CK19、P53在甲狀腺癌中的表達及其臨床意義

張偉華+閆斌+劉可心

【關鍵詞】 甲狀腺癌；甲狀腺癌旁；CK19；P53；病理組織；臨床意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.01.033

甲狀腺癌是內分泌系統最常見的腫瘤， 占頭頸部惡性腫瘤的5.11% ， 占所有惡性腫瘤的 3.00% ， 占癌癥死亡的0.20% [1]。近些年， 甲狀腺癌（thyroid cancer， TC）在全球范圍內的發病率逐年升高， 馮紅芳等[2]報道從2008～2013年， 甲狀腺癌發病率顯著增加， 尤以甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid cancer， PTC）增加了4.09%， 女性患者是男性的3.75倍。乳頭狀腺癌是甲狀腺癌最為常見的一種類型 ， 占甲狀腺癌的60%～70%， 與其他類型相比乳頭狀癌的惡性程度較低， 發展相對緩慢， 從發現腫塊到手術確診， 5年以上存活率大約達到30%左右， 生存率最長可達20年左右。腫瘤常單發， 原發灶大多較小 [3-5]。頸部淋巴結轉移灶率較高、出現早、范圍廣， 但是發展較為緩慢[6]。甲狀腺癌組織學上有四種主要類型：乳頭狀癌、濾泡癌、髓樣癌、未分化癌。本次實驗中同樣乳頭狀癌（95.1%）最多見， 與其他地區的報道相近[7]；髓樣癌、未分化癌低于其他地區的報道。由于頸部超聲配合超聲下甲狀腺穿刺細胞學檢查提高了甲狀腺癌的檢出率， 特別是微小癌的檢出率[8]。甲狀腺癌的組織學分型除與預后關系相當密切外， 與腫瘤的其他生物學行為的關系也較其他器官明顯得多。因此， 遇到一個甲狀腺腫瘤， 做好良惡性的判斷、組織學分類、預后的判斷顯得尤為重要。

1 材料與方法

1. 1 標本來源 病理標本來自2014年1月～2015年12月吉林省四平市中心醫院普外科行手術且病理證實的102例甲狀腺癌患者， 包括甲狀腺乳頭狀癌病理組織標本97例、甲狀腺髓樣癌3例， 甲狀腺混合性癌（濾泡癌、乳頭狀癌）1例， 甲狀腺鱗狀細胞癌1例， 術前患者均未行放化療。甲狀腺癌病理組織標本中男 18例， 女84例， 男女比例1：4.7， 年齡 23～68歲， 36～55歲為發病高峰。病理組織標本取材包括腫瘤原發灶及周邊組織， 同時避開鈣化區及壞死區。

1. 2 試劑 細胞角質白19（CK19）兔抗人抗體購自于福州邁新生物科技公司、兔抗人P53購自于北京中杉金橋生物科技有限公司、SP法免疫組織化學試劑盒購自于北京中杉金橋物科技有限責任公司、枸櫞酸鈉抗原修復液及聯苯二胺（DAB）顯色劑購自于中國福州邁新生物科技公司。

1. 3 免疫組織化學技術CK19、P53在甲狀腺癌中的陽性表達 具體步驟按照試劑盒的操作說明進行， 組織切片置于顯微鏡下進行觀察， 抗原陽性表達為細胞胞漿中出現棕黃色或棕褐色的顆粒；評價依據陽性表達細胞的染色強度和百分比分別計分， 然后相加得到總積分。

1. 4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。 P<0.05表示差異具有統計學意義。采用靈敏度、特異度和診斷符合率來評價CK19、P53診斷甲狀腺癌及淋巴結轉移中的價值。

2 結果

2. 1 CK19、P53 陽性表達為細胞質、細胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒。CK19在 102例甲狀腺癌組織中陽性表達的例數102例， 陽性率為 100.0%；在癌旁正常甲狀腺組織中陽性表達的例數為36例， 陽性率為35.3%， 比較差異具有統計學意義（P<0.01）。P53在102例甲狀腺癌組織中陽性表達的例數為 73例， 陽性率為 71.6% ；在癌旁正常甲狀腺組織中的陽性表達例數為28例， 陽性率為27.5%， 比較差異具有統計學意義（P<0.01）。在甲狀腺良惡性疾病中CK19鑒別診斷的靈敏度為100.0%、特異度為64.7%、診斷符合率為82.4%；P53陽性表達的靈敏度為 71.6%、特異度為72.5%、診斷符合率為 72.1%。見表1。

2. 2 102例甲狀腺癌組織中有26例淋巴結轉移， 其中有18例

P53陽性表達， 陽性表達率69.2%；無淋巴結轉移P53陽性例數為27例， 陽性率為35.5%， 甲狀腺癌淋巴結轉移的組織中P53陽性明顯高于未轉移的甲狀腺癌陽性表達， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

隨著甲狀腺癌的發病率增高， 病理醫生的診斷水平也在逐步提升， 但是對于濾泡上皮排列較為特殊以及極為微小癌的診斷， 臨床診斷還較為困難。CK19是由上皮細胞所分泌的一種糖蛋白 ， 主要標記各種單層上皮包括腺上皮， 主要用于腺癌的診斷。對于甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌、濾泡性腺瘤以及良性增生性濾泡的鑒別中具有重要價值[9， 10]。CK免疫組化染色時常常在切片上出現斑點狀假陽性反應， 李鵬飛等[11]研究發現 ， 在甲狀腺乳頭狀癌中存在 CK19 彌漫性陽性表達 ， 主要定位于細胞質 ， 陽性率達到95%， 在甲狀腺良性病變或正常甲狀腺組織中陽性表達占8.5%。因此， CK19在甲狀腺癌中表達呈強陽性， 但在甲狀腺良性或者正常組織中多呈現彌漫性或者灶性 ， 且陽性較弱。本實驗中 ， CK19 在甲狀腺癌中的陽性表達率為 100.0%， 并且多呈強陽性， 而在癌旁正常甲狀腺中的陽性表達率為35.3%， 對于良惡性病變的診斷敏感度和特異度分別為100.0% 和 64.7%， 特異度并不非常理想 ， 與佟杰等[12]報道接近。但CK19 的強陽性表達對于提高臨床診斷準確率有一定的參考價值。

P53蛋白是P53基因編碼分子量為53KD的核磷酸蛋白， 野生型P53基因功能與細胞分化、DNA合成修復以及細胞程序性死亡有關， 是一種抑癌基因。P53基因異常， 表現為野生型P53的缺乏， 突變型P53擴增， 是人體惡性腫瘤中常見的基因改變[13]。P53作為細胞周期G1-S期檢查點控制因子參與細胞周期調控， P53基因的異常與腫瘤的惡性行為及不良預后有關[14-20]。李田軍等[17]對甲狀腺腫瘤研究發現P53的突變是甲狀腺腫瘤發生中的晚期事件， 其存在常提示預后不良。本實驗中， P53在甲狀腺癌中的陽性表達率是71.6%， 淋巴結轉移率是69.2%， 提示 P53 基因突變可能參與了甲狀腺癌的發生、發展， 并與甲狀腺癌的進展、侵襲和轉移有關。

綜上所述， CK19、P53 在甲狀腺癌及癌旁正常甲狀腺組織中的陽性表達明顯增強， 是甲狀腺良惡性腫瘤診斷、鑒別診斷的重要輔助指標， 對預后的評估有一定的參考。

參考文獻

[1] Siraj AK， Hussain AR， Alrasheed M， et al. Demethylation of TMS1 Gene Sensitizes Thyroid Cancer Cells to TRAIL-Induced Apoptosis. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism， 2011， 96（96）：E215-224.

[2] 馮紅芳， 陳劍， 孫圣榮， 等.1585例甲狀腺癌的臨床病理特點及總結分析.中國腫瘤臨床， 2015， 42（2）：72-81.

[3] 陳英， 許躍， 薛娣， 等 . 甲狀腺乳頭狀癌中 CK19、CD56 和 VEGF-C 的表達及意義. 臨床與實驗病理學雜志， 2012， 28（9）： 1032-1034.

[4] 林茂華， 毛瑛玉， 李婷， 等 . CK19、CyclinD1、HBME-1、 34βE12、TPO、galectin-3 在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及意義. 實用癌癥雜志， 2013， 28（6）：617-619.

[5] 劉慶猛， 何平生. CK8、CK19 和 TPO 聯合檢測在甲狀腺乳頭狀癌及乳頭狀增生病變中的診斷應用. 實用腫瘤雜志， 2011， 26（2）：153-156.

[6] 章陽， 崔兆清， 孫善平， 等. 分化型甲狀腺癌行頸部淋巴結清掃的意義及方式探討. 中國實用外科雜志， 2011， 31（5）：414-416.

[7] 李拓， 李維卿， 盛建國， 等.甲狀腺癌860例臨床特點及手術預后影響因素研究.中國實用內科雜志， 2014， 34（4）：383-386.

[8] Dedhia PH， Rubio GA， Cohen MS， et al. Potential Effects of Molecular Testing of Indeterminate Thyroid Nodule Fine Needle Aspiration Biopsy on Thyroidectomy Volume. World Journal of Surgery， 2014， 38（3）：634-638.

[9] 南潤玲， 尚培中， 谷化平， 等. 半乳糖凝集素3、細胞角蛋白19及甲狀腺過氧化物酶在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義. 中華臨床醫師雜志：電子版， 2013（6）：2381-2384.

[10] 王士娜， 王星， 王翠芳. 甲狀腺微小乳頭狀癌的臨床病理特征及診斷標志物的應用. 中國醫科大學學報， 2014， 43（11）：1051-1053.

[11] 李鵬飛， 肖維華， 馬海芬. 甲狀腺乳頭狀癌CK19、 Mesothelin、 CD56表達及臨床意義. 中國現代醫生， 2012， 50（7）：87-89.

[12] 佟杰， 王巖， 笪冀平， 等. CK19HBME-1Galectin-3等表達在甲狀腺乳頭狀微小癌與良性病變鑒別診斷中的意義. 中華腫瘤雜志， 2011， 33（8）：599-604.

[13] Wade M， Li YC， Wahl GM. MDM2， MDMX and p53 in oncogenesis and cancer therapy. Nature Reviews Cancer， 2013， 13（2）：83-96.

[14] Soussi T. The TP53 gene network in a postgenomic era. Human Mutation， 2014， 35（6）：641-642.

[15] Hock AK， Vousden KH. The role of ubiquitin modification in the regulation of p53.Biochimica Et Biophysica Acta， 2013， 1843（1）：137-149.

[16] Selivanova G.Wild type p53 reactivation： from lab bench to clinic. FEBS Lett， 2014， 588（16）：2628-2638.

[17] 李田軍， 林巖松， 梁軍， 等. 分化型甲狀腺癌相關基因的研究進展. 中華腫瘤防治雜志， 2011， 18（11）：896-900.

[18] 鄧敏， 葉顧萍， 馬建中， 等. 甲狀腺乳頭狀癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表達及意義. 臨床與實驗病理學雜志， 2011， 27（8）：843-846.

[19] 趙麗華， 林競， 石柏， 等. P53， ki-67， galectin-3， HBME-1， 34βE12和CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床病理意義. 基礎醫學與臨床， 2012， 32（10）：1202-1206.

[20] 徐美榮， 許建成， 陳云， 等. RASSF1A、CK19和p53在甲狀腺良惡性病變中的表達及臨床意義. 實用癌癥雜志， 2010， 25（6）： 583-586.