缺氧誘導因子-1α在前置胎盤組織中的表達及臨床意義

胥 數

（朝陽市中心醫院婦產科，遼寧 朝陽122000）

缺氧誘導因子-1α在前置胎盤組織中的表達及臨床意義

胥 數

（朝陽市中心醫院婦產科，遼寧 朝陽122000）

目的 檢測缺氧誘導因子 -1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）在前置胎盤組織的表達水平，分析其臨床意義。方法選取我院產科診治的 121 例前置胎盤患者作為觀察組對象，選舉同期 120 例正常孕婦胎盤組織作為對照組，應用免疫組化法和 RT-PCR 法檢測胎盤組織中 HIF-1α 陽性表達水平，對比分析兩組間 HIF-1α 陽性表達率和表達量的差異性。結果觀察組患者 HIF-1α 陽性表達率、IOD 均值以及 HIF-1α mRNA/β-actin 比值均顯著高于對照組，經統計學分析，P＜0.05，差異具有顯著性。結論HIF-1α 在前置胎盤孕婦的胎盤組織中陽性表達率顯著升高，其可作為早期診斷前置胎盤的指標之一。

缺氧誘導因子 -1α；前置胎盤組織；妊娠

HIF-1α作為體內重要的轉錄激活因子，主要由細胞應激缺氧形成，其能夠通過調節種靶基因表達水平，對血管生成、疾病發生發展過程產生重要影響。目前相關研究發現[1-2]胎盤組織中HIF-1α陽性表達水平與妊娠期疾病具有密切關聯。本文通過對比正常胎盤組織和前置胎盤組織中HIF-1α表達水平的不同，旨在為臨床早期診斷前置胎盤提供新思路，現將結果總結如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象：選取我院產科在2013年11月至2015年10月期間收治的121例前置胎盤孕婦作為觀察組對象，年齡22～41歲，平均年齡（30.41±4.15）歲，孕周35～41周，平均孕周（37.9±2.2）周，選取同期在我院產科進行生產的120例正常孕婦作為對照組對象，年齡20～42歲，平均年齡（31.43±4.21）歲，孕周36～42周，平均孕周（38.1±2.4）周，病例選擇標準：①均為初產婦，且選擇剖宮產進行生產；②均為單活胎，且孕周超過32周；③觀察組病例產前經影像學檢查確診為前置胎盤；④對照組孕婦經全面檢查證實為健康人群；⑤排除合并糖尿病、高血壓、心臟病等基礎疾病的孕婦；⑥排除合并盆腔炎、宮頸炎等婦科疾病者；⑦患方在知情同意的基礎上，自愿參與并配合完成。

1.2 實驗方法

1.2.1 采集標本：所有孕婦在驚濤公產將胎盤組織完全娩出后，在胎盤母體面的中央區域立即切除1塊組織（大小為10 mm×10 mm×10 mm），應用DECP溶液沖洗干凈后放置到-80 ℃冰箱中保存備用，此組織用作檢測RNA水平；在胎盤母體面再另取1塊組織（大小為10 mm×10 mm ×10 mm），應用4 ℃生理鹽水將組織沖洗干凈后，應用10%中性甲醛溶液浸泡24 h完成固定，常規進行石蠟包埋處理后，連續切片（切片厚度為5 μm），此塊組織用作免疫組化法檢測。

1.2.2 免疫組化檢測法：采用SP法（即過氧化物酶-抗生物素蛋白鏈菌素）對胎盤組織中HIF-1α表達水平進行檢測，將組織切片進行潑辣和脫水處理之后，利用微波修復抗原，將組織切片放置到0.3%H2O2溶液中浸泡10 min，取出后用PBS（即磷酸鹽緩沖液）反復沖洗3次，添加兔抗人多克隆抗體（即一抗，福建邁新生物科技公司），將PBS緩沖液作對照，在4 ℃恒溫下靜置一夜。次日取出復溫至30 ℃，滴加羊抗小鼠IgG抗體二抗（即二抗，福建邁新生物科技公司），靜置15 min，PBS緩沖液沖洗，添加DAB顯色劑（武漢博士德生物科技公司）、復染、脫水、封片后，放置在顯微鏡下觀察，每張切片選取5個高倍視野，利用ImageS000分析儀采集分析圖像后，測定積分光密度（即IOD值）代表表達量。

1.2.3 RT-PCR法：RT-PCR法對胎盤組織中的HIF-1α mRNA進行檢測，mRNA引物為上海生工生物工程有限公司完成，擴增產物片段長度205 bp，擴增反應條件為：94 ℃下預變30 min→94 ℃下變性30 s→59 ℃下退火30 s→72 ℃下延伸1 min，在完成35個循環后在72 ℃下延伸5 min，獲得的產物進行瓊脂糖凝膠電泳，以HIF-1α和內參照條帶之間的灰度值比作為HIF-1α mRNA表達量。

1.3 陽性評價標準[3]：選取5個高倍鏡頭視野進行陽性標準評價，細胞核著黃色作為陽性判斷標準，根據著色深度和陽性細胞比例進行評分，無色計0分，淡黃色計1分。棕黃色計2分，棕褐色計3分，陽性比例＜5%計0分，5%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分，兩項評分相加后≤2分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統計學處理：數據分析用SPSS15.0統計學軟件，計量資料采用t檢驗分析，計數資料采用卡方檢驗分析，α=0.05作為數據的檢驗水準，P＜0.05，具有顯著性差異。

2 結 果

免疫組化結果顯示，觀察組中共有85例組織為HIF-1α陽性表達，陽性率為70.83%，IOD值為（204.9±24.5），對照組中共有22例組織為HIF-1α陽性表達，陽性率為21.67%，IOD值為（113.4± 15.6），RT-PCR檢測結果顯示觀察組HIF-1α mRNA/β-actin比值為（1.24±0.27），對照組HIF-1α mRNA/β-actin比值為（0.55± 0.12），兩組HIF-1α陽性表達水平相比經統計學分析，P＜0.05，具有顯著性差異。

3 討 論

胎盤前置主要是指在妊娠28周之后胎盤低于胎先露部，其作為妊娠晚期常見疾病之一，是引起妊娠晚期陰道流血的首要原因，如處理不當，能夠對母胎生命安全造成嚴重負面影響[4]。在現今醫學研究水平中，對于前置胎盤發生的原因和發病機制尚未十分清楚，因此，就前置胎盤進行深入研究具有重要的臨床意義。在妊娠期，氧分壓對于滋養細胞浸潤、子宮動脈重鑄以及新生血管發育等具有重要作用，HIF-1α作為HIF-1的重要亞基之一，是人體重要的氧感受和信號轉導因子，其能夠通過改變把基因表達水平來調節氧張力，從而影響滋養細胞分化、胎盤血管發育等過程。正常情況下，在孕早期，由于胚胎滋養細胞種植等原因宮腔內多表現為缺血缺氧狀態，HIF-1α處于較高水平以提高，胚胎在店環境中的耐受能力，為滋養細胞正常發育提供有利環境，而隨著滋養細胞發育成熟，宮腔內氧濃度不斷提高，HIF-1α隨著不斷降低。但是HIF-1α過度表達，則能夠引發內皮素活性增強、胎盤血管重鑄障礙，從而參與前置胎盤、子癇等妊娠期疾病形成過程[5-7]。本實驗結果顯示前置胎盤孕婦的胎盤組織中HIF-1α陽性表達水平顯著高于正常孕婦的胎盤組織，表明HIF-1α異常升高與前置胎盤具有重要關聯，其可能參與了前置胎盤形成過程。總而言之，HIF-1α在前置胎盤組織呈異常高表達，可以將其作為前置胎盤診斷的參考指標。

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