性也越來越嚴重，且具有一定的區域性。因此，及時、準確地掌握本地區兒童呼吸道感染病原菌分布及細菌耐藥性動態，可為指導臨床經驗用藥提供依據。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株來源收集2014年1月1日至12月31日我院兒科住院呼吸道標本2 051份。

1.1.2培養基及抗菌藥物紙片珠海迪爾鑒定藥敏板條均為廣州珠海迪爾公司產品;哥倫比亞血瓊脂培養基、麥康凱培養基、含萬古霉素巧克力培養基、HTM培養基(流感嗜血桿菌藥敏試驗培養基)由成都瑞琦公司提供;復方新諾明、氨芐西林、環丙沙星、頭孢曲松、頭孢呋辛、阿奇霉素、四環素、亞胺培南、Ⅴ因子、Ⅹ因子、(Ⅴ+Ⅹ)因子紙片及頭孢硝噻吩等藥敏紙片為英國OXOID公司產品。

1.1.3質控菌株流感嗜血桿菌ATCC49247及ATCC49766、金黃色葡萄球菌ATCC29213、銅綠假單胞菌ATCC27853、肺炎鏈球菌ATCC49619、糞腸球菌ATCC49212、克柔念珠菌6258等。

1.2方法參照CLSIM100－S24相關文件進行抗菌藥物敏感試驗［2］。

1.2.1下呼吸道標本的篩查［3］直接或通過洗滌后達到顯微鏡高倍鏡下白細胞數≥25個、低倍鏡下上皮細胞≤10個視為合格標本，進行一步洗滌勻質化;若高倍鏡下白細胞數＜25個，視為不合格標本。

1.2.2下呼吸道標本的洗滌、涂片、勻質化及接種孵育對于篩查合格的痰液標本，加入適量的生理鹽水進行洗滌，挑取膿性痰液部分進行涂片革蘭染色，同時加入1%胰蛋白酶粉35℃進行勻質化60～90 min后，分區畫線接種哥倫比亞血瓊脂、麥康凱、巧克力培養基，麥康凱培養基放置普通孵育箱孵育(35℃，18～24 h)，哥倫比亞血瓊脂及巧克力培養基放置二氧化碳孵育箱孵育(35℃，5%CO2，18～24 h)。

1.2.3致病菌與定植菌(或污染菌)的區分革蘭染色涂片油鏡下檢查見白細胞胞內所吞噬細菌視致病菌;未被白細胞吞噬的細菌則視為定植菌(或污染菌)［3］。

1.2.4細菌鑒定及藥敏試驗細菌的鑒定及藥敏均采用珠海迪爾鑒定板條及藥敏試驗，迪爾板條不能涉及的藥敏試驗如流感嗜血桿菌藥敏試驗采用紙片擴散法補充完成。

1.2.5β－內酰胺酶檢測用頭孢硝噻吩紙片法檢測葡萄球菌、流感嗜血桿菌及卡他莫拉等細菌。

1.2.6結果判斷和數據分析按照CLSIM100－S24折點準確判讀藥敏試驗結果［2］，采用WHONET5.6軟件進行統計分析。

2　結果

2.1病原菌分布結果詳見表1。

表1　住院兒童下呼吸道標本分離病原菌情況

在剔除重復送檢病例后兒科送檢呼吸道2 051份標本中，分離到病原菌283株，陽性率13.80%。其中革蘭陰性菌占79.15%(224/283)，革蘭陽性菌占20.85%(59/283)。分離出的菌種為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和星座鏈球菌，其中流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和卡他莫拉菌3種苛養菌占97.17%。

2.2病原菌對抗菌藥物的敏感性和耐藥率本文主要對流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌3種病原菌進行抗菌藥物的敏感及耐藥性分析，其他菌種因數量太少未納入分析范圍。

2.2.1流感嗜血桿菌的敏感性和耐藥率試驗結果詳見表2。

表2　165株流感嗜血桿菌對常見的抗菌藥物的敏感性及耐藥率

2.2.2肺炎鏈球菌的敏感性和耐藥率試驗結果詳見表3。

表3　57株肺炎鏈球菌對常見抗菌藥物的敏感性及耐藥率

2.2.3卡他莫拉菌的敏感性和耐藥率試驗結果詳見表4。

表4　53株卡他莫拉菌對常見抗菌藥物的敏感性及耐藥率

3　討論

由于小兒機體發育不成熟，免疫系統功能較差，機體抵抗力相對較弱，下呼吸道感染機會增加，成為嚴重影響小兒身體健康的疾病之一。2014年我院臨床兒科住院患者共送檢下呼吸道標本2 051份，分離出283株病原菌，陽性率為13.80%，較其他醫院的檢出率高出許多［4］，可能與我院兒科密切重視對微生物檢驗相關，也與臨床醫生對痰標本采集的方式方法有關。有資料表明，通過氣管吸痰方式采集遠比誘導兒童咳痰陽性率要高;首次標本在入院第一時間或首次使用抗生素前采集標本送檢，更能提高可疑病原菌檢測率。

我們在所分離病原菌中，革蘭陽性菌占20.85%，革蘭陰性菌占79.15%，與全國細菌耐藥監測網歷年統計數據差別不大［5－7］。排在前3位的病原菌為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌及卡他莫拉菌，三者占檢出病原菌的97.17%，是引起兒童呼吸道感染的主要病原菌，其分離率明顯高于全國細菌耐藥監測網歷年統計數據［5－7］，進一步證實了該3種呼吸道苛養菌是引起兒童社區獲得性感染的主要病原菌，也充分說明了把握標本采集時機、合理的采集手段及微生物室適當的培養條件對兒童呼吸道病原菌分離的重要性。

在本次耐藥性監測統計中，流感嗜血桿菌產β內酰胺酶的菌株占41.8%，另有0.6%的BLNAR(即β內酰胺酶陰性，氨芐西林耐藥菌株)，產生的耐藥機理還是以β－內酰胺酶為主;復方新諾明的耐藥性最高，為88.8%，氨芐西林及四環素也有較高的耐藥性，分別為42.4%、25.5%;而2代、3代頭孢菌素、阿奇霉素及喹諾酮類藥物均保持比較高的敏感性;所分離到的卡他莫拉菌全部產β內酰胺酶，對大環內酯類藥物均有較高的耐藥性，但是對頭孢菌素2代、3代、加酶抑制劑藥物及喹諾酮類都有很高的敏感性;但是喹諾酮類藥物會影響兒童軟骨發育，且由于有很強的誘導耐藥性，一般不推薦用于18歲以下兒童試驗;所以治療流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌感染首選的抗生素應是青霉素/克拉維酸酶抑制劑和2代、3代頭孢菌素類抗菌藥物。青霉素敏感的肺炎鏈球菌(PSSP)占94.3%，青霉素中介的肺炎鏈球菌占1.9%，青霉素耐藥的肺炎鏈球菌(PRSP)占3.8%;肺炎鏈球菌對復方新諾明、克林霉素、阿奇霉素、紅霉素、四環素等耐藥率較高，分別為81.1%、90.4%、96.2%、94.3%、92.5%，但對青霉素、頭孢三代、氯霉素、喹諾酮類藥物仍有較高的敏感性;因為喹諾酮類藥物毒副作用不推薦使用，所以以青霉素為主的β－內酰胺類藥物依然是治療肺炎鏈球菌的首選藥物。

綜上，引起我院兒童呼吸道感染的主要致病菌是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌及卡他莫拉菌這3種苛養性細菌;正確及時地采集到合格的呼吸道標本是提高兒童呼吸道病原菌確診的關鍵。通過藥敏和耐藥試驗，可變經驗性盲目治療為有的放矢治療。對兒童呼吸道分離病原菌進行耐藥性監測，還可了解耐藥性的變遷，為臨床提供有力的實驗室數據，起到監督、管理及指導對兒童抗菌藥物合理應用的作用。

［1］陸權，陳慧中，楊永弘．關注小兒社區獲得性肺炎［J］．中華兒科雜志，2007，45(2):81－82．

［2］Clinical，Laboratory Standards Institute．Perormance standards for antimicrobial susceptibility testing;twenty－fourth informational supplement［S］，2014．

［3］楊進，盧先雷，羅宇鵬．痰液細菌學檢驗的標準化操作程序初探［J］．醫學檢驗與臨床，2008，19(2):7－12．

［4］閔小春，羅少鋒，王威，等．流感嗜血桿菌的臨床分布及耐藥性分析［J］．中華醫院感染學雜志，2014，24(15):3665－3667．

［5］胡付品，朱德妹，汪復，等．2011年中國CHINET細菌耐藥性監測［J］．中國感染與化療雜志，2012，12(5):321－329．

［6］朱德妹，汪復，胡付品，等．2010年中國CHINET細菌耐藥性監測［J］．中國感染與化療雜志，2011，11(5):321－329．

［7］胡付品，朱德妹，汪復，等．2013年中國CHINET細菌耐藥性監測［J］．中國感染與化療雜志，2014，14(5):365－374．

Analysis of Pathogenic Bacteria Distribution and Drug Resistance in Specimens of Pediatric Respiratory Infection

LUO Yupeng
(Clinical Laboratory，Chengdu No.5 People＇s Hospital，Sichuan Chengdu 611130，China)

Objective:To investigate the drug resistance and distribtion of the bacterial pathogen isolated from pediatric respiratory samples．Methods:Analysed the bacterial pathogen distribtion and antibiotic resistance of pediatric respiratory specimens strains in 2014．Results:In the pediatric respiratory specimens strains，the main isolated specimens strains were Haemophilus influenzae(58.30%)，Streptococcus pneumoniae(20.14%)，Branhamella catarrhali(18.73%)．Drug susceptibility test results showed that:．Influenzae and Branhamella catarrhali producing beta lactamase positive rate were 41.8%and 100.0% respectively，and streptococcus pneumonia PRSP detection rate was 3.8%．Conclusion:Haemophilus influenzae，Streptococcus pneumonia and moraxella catarrhalis were the main sources of respiratory infection among children．Regular surveillance of the isolated pathogens resistance from the pediatric respiratory tract could help us to understand its resistance changes，itwould play an active role in strengthening the supervision and management of rational use of antibiotics in children．

pediatric;pathogenic bacteria;sensitivity;resistance rate

R725.6

A

10.11851/j.issn.1673－1557.2016.01.018

E－mail:1241570297@qq．com

2015－05－26)