變異后的黑熱病實驗室診斷

李永平+田普軍

【關鍵詞】 黑熱病 ；變異；實驗室診斷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.14.101

黑熱病（Kala--azar）又稱內臟利什曼病， 是由杜氏利什曼原蟲引起發熱、進行性脾腫大、消瘦、進行性貧血、白細胞減少及血漿球蛋白升高、經白蛉傳播的慢性地方性傳染病[1， 2]。因患者常伴有暗的色素沉著， 因此稱為黑熱病， 臨床上以長期不規則發熱為特征。原蟲主要生活在患者的血液、肝、脾、骨髓和淋巴結中。黑熱病在流行病學上可大致分為三種不同的類型：①內臟型黑熱病， 由于黑熱原蟲病侵害內臟， 如肝、脾、骨髓等處而致病， 如不及時治療， 可致人死亡；②黏膜皮膚黑熱病， 由于黑熱病原蟲侵犯寄生于皮膚內而引起的疾病， 也可經淋巴管血液等侵犯黏膜、軟骨等；③皮膚型黑熱病又稱淋巴結型黑熱病， 是由杜氏利曼原蟲引起的皮膚潰瘍， 可出現結節性癢疹等損害。杜氏利什曼原蟲病屬人獸共患疾病。除在人與人之間傳播外， 也可在動物與人， 動物與動物之間傳播。該病以不規則發熱、脾腫大、貧血為主。黑熱病原蟲由無脊椎動物白蛉叮咬各種哺乳動物或人時， 鞭毛型蟲體進入機體并脫去鞭毛， 經血液侵入人體血管， 在患者體內寄生繁殖， 使患者巨噬細胞大量破壞和增生， 致脾腫大、貧血等臨床癥狀。黑熱病患者可出現人體免疫受損， 使其細胞免疫、體液免疫反應能力降低， 其與患者體內病原蟲的繁殖快、產生的抗原多有關。

1 臨床資料

本院自2012～2016年共檢查出黑熱病21例， 發病年齡2～60歲， 男性高于女性， 其中男13例， 女8例。此病好發于夏秋季， 患者均有不同程度的貧血， 血紅蛋白為30～110 g/L， 白細胞為（2.1～8.4）×109/L。其中有2例發熱時在末梢血涂片中找到典型的黑熱病原蟲， 其余19例均在骨髓涂片中經瑞氏染色后顯微鏡下找到數量不等被染成淺紫色或深紫色的圓形橢圓形棒狀小體， 兩端較小， 核呈深紫色位于小體的一端， 另一端幾乎不著色， 其結構十分清楚且界線分明， 其中胞漿被染成淺紫色， 呈細小的顆粒狀， 有一定的空隙， 均未見到動基體及鞭毛。見圖1。較典型的黑熱病原蟲[（2.9～5.7） μm×

（1.8～4.0） μm]小。21例患者均經1～6個療程的葡萄糖酸銻鈉（斯銻黑克）或斯銻黑克聯合甲硝唑治療， 效果顯著。作者認為以上均為變異后的黑熱病原蟲。

2 常用診斷方法

2. 1 穿刺涂片法 以骨髓穿刺涂片最為常見， 檢出率高達80%～90%， 淋巴結檢查率為50%～80%， 脾臟穿刺檢出率最高， 為90%～98%， 但不安全， 一般少用或不用。外周血、骨髓、淋巴結等直接涂片染色鏡檢， 優點為代價低、檢出率高、易確診， 但應注意涂片的尾部及邊緣部分， 適合中小型醫院。

2. 2 皮膚活組織檢查 在皮膚結節處， 用消毒針刺破皮膚取組織液做涂片染色鏡檢， 效果較好。

2. 3 培養法 用無菌方法， 將骨髓、淋巴液、組織液、接種于NNN培養基， 置于20～25℃恒溫箱內， 1周后， 在培養基中若見到運動活潑的前鞭毛體， 即為陽性。

2. 4 動物接種法 將骨髓、組織液等接種于易感動物， 如金地鼠， 1～2周后取肝脾做涂片或印片染色檢查。

3 免疫診斷法

3. 1 檢測血清抗原 單克隆抗體-抗原斑點實驗（MCAB-AST）， 陽性率高達90%左右， 該法敏感性、重復性好， 特異性高， 還可做定量檢測， 確定治愈或復發等特點， 適合于研究機構應用。

3. 2 血清抗體檢測法 如酶聯免疫吸附實驗（ELISA）、間接血凝法（IHA）、對流免疫法（CIE）、間接熒光實驗（IF）、間接凝集實驗（DA）等， 但檢測方法與其他疾病可出現交叉反應， 即假陽性率較高， 適合于大中型醫院， 但在黑熱病診斷上有局限性。

3. 3 皮內實驗 該法簡便易行， 但由于需要患者治愈后才出現陽性， 不能作為現癥狀患者的診斷依據。

3. 4 分子生物學診斷 聚合酶鏈反應（PCR）、KDNA探針雜交法， 檢測黑熱病效果好， 敏感性高、特異性好， 檢出率高達96%， 但由于檢驗成本較高， 不適合中小型醫院， 可以作為研究應用。

4 小結

黑熱病原蟲為何會發生以上變異， 其機理尚不清楚， 有待進一步探討。作者認為可能與下列因素有關：①常用抗生素；②具有抗原蟲作用的藥物；③治療貧血及保肝的藥物；④患者體內各種免疫性抗體的產生；⑤人體的耐藥性；⑥農民大量使用各種農藥及殺蟲劑；⑥長期食用反季節及轉基因的蔬菜、水果等。因此需要采用積極的預防措施， 可采取滅蛉、滅犬， 特別是白蛉和帶病毒的犬類， 搞好衛生， 保持室內通風和地面干燥， 野外工作人員應盡量避免裸露， 必要時可擦驅蟲劑， 可用較細的蚊帳做好個人防護。

參考文獻

[1] 張柳， 張秀， 吳丹，等. 黑熱病患兒1例臨床護理. 齊魯護理雜志， 2012， 18（35）：121-122.

[2] 肖興東， 沖喜慧. 臨產婦黑熱病誤診為宮內感染1例. 中國社區醫師（醫學專業）， 2011， 13（31）：18.

[收稿日期：2017-03-13]