連翹中連翹苷的提取方法研究

閆久江

摘 要：本實驗采用正交實驗設計法，以高效液相色譜法測定從連翹藥材中提出連翹苷的量為考察指標，考察提取次數、加水倍數、提取時間3個因素。含量測定方法：色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相以乙腈-水（22：88）；檢測波長為277nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。連翹苷對照品在50～350μg/ml范圍內線性關系良好。連翹苷平均回收率分別為99.6%。連翹苷最佳提取工藝為加入8倍量水，煎煮提取90分鐘，連續提取2次。本工藝穩定、可行、收率高；測定方法簡便、準確。

關鍵詞：連翹；提取；工藝

連翹為木犀科植物連翹Forsythia suspensa （Thunb.）Vahl的干燥果實。連翹分布遼寧、河北、河南、山東、江蘇、湖北、江西、云南、山西、陜西、甘肅等地。連翹具有清熱解毒，消腫散結等功效。《日華子本草》記載："通小腸，排膿。治瘡癤，止痛，通月經。"連翹常用于癰疽、乳癰、風熱感冒、神昏發斑、溫病初起、溫熱入營、熱淋尿閉等。連翹具有改善學習記憶障礙、舒張血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解熱、抗DNA損傷、防護耳毒性等藥理作用。連翹苷為連翹主要成分之一。連翹苷作為藥用的為木犀科植物連翹Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl的干燥果實的提取物，具有清熱、解毒、散結排膿等功效。本實驗以連翹苷為指標對連翹提取工藝進行研究。

1 儀器與試藥

實驗室用高純水制備器（北京科譽興業科技發展有限公司）；TMSH-6050B超級恒溫水槽（上海添時科學儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德創業科技有限公司）；EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設備有限公司）；TY-727型可見分光光度計（臺州斯帕克儀器儀表有限公司）；PHS-550智能型臺式酸度計（杭州陸恒生物科技有限公司）；WP-UP-Ⅲ-20精密型實驗室專用超純水機（四川沃特爾水處理設備有限公司）。連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）；甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）；乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 方法與結果

2.1 單因素考察

2.2.1 提取次數

取連翹除去雜質，篩去脫落的心及灰屑，至于圓底燒瓶內，分別提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分鐘，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第二次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續提取兩次，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續提取三次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。第四次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續提取四次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中連翹苷含量并計算連翹苷收率。

2.1.2 加水倍數

取連翹除去雜質，篩去脫落的心及灰屑，至于圓底燒瓶內，分別提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分鐘，連續四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分鐘，連續四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分鐘，連續四次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中連翹苷含量并計算連翹苷收率。

2.1.3 提取時間

取連翹除去雜質，篩去脫落的心及灰屑，至于圓底燒瓶內，分別提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續四次，第二次加10倍水，煎煮提取90分鐘，連續四次，第三次加10倍水，煎煮提取120分鐘，連續四次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中連翹苷含量并計算連翹苷收率。

2.2 正交試驗設計

實驗結果表明，提取次數、加水倍數和提取時間對連翹苷收率影響較大。選擇提取次數、加水倍數和提取時間作為考察因素，采用正交試驗法對影響提取效率的其它工藝條件進行優選。采用3個考察水平，用L9（34）正交表進行試驗，因素水平表見表1。

3 含量測定

3.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相以乙腈-水（22：88）；檢測波長為277nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。理論板數按連翹苷峰計算應不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密量取，加中性氧化鋁0.5g，拌勻，加置中性氧化鋁柱（100～120目，2g，內徑1cm）上，用70%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用50%甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

3.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取連翹苷對照品5mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 標準曲線的制備

將濃度為50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml的對照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值A為縱坐標，繪制標準曲線。試驗表明，連翹苷對照品在50～350μg/ml范圍內線性關系良好。

3.5 重現性試驗

稱取同一批的膏子6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.73%，結果表明此方法的重現性良好。

3.6 回收率試驗

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的連翹苷對照品，測定含量，計算回收率。平均回收率為99.6%，RSD為0.82%。

4 實驗結果

按照L9（34）正交設計表條件進行試驗，得到最佳提取工藝為加入8倍量水，煎煮提取90分鐘，連續提取2次。本工藝穩定、可行、收率高。

參考文獻

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