試以“中藥復方循證生物系統研究策略”闡述當歸補血湯心臟保護的研究設想

閆奎坡，朱翠玲，孫彥琴，朱明軍，高 原，李 彬

·臨床醫學論著·

試以“中藥復方循證生物系統研究策略”闡述當歸補血湯心臟保護的研究設想

閆奎坡，朱翠玲，孫彥琴，朱明軍，高 原，李 彬

“中藥復方循證生物系統研究策略(Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy，CHCF-EB-BRS)”是從中醫古醫籍、系統評價、質量控制、臨床辨證治療療效評價、物質基礎及其作用機制等多層次對中藥復方進行研究，充分闡明中藥復方的整體療效學、療效學機制及物質成分的一種研究方法。本研究提出假說，擬在CHCF-EB-BRS策略指導下闡明當歸補血湯對心肌缺血的多方面療效學研究、機制研究、物質基礎的思路、設想及預期結果，從而指導實驗的進一步開展，以期為中藥復方研究提供一種思路。

中藥復方；循證醫學；生物系統研究策略；當歸補血湯；心臟保護

Absract：Chinese herbal compound formula (CHCF) are widely used in clinic，with the development of evidence-based medicine，it has put forward a new challenge on Chinese herbal compound formula (CHCF).It has become a strategic planning to further research and develop CHCF，provide sufficient curative evidence，promote the modernization of traditional Chinese medicine，promote Chinese medicine culture，extend CHCF to the world.In this paper，the author put forward Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy (CHCF-EB-BRS)，which conducts multi-level study of CHCF from ancient medical books，system evaluation and analysis，quality control，clinical dialectical treatment curative effect evaluation，material basis and mechanism and so on.In order to reveal the material basis for the efficacy of CHCF and the related mechanism，finally to solve the bottleneck of the study of CHCF and provide a reference.CHCF clinical efficacy is verified multiply from ancient medical books，system evaluation and analysis，clinical study，furthermore，use a good quality control of CHCF for laboratory and clinical research.Various research levels of the strategy has been widely implemented in the basic and clinical research，but still lack of a systematic study of some CHCF.The proposed method is helpful to the further research on the development of traditional Chinese medicine.

“中藥復方循證生物系統研究策略”(Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy，CHCF-EB-BRS)”是閆奎坡、朱翠玲、朱明軍等提出的一種用于全面解釋中藥復方臨床療效的一種研究方法，具體研究方法見圖1[1]。中藥復方(Chinese herbal compound formula，CHCF)，作為中醫臨床治療疾病的主要工具與手段，是中醫用藥的基本形式，其臨床療效經過幾千年的實踐已毋庸置疑[2-3]。循證醫學(evidence-based medicine，EBM)的快速興起及醫療模式的轉換，使CHCF的廣泛推廣遇到瓶頸[1，3]，同時，中醫藥學屬于復雜性科學(complexity science)[1]，中藥復方的療效究竟是由什么成分引起的？一直是中醫藥學術界長期存在的問題[2]，藥效物質基礎是中藥復方研究的核心之一[2]。如何進一步開展CHCF的研究和開發，提供充足的療效證據，促進中醫藥現代化，推廣CHCF至全球，為全世界人民服務已成為當務之急。

CHCF-EB-BRS研究策略在此背景下產生的，本研究擬采用該研究策略闡明當歸補血湯(Dangui-Buxue Tang，DBT)心臟保護的療效機制及物質基礎。

圖1 CHCF-EB-BRS指導下CHCF質量控制及在體研究策略流程圖

1 當歸補血湯及其對冠心病的治療簡介

當歸補血湯出自《內外傷辨惑論》，由李東垣(金元時代)創制，黃芪和當歸兩味藥以5∶1組成的，具有益氣生血活血功效[4-5]。冠心病屬于中醫“血瘀證”范疇，氣虛血瘀是其根本的病理改變，因之而產生的益氣活血法是治療冠心病的指導原則。當歸補血湯能增強心肌收縮力，降低心肌耗氧量，以防止或減輕心肌損傷[6]。通過抑制血小板的聚集，可預防血栓的形成；通過降低血液黏度，加快血流，可改善血液對全身組織器官的供應；當歸補血湯具有降脂、抗氧化應激，抗動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的作用[7]。

2 益氣活血法(當歸補血湯)的系統評價

冠心病屬于中醫胸痹之范疇，臨床治療多以行氣活血、豁痰泄濁、益氣養陰、溫陽通痹為法。近年來根據氣血相關理論，認為氣虛血瘀是冠心病的主要病機，益氣活血法是中醫治療冠心病的基本治則。以益氣活血法為主治療冠心病已取得一定進展。當歸補血湯屬于益氣活血的經典方劑，文獻研究發現益氣活血法大部分方藥均包含當歸、黃芪兩味中藥，即使用了當歸補血湯。目前的研究表明益氣活血法可以治療冠心病心絞痛、心肌梗死、冠心病心功能不全、嚴重的缺血型心肌病、冠脈支架術后再狹窄等，均發揮了重要的臨床作用。

3 當歸補血湯化學成分組成及質量控制

基礎研究表明[6，8-10]，當歸補血湯主要由當歸補血湯多糖組分、當歸補血湯非多糖組分、黃芪多糖、黃芪甲苷、黃芪異黃酮、黃芪異黃烷、黃芪皂苷、當歸多糖、阿魏酸組成。同時還有更詳細的研究當歸補血湯所含化學成分。黃酮苷類包括毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、芒柄花素、刺芒柄花素苷、9，10-二甲氧基紫檀烷3-O-B-葡萄糖苷、5，7-二羥基-4，-甲氧基異黃酮；氨基酸類包括苯丙氨酸和色氨酸；有機酸包括綠原酸、異綠原酸、香草酸、阿魏酸和壬二酸。但是這些研究并沒有明確其活性成分。現研究認為[6，8-10]黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、阿魏酸、藁本內酯是當歸補血湯的主要活性成分，是目前當歸補血湯的主要質量控制指標。

中藥湯劑延續千年，本研究采用湯劑作為質量控制(quality control，QC)標準。首先是藥物的選擇，經藥品專家鑒定，藥物按照經典方劑的比例進行搭配，藥物煎煮之前的處理、浸泡、煎煮時間等，當歸補血湯可依據文獻進行[2]，最終得到湯劑或者制備凍干粉等。之后對藥物進一步處理，并對其質控成分進行定性和定量的檢測。中醫藥質量控制在保證中藥的質量，達到預期的療效，確保藥效及安全方面發揮了關鍵的作用。

4 BAP指導當歸補血湯在體、離體研究

當歸補血湯的心臟保護作用研究按照圖1的流程圖(包括了當歸補血湯的QC部分)進行。CHCF-EB-BRS應用的3個主要要點是：方劑成分在血中的測量、吸收成分與母方療效的比較、吸收成分劑量等于母方中的量[2]。方劑ABC在血中的定量：一般在研究方劑整體藥效的同時，利用UPLC、LC-MS-MS等儀器同步測定口服方劑后血中吸收的化學成分，明確方劑吸收入體內成分是BAP研究的前提與指導思想；吸收成分劑量等于母方中的量，該要點是CHCF-EB-BRS指導DBT在體研究的關鍵，由圖1可以看出，DBT質量控制的5種成分對急性缺血大鼠的劑量等于DBT母方的含量，只有這樣才能充分體現劑量和母方含量的關系；吸收成分的療效最終和母方療效進行比較，因為只有通過比較才能發現吸收成分療效是否可以代表母方的療效。DBT及其ABC心臟保護作用的在體研究，選擇經典的冠脈結扎導致急性缺血的心肌梗死模型，同時選用公認的整體和組織水平療效評估(如大鼠狀態、TTC標記心肌梗死面積等)、分子層面的療效評估(如炎癥因子、凋亡指標、mRNA等)，做到多層面炎癥ABC和母方的療效。

CHCF-EB-BRS、指導DBT離體研究策略，筆者僅以DBT及其活性成分對大鼠原代細胞的干預予以說明。由于傳統中藥復方湯劑中重金屬、其他藥物污染、電解質等造成的粗制劑，直接進行細胞干預，即使殺毒、滅菌后可能導致假陽性或假陰性結果[2]。按照BAP策略，能夠揚長避短，藥效學物質明確后，基本代表母方的療效；離體實驗分析的藥物成分得到精簡；藥效學物質是吸收入體內的成分(藥效成分的直接證據)；不存在內源與外源性干擾。同時還可以參考血藥濃度范圍進行研究，亦可采用ABC療效和血清藥效學比較的模式研究。

5 結 語

CHCF作為中醫臨床治療疾病的主要工具與手段，是中醫用藥的基本形式，其臨床療效經過幾千年的實踐已毋庸置疑。但是，在現代醫學科研水平如此高度發達的今天，仍以“君臣佐使、四氣五味、升降沉浮”等抽象的傳統中醫理論，不從方劑產生療效的物質基礎、作用機制來解釋方劑及其配伍規律，就很難被現代醫學所接受[2]。CHCF的“藥效物質基礎不明確”正是中醫藥現代化及中醫藥走向世界亟待解決的關鍵問題和制約瓶頸[2]。因為CHCF的藥效物質不清楚，難以制訂科學的質控標準，難以獲得可重復療效，存在用藥安全隱患。雖個別CHCF初步闡明藥效物質，但研究還不夠深入，十萬個方劑的藥效物質還是待研究的廣闊領域。如何揭開CHCF藥效學物質的神秘面紗，讓中醫藥為全世界服務，成為所有中醫藥人的一個愿望。為此，筆者作為工作在中醫院一線的臨床醫師在全力研究CHCF的過程中，結合自己的臨床及研究歷程，同時參考了國內外大量的研究報告，深入學習了流行病學、循證醫學、分子生物學、實驗動物系、中藥藥理學等多門課程，提出CHCF-EB-BRS策略，該策略從CHCF的古醫籍挖掘、現代醫學的循證評價到直接的臨床研究，確立某個復方的臨床療效，繼之開展多項基礎研究，從動物研究到離體組織及細胞層面的研究，從而驗證該方的臨床療效及療效基礎物質。

CHCF-EB-BRS研究CHCF的策略正是在多年來復方研究的基礎上，吸取了中藥基本理論、藥理學、藥物制劑學、化學、分子生物學等研究成果，逐步發展起來的，已經初步解決了部分中藥復方的藥效學物質基礎，對其結構、含量進行了初步闡明，目前該策略正指導若干研究進行中。

致謝：感謝我院2012級研究生李露露、豐俊鵬、左亞東、軒靜靜在文獻檢索方面的協助。

[1] 閆奎坡，朱翠玲，朱明軍，等.“中藥復方循證生物系統研究策略”思路探索[J].中國實驗方劑學雜志，2016(9)：218-222.

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(本文編輯王雅潔)

Assumption on the Cardioprotection of Danggui Buxue Decoction Based on Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy

Yan Kuipo，Zhu Cuiling，Sun Yanqin，Zhu Mingjun，Gao Yuan，Li Bin

The First Affiliated Hosipital，Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，Henan，China

Chinese herbal compound formula；evidence-based medicine；biosystem research strategy；Danggui Buxue decoction；cardioprotection

國家自然科學基金青年基金(No.81303073，81503419，81503435)；河南中醫學院省屬科研業務專項(No.2014KYYWF-YQ12)；河南中醫學院一附院院內博士項目(No.2012KJ32)；河南省科技攻關重點項目(No.112102310317)；河南省高校科技創新團隊支持計劃(No.13IRTSTHN012)；河南省中醫藥防治心血管疾病創新型科技團隊(No.C20130050)；河南省科技攻關計劃重點項目(No.142102310289)

河南中醫學院第一附屬醫院(鄭州 450008)

朱翠玲，E-mail：zhudaifu666@hotmail.com

R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.03.002

1672-1349(2017)03-0264-04

2016-08-20)

引用信息：閆奎坡，朱翠玲，孫彥琴，等.試以“中藥復方循證生物系統研究策略”闡述當歸補血湯心臟保護的研究設想[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2017，15(3)：264-267.