胃癌患者血清、癌組織中炎性因子及凋亡相關(guān)因子的表達(dá)

董 鵬 劉繼平

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

胃癌患者血清、癌組織中炎性因子及凋亡相關(guān)因子的表達(dá)

董 鵬 劉繼平1

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

目的 探討胃癌患者血清及癌組織中炎性因子、凋亡相關(guān)因子的表達(dá)水平，為術(shù)后靶向治療提供科學(xué)依據(jù)。方法 選取該院住院手術(shù)的胃癌確診患者68例作為受試者，術(shù)前和術(shù)后第7天受試者均空腹抽取靜脈血，受試者于術(shù)后留取癌組織及癌旁正常組織(距癌組織大于5 cm)。采用實時熒光定量法檢測血清、癌旁正常組織及癌組織中炎性因子和凋亡相關(guān)因子的mRNA表達(dá)水平；采用免疫組織化學(xué)染色法檢測癌組織及癌旁正常組織中炎性因子和凋亡相關(guān)因子的蛋白陽性表達(dá)強度。結(jié)果 與術(shù)前比較，術(shù)后胃癌患者血清中IL-2、wtP53 mRNA表達(dá)水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA表達(dá)水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與癌旁正常組織比較，癌組織中IL-2、wtP53蛋白和基因表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；TNF-α、Cyclin E蛋白和基因表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 胃癌患者術(shù)后IL-2、wtP53的上調(diào)及TNF-α、Cyclin E的下調(diào)提示IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E均參與胃癌的發(fā)生發(fā)展，有望成為胃癌治療的新靶點。

胃癌；炎性因子；凋亡因子

胃癌是全世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，中國是胃癌高發(fā)區(qū)，其發(fā)病率有逐年上升趨勢。目前對胃癌的病因、發(fā)病機制的研究報道很多〔1,2〕，其中對癌基因和抑癌基因的研究甚廣〔3〕，但對炎性因子、凋亡基因與胃癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的報道甚少。本研究通過分子水平檢測胃癌患者血清及癌組織中IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E mRNA水平及蛋白陽性表達(dá)強度，探討胃癌發(fā)病機制及胃癌治療的靶點。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院2014年10月至2016年2月確診胃癌的住院患者68例作為受試者，其中男36例，平均年齡(53.5±2.9)歲，女32例，平均年齡(52.6±4.1)歲。病理類型：高分化腺癌21例、中分化腺癌18例、低分化腺癌29例；無淋巴轉(zhuǎn)移者33例、有淋巴轉(zhuǎn)移者35例；臨床分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例，Ⅳ期15例；癌癥患者全部排除其他器官瘤變且術(shù)前均未接受放療或化療處理，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 實驗試劑和儀器設(shè)備 試劑：抗體IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E由美國Santa Cruz 公司提供；試劑盒SP9710和DAB由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供； 分子生物學(xué)試劑和試劑盒均由上海生物工程有限公司提供。萊卡 2245石蠟切片機(德國)；ABI7300實時熒光定量PCR儀(美國)；Biometra PCR擴增儀(美國)。

1.3 基因和蛋白檢測

1.3.1 各組IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的基因表達(dá)水平 IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的引物序列由上海生物工程有限公司提供，產(chǎn)物分別是287 bp、 254 bp、173 bp和136 bp，采用實時熒光定量PCR檢測，嚴(yán)格按照試劑盒操作。凝膠成像后用凝膠圖像分析系統(tǒng)分析結(jié)果，mRNA表達(dá)水平以CT值表示。

1.3.2 各組IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的蛋白表達(dá)水平 組織經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋，制備成3 μm的防脫切片，行免疫組織化學(xué)染色，抗體稀釋比例均為1∶100，4℃過夜后連接SP試劑盒，PBS緩沖液充分沖洗后用DAB顯色試劑盒顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗及χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 血清、癌旁正常組織和癌組織中IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E mRNA表達(dá)水平的比較 見表1、表2。與術(shù)前比較，術(shù)后胃癌患者血清中IL-2、wtP53 mRNA水平均明顯升高(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA水平均明顯降低(P<0.01)。與癌旁正常組織比較，癌組織中IL-2、wtP53 mRNA水平明顯降低(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA水平明顯升高(P<0.01)。

時間IL-2wtP53TNF-αCyclinE術(shù)前1.12±0.540.93±0.158.05±0.999.38±1.03術(shù)后3.51±0.821)2.64±0.471)3.25±0.611)3.55±0.861)

與術(shù)前比較：1)P<0.01

2.2 IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E在癌旁正常組織和癌組織中的蛋白表達(dá)比較 與癌旁正常組織比較，癌組織中IL-2、wtP53的蛋白陽性表達(dá)強度明顯降低(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E的蛋白陽性表達(dá)強度明顯升高(P<0.01)。采用圖像分析軟件Motic Images Advanced 3.2檢測灰度值，蛋白陽性表達(dá)強度與灰度值呈反比。見表3。

組別IL-2wtP53TNF-αCyclinE癌旁正常組織4.93±0.515.62±0.892.97±0.713.45±0.83癌組織0.85±0.131)1.38±0.431)10.52±1.411)12.08±1.581)

與癌旁正常組織比較：1)P<0.01，下表同

組別IL-2wtP53TNF-αCyclinE癌旁正常組織85.62±4.3894.35±5.07130.81±8.75134.88±9.26癌組織129.08±8.911)135.67±9.061)90.74±6.321)85.25±6.311)

3 討 論

胃癌是常見消化道腫瘤之一，目前其發(fā)病機制尚未完全明確。胃癌的發(fā)生發(fā)展可分為多個階段，同時各階段均有多種基因參與。近年來研究證實，凋亡因子、炎性因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展日益密切，比如IL-1、IL-2、Bcl-2、Bax等〔4，5〕，他們參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程〔6〕。已有研究證實，白細(xì)胞介素(IL)-2具有多種生物學(xué)活性，是迄今發(fā)現(xiàn)的功能最為廣泛的細(xì)胞因子之一，它能促進(jìn)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)T細(xì)胞的成熟活化參與機體免疫應(yīng)答；TNF-α由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是一種具有多效性的細(xì)胞因子，廣泛參與機體內(nèi)多種生物學(xué)效應(yīng)例如組織的損傷及腫瘤壞死，同時可誘導(dǎo)細(xì)胞的增生、分化與凋亡；wtP53基因作為腫瘤抑制基因可抑制腫瘤生長并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡及捕獲G1周期，通過阻滯細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而達(dá)到抗癌作用；Cyclin E是一種細(xì)胞周期蛋白，主要作用是促進(jìn)DNA復(fù)制的起始，其表達(dá)受細(xì)胞周期調(diào)節(jié)并在G1期末達(dá)到高峰，它能與細(xì)胞周期依賴激酶(CDK2) 特異性地結(jié)合形成復(fù)合物Cyclin E/CDK2，促使底物磷酸化釋放轉(zhuǎn)錄因子，使細(xì)胞通過起始點進(jìn)入S期，從而在人類腫瘤中高表達(dá)〔7～10〕。本研究結(jié)果說明胃癌患者術(shù)后能使IL-2、wtP53上調(diào)和TNF-α和Cyclin E下調(diào)，提示IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E參與胃癌的發(fā)生發(fā)展，這一研究結(jié)果有助于發(fā)現(xiàn)胃癌治療新靶點。

1 程宏厚,王天明.97例早期胃癌臨床病理分析〔J〕.中華綜合臨床醫(yī)學(xué)雜志,2004;10(6):46-7.

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4 李 軍,石 搏,黃可欣,等.葛根素對心肌缺血再灌注大鼠心肌組織Bcl-2、Bax和Caspase-3表達(dá)水平的影響〔J〕.中國實驗診斷學(xué)，2013;17(4):631-3.

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〔2016-10-11修回〕

(編輯 郭 菁)

內(nèi)蒙古自治區(qū)科學(xué)技術(shù)廳(2011ms1174)

1 內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院護(hù)理部

劉繼平(1973-)，女，副主任護(hù)師，主要從事護(hù)理管理及外科護(hù)理研究。

董 鵬(1978-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事肝膽免疫學(xué)研究。

R735.5

A

1005-9202(2017)07-1671-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.044