離心條件對凝血三項檢測結果的影響及分析

馬學斌，白　璐，趙強元

(中國人民解放軍海軍總醫院檢驗科,北京 100048)

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·論著·

離心條件對凝血三項檢測結果的影響及分析

馬學斌，白璐，趙強元

(中國人民解放軍海軍總醫院檢驗科,北京 100048)

目的驗證該實驗室常規凝血檢測離心條件并探討建立優化離心條件。方法以該院體檢者及住院患者為研究對象，分為常規組、標準組、提速組。應用不同離心條件離心獲得乏血小板血漿(PPP)，進行常規凝血項目凝血酶原時間(PT)、國際標準化比率(INR)、纖維蛋白原(FIB)、活化部分凝血活酶時間(APTT)的檢測；其次對不同血小板含量的標本采用常規條件和標準條件離心后，檢測血漿中剩余血小板含量。結果常規組和提速組的凝血常規各項檢測結果與標準組比較，差異無統計學意義(P>0.05)；血小板濃度低于500×109/L時，常規條件和標準條件離心后PPP 100%合格，血小板濃度高于500×109/L時合格率降低為64%。結論目前的常規離心條件可以滿足常規凝血檢測，對特殊類型凝血檢測及血小板濃度高于500×109/L的標本，需要嚴格按照美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)的要求進行離心處理。

凝血檢測；離心條件；乏血小板血漿

凝血檢測已廣泛應用于患者凝血因子和凝血功能的診斷，出血和血栓性疾病的診斷，抗凝藥物和因子替代治療的監測，以及特異性和非特異性抗凝物質的篩查等[1]。凝血檢測結果的準確性受多種因素的影響，其中檢驗前處理程序尤為重要[2]。枸櫞酸鈉抗凝的全血標本在進入分析前，需以一定的速度和時間離心而獲得乏血小板血漿(PPP)。《全國臨床檢驗操作規程(第3版)》規定活化部分凝血活酶時間(APTT)檢測要求3 000 r/min離心10 min，凝血酶原時間(PT)低速分離血漿即可。根據美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)指南于2015年制定的《中華人民共和國衛生標準匯編·臨床檢驗標準卷》為1 500 g離心15 min。本實驗室根據第3版要求采用3 000 r/min離心10 min，但能否滿足新的國家標準，尚未進行驗證；同時為有效縮短凝血標本檢測的周轉時間(TAT)，對提高離心轉速縮短離心時間是否可行也需作進一步的驗證。本研究探討不同離心條件對常規凝血檢測項目的檢測結果影響，包括：凝血酶原時間(PT)、國際標準化比率(INR)、APTT、纖維蛋白原(FIB)。對本實驗室現行的離心條件進行驗證，并進一步建立適合本室條件的凝血項目最佳離心條件。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2015年11月1日至12月30日該院健康體檢者為研究對象，入選標準：(1)基本健康，既往無出血、血栓性疾病。(2)無心、肺、肝、腎和血液系統疾病史。共40例，男26例，女14例，年齡23～80歲，平均年齡(62±5)歲，進行不同濃度血小板PPP驗證。選取該院住院患者，根據不同血小板濃度進行分組。

1.2儀器與試劑美國Instrumentation Laboratory公司的ACL-TOP700全自動血凝分析儀及配套試劑、質控品；日本西森美康XE-2100全自動血細胞分析儀及配套試劑、質控品；美國Backman DL電動離心機，離心半徑12.5 cm。所有儀器均在良好狀態下進行實驗。

1.3方法

1.3.1不同離心條件對凝血項目的檢測結果空腹狀態下，用含109mmol/L枸櫞酸鈉0.3 mL的真空采血管采集受檢者靜脈血2.7 mL，輕輕顛倒混勻后，送到實驗室。共收集40份標本，將每份平均分為3份，每份1 mL，分為常規組、標準組、提速組，分別按不同的離心條件進行離心。常規組按照第3版要求3 000 r/min離心10 min，標準組按照《中華人民共和國衛生標準匯編˙臨床檢驗標準卷》要求1 500 g離心15 min，根據本實驗室離心機的離心半徑(12.5 cm)換算離心轉速為3 302 r/min離心15 min，提速組使用3 600 r/min離心5 min。應用美國Instrumentation Laboratory公司生產配套凍干粉質控品，復溶后分杯-20 ℃凍存，每天早晨常規實驗前取出，室溫放置15 min溶解平衡后，混勻上機檢測，質控在控下進行實驗。PT和APTT均為凝固法；INR采用PT衍生計算法；FIB為Clauss法。所有標本均在采集后4 h內完成離心和上機檢測。

1.3.2常規條件離心后PPP驗證篩選同時檢測全血細胞分析和凝血常規的標本，根據血小板檢測結果分為3組：(100～300)×109/L組，(300～500)×109/L組，(500～800)×109/L組，每組20例，將凝血標本平均分成2份，按常規離心條件(3 000 r/min，10 min)和標準離心條件(3 302 r/min，15 min)平行進行離心后，檢測PPP中剩余血小板含量。

2　結　　果

2.1不同離心條件對凝血三項檢測結果的影響常規組離心條件3 000 r/min換算離心力為1 238 g，離心10 min，提速組3 600 r/min換算離心力為1 782 g離心5 min，標準組1 500 g離心15 min。3組離心后進行檢測，3組間PT、INR、FIB、APTT兩兩比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。說明目前應用的離心條件及提速離心條件均能滿足常規標本的檢測要求。見表1。

表1　　不同離心條件下凝血檢測結果比較±s)

2.2常規離心條件下PPP的驗證結果血小板濃度(100～300)×109/L組和(300～500)×109/L組，常規離心條件下PPP中剩余血小板分別為(5.00±2.05)×109/L和(6.35±2.56)×109/L，2組PPP剩余血小板濃度均低于10×109/L；血小板(500～800)×109/L組，常規離心條件下PPP中有部分剩余血小板高于10×109/L，不合格標本占總例數的36%，而標準離心條件下PPP中剩余血小板全部低于10×109/L。見表2。

表2　　離心后PPP的驗證結果

3　討　　論

凝血常規檢測結果的準確性與檢測流程的標準化、室內質量控制及實驗前多種因素顯著相關，離心制備PPP是其中最關鍵的步驟，因而離心條件的驗證對標準化檢測流程，提高檢測的準確性具有十分重要的臨床意義。

《全國臨床檢驗操作規程(第3版)》規定APTT檢測要求3 000 r/min,離心10 min，PT低速離心分離血漿即可，其他項目無明確要求。由于各醫院所用離心機品牌不同，型號不同，有效離心半徑也不同，因而在相同轉速條件下，獲得相對離心力不相同，而相對離心力才是離心沉降的決定性因素。有研究表明，血小板磷脂與蛋白成分共同促進凝血酶原酶與凝血酶的形成，使整個凝血過程加速2×108倍[3]。推測血小板可使內源性凝血途徑提速近1 000倍，如果離心時間不夠，血小板未完全沉降，相應凝血的磷脂催化表面增加，從而嚴重影響檢測結果。

CLSI建議常規凝血檢測項目及特殊凝血檢測項目離心獲得合格的PPP，即血漿中血小板濃度低于10×109/L，要求離心速度為1 500 g，離心時間不少于15 min[4]。《中華人民共和國衛生標準匯編·臨床檢驗標準卷(2015年版)》采納CLSI的離心條件，作為我國凝血項目檢測的國家標準。

有研究報道，以CLSI推薦的1 500 g為金標準，應用不同的離心力(3 000、1 500、1 000、500 g)離心分離獲得PPP，然后檢測各組離心后PPP中剩余血小板，結果顯示，離心力為1 000 g獲得的剩余血小板與1 500 g離心比較，差異無統計學意義(P>0.05)；而離心力為3 000 g分離的剩余血小板顯著低于1 500 g離心；離心力為500 g的剩余血小板顯著高于1 500 g離心[5]。本研究使用常規離心條件獲得PPP，進行凝血項目檢測結果與標準離心條件下檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，與上述研究結果具有一致性。

本研究探討提高離心速度縮短離心時間對凝血檢測結果的影響。緊急情況下，常規凝血項目的檢測時間不能滿足臨床急診。本組將離心速度提高至3 600 r/min，離心時間縮短至5 min獲得PPP進行凝血檢測，結果表明該結果與標準離心條件下獲得的凝血檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，是緊急情況下縮短TAT的有效、可行方法，與有關文獻報道一致[6-7]。

根據CLSI建議，不同凝血檢測項目對血漿中殘存血小板的要求不同。PT和APTT檢測低于200×109/L即可，而特殊類型凝血檢測項目(蛋白S)則必須要求血漿中血小板濃度低于10×109/L。有研究顯示，1次離心可滿足常規凝血項目，而特殊類型項目則需要經過2次離心才能達到小于10×109/L[8]。有學者研究報道，離心機工作時加速鍵的“開”或者“關”也是影響PPP中剩余血小板的重要因素，建議凝血標本離心時選擇“關”[9]。依據CLSI標準，普通凝血4項檢測在常規離心條件下可達到要求。特殊類型項目需增加離心條件或者進行2次離心，達到合格。由于特殊類型項目的檢測試劑昂貴，本組未進行檢測結果比對，僅以離心后PPP水平驗證離心效果。

某些患者血小板含量非常高，常規離心后是否能滿足檢測要求。本研究選取血小板含量不同的患者凝血標本，按常規及標準條件離心后，檢測PPP中剩余血小板含量，結果顯示，血小板(100～300)×109/L和(300～500)×109/L時，PPP中剩余血小板均在10×109/L以下，而當血小板高于500×109/L時，PPP中剩余血小板僅有64%小于10×109/L，有36%的標本離心后PPP中剩余血小板高于10×109/L，按標準條件離心后血小板全部低于10×109/L。因此對于常規凝血項目檢測，用常規離心條件的PPP水平可接受，但如果是特殊類型凝血項目，如狼瘡抗凝物檢測等，則需要嚴格按照標準要求的離心條件進行離心，獲得標準的、可滿足檢測的PPP[10]。

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Analysis the effect of different centrifugal conditions on the results of coagulation

MAXuebin，BAILu，ZHAOQiangyuan

(DepartmentofClinicalLaboratory,NavyPLAGeneralHospital,Beijing100048,China)

ObjectiveTo verify the effect of different centrifugal conditions on coagulation and ascertain the optimum centrifugal time for coagulation testing in the laboratory.MethodsNavy General hospital check-up and hospitalized patients were divided into three groups which were conventional group,standard group and speed up the group respectively according the different centrifugation conditions.The platelet poor plasma (PPP) was harvested in the three different groups.The PT,INR,FIB and APTT were tested and the results were compared and analyzed.Samples with different platelets were centrifuged in normal condition or standard condition,after that,the residual platelet in plasma was detected.ResultsThere was no significant difference of the PT,INR,FIB and APTT results among the routine group,speed group and the standard group.The results of PPP was qualified 100% in samples which platelets were less than 500×109/L with routine conditions and standards of centrifugal conditions.However,the qualified result of PPP was dropped to 64% in those samples which platelets were higher than 500×109/L with routine and standards of centrifugal conditions.ConclusionThe conventional centrifugation conditions can meet clinical routine coagulation testing requirements,the special types of coagulation assays or the samples which platelets count are more than 500×109/L should centrifuge in accordance with the requirements of the CLSI centrifugal processing.

coagulation testing;centrifugal conditions;platelet-poor plasma

馬學斌,女,主管技師，主要從事凝血與血栓研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.005

A

1673-4130(2016)19-2672-03

2016-02-25

2016-04-20)