卵巢癌組織與腫瘤相關巨噬細胞之間的關系及預后的影響

汪洪　鄧凱賢　鄭玉華　王玉玲　蔡巧生

[摘要]目的探討腫瘤相關巨噬細胞（TAM）與卵巢癌組織之間的關系以及對預后的影響。方法收集2010年11月～2016年7月我院手術切除、病例確診并有完整臨床資料的卵巢癌組織標本250例。采用免疫組化染色法檢測TAM標志物CD68的表達量，根據檢測結果分為低表達組和高表達組。分析TAM與卵巢癌發(fā)生、進展的關系。結果CD68表達量與卵巢癌FIGO分期和淋巴結轉移具有相關性（P<0.05），與年齡、腫瘤大小、分化程度、組織學類型、遠處轉移和浸潤深度無關（P>0.05）；spearman相關分析顯示，淋巴結轉移與CD68表達量呈正相關（r=0.742，P<0.05）；高表達組PFS、0s均顯著低于低表達組（P<0.05）。結論TAM水平在卵巢癌淋巴結轉移及患者預后中發(fā)揮重要作用。

[關鍵詞]腫瘤相關巨噬細胞；卵巢癌；預后

[中圖分類號]R737.31

[文獻標識碼]B

[文章編號]2095-0616（2016）23-220-03

卵巢癌是婦科最常見的三大惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和死亡率。由于其發(fā)病隱匿，潛伏期無特異的臨床癥狀且目前缺乏針對早期卵巢癌可靠的篩查手段等諸多因素，導致多數患者確診時已是中晚期，嚴重危害婦女的健康和生命。分子生物學、免疫學、病毒學和基因工程等基礎學科的飛速發(fā)展，為卵巢癌的生物治療創(chuàng)造了條件。研究發(fā)現，腫瘤微環(huán)境中，有多種免疫細胞募集、參與腫瘤免疫，其中數量最為豐富的是腫瘤相關巨噬細胞（tumor-associated macroDhages，TAM）[5-7]。鑒于此，本研究探討了TAM與卵巢癌組織之間的關系以及對預后的影響，旨在為卵巢癌的早期診斷、預后評估及臨床控制腫瘤提供新的方向，現報道如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

收集2010年11月～2016年7月我院手術切除、病例確診并有完整臨床資料的卵巢癌組織標本250例，年齡45～71歲，平均（60.8±5.6）歲；FIG0分期I～Ⅱ期89例，Ⅲ～Ⅳ期161例。所有患者均為初診患者，術前為進行任何放、化療及分子靶向治療等，無其他免疫系統(tǒng)疾病。所有病例均有隨訪，隨訪時間從術后開始，隨訪期限到2016年.10月，最長隨訪時間5年，平均（2 41±1.38）年；隨訪方式為電話隨訪結合返院門診復查。計算無進展生存時間（progression free survival，PFS）及總生存時間（overall survival，OS）。隨訪期間患者死亡指因腫瘤復發(fā)或轉移引起的死亡，其他疾病、意外死亡不計入內。

1.2方法

1.2.1卵巢癌組織切片的制作

包埋好的組織蠟塊用自動切片機按常規(guī)切成4um薄片，平放于40℃溫水中，待其充分展開后，用多聚賴氨酸處理的載玻片撈取，并使其充分貼附平鋪，然后置人60℃烤箱，烘烤2h，使組織薄片上的石蠟融化，水分蒸發(fā)。

1.2.2免疫組化染色采用免疫組織化學方法（SP法）檢測TAM特異性單克隆抗體CD68在卵巢癌組織中的表達量，具體方法為：組織切片二甲苯脫蠟，梯度酒精水化；3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶；微波抗原修復；羊血清室溫封閉2h后，加一抗4℃冰箱過夜；PBS洗滌后，加二抗37℃孵育20min；DAB顯色，蘇木精復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明后封片。以PBS代替一抗作為陰性對照。結果判讀：CD68陽性細胞漿為黃褐色或棕褐色顆粒，表達于巨噬細胞質內；先在低倍（100倍）光學顯微鏡下觀察整張切片，選取5個具有代表性的表達區(qū)域，在高倍鏡（400倍）下進行陽性細胞計數，計數后取平均值。

1.3統(tǒng)計學處理

采用SPSS21.0軟件對數據進行統(tǒng)計分析，其中計量資料以（x±s）的形式表示，計數資料以率（%）的形式表示，分別進行t檢驗和x²檢驗；CD68表達量與卵巢癌病理參數之間的相關性采用spearman相關分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1TAM密度與卵巢癌臨床病理參數的關系

250例卵巢癌病理切片中，CD68計數3～117/HP，中位數51.46/HP。以中位數為界，將病例分為低表達區(qū)和高表達區(qū)，低表達組113例，CD68平均數為（32.24±4.18）/HP；高表達組137例，CD68平均數為（76.16±6.03）/HP。兩組臨床病理參數如表1所示。CD68表達量與卵巢癌FIGO分期和淋巴結轉移具有相關性（P<0.05），與年齡、腫瘤大小、分化程度、組織學類型、遠處轉移和浸潤深度無關（P>0.05），見表1。Spearman相關分析顯示，淋巴結轉移與CD68表達量呈正相關（r=0.742，P<0.05）。

2.2CD68表達量與卵巢癌患者預后的相關性

高表達組PFS.08均顯著低于低表達組（P<0.05），見表2。

3.討論

卵巢癌是婦科常見生殖器腫瘤之一，也是人類惡性程度最高的腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于宮頸癌和宮體癌位居第三位，但死亡率卻高居首位。卵巢癌起病隱匿，進展快。臨床研究顯示，診斷為卵巢癌的患者中，75%是手術無法救治的晚期，患者5年生存率只有30%左右。卵巢癌細胞在腹腔內的廣泛侵襲、轉移是導致患者預后差的重要原因，其中淋巴轉移是卵巢癌的重要轉移方式之一。巨噬細胞是人體內重要的炎癥和免疫細胞，主要來源于髓源抑制細胞，已有報道證實，TAM的浸潤在不同腫瘤微環(huán)境中的分布、密度與惡性腫瘤侵襲、轉移及患者的預后有關。研究發(fā)現TAM在局部微環(huán)境作用下可產生和釋放生長因子、細胞因子和趨化因子參與腫瘤微血管、微淋巴管生成、基質建設，發(fā)揮免疫抑制、逃逸等作用，從而促進腫瘤發(fā)展、轉移。本研究結果顯示，TAM特異性分子標志物CD68表達量與卵巢癌FIGO分期和淋巴結轉移具有相關性（P<0.05），spearman相關分析顯示，淋巴結轉移與CD68表達量呈正相關（P<0.05），同時發(fā)現，高表達組PFS、OS均顯著低于低表達組（P<0.05）。此結果與在多種實體瘤中的研究結果一致，其機制可能有：（1）TAM通過與腫瘤細胞復雜的相互作用后被激活，參與血管活性因子的作用過程，在腫瘤周邊區(qū)域生成新生血管，加速腫瘤進展和轉移；（2）腫瘤細胞向外浸潤時，會出現以TAM為主的炎癥細胞募集，而TAM可通過產生蛋白酶降解基底膜，為腫瘤細胞進入間質創(chuàng)造了條件；（3）TAM及其他的一些免疫細胞產生的一些細胞因子以及活性氧和氮類物質形成的亞硝酸鹽，可通過影響上皮及周圍細胞的DNA導致其基因突變以及染色體異常，引起癌癥的發(fā)生。

綜上所述，TAM水平在卵巢癌淋巴結轉移及患者預后中發(fā)揮重要作用。因此，對卵巢癌患者術后病灶組織標本進行TAM計數分析，可更好地評估預后，指導臨床治療。