HPLC法測定鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍的含量

路明亮

摘要：目的 通過HPLC方法測定二甲雙胍在鹽酸二甲雙胍片劑中的含量。方法 在色譜條件：選擇Hypersil CN （200 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，流動相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調至pH=3.5）（30：70），檢測波長：232 nm， 進樣量10 μl，1.0 ml/min為流速，柱溫為30℃條件下進行檢測。結果 二甲雙胍在1.14 ug/ml～57.00 ug/ml范圍內線性關系良好，線性方程為：Y=46657X-341531（r=0.9993）， 平均回收率為100.12%，RSD為1.4%。結論 采用高效液相色譜方法，可有效評估鹽酸二甲雙胍片劑中二甲雙胍的含量，本法簡單、靈敏度高、結果準確。

關鍵詞：HPLC法；鹽酸二甲雙胍；含量

中圖分類號：R927.2 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）13-0178-02

二甲雙胍是治療2型糖尿病的首選藥物，該藥可通過多種作用機制控制空腹及餐后血糖，且能改善患者血脂代謝[1]，目前主要用于飲食和運動控制血糖不滿意的2型糖尿病患者，尤其是胰高血糖素和肥胖患者[2-5]。此類藥物的質量控制對于臨床用藥安全至關重要，本文由此出發，考察高效液相法在鹽酸二甲雙胍片劑含量測定中的應用，結果報道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

島津 LC-2010CHT 型高效液相色譜儀；超聲波清洗器；乙腈（色譜純，霍尼韋爾貿易（上海）有限公司）；磷酸（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司）、磷酸二氫鉀（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司）；鹽酸二甲雙胍對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：151113-160117）；鹽酸二甲雙胍片（華潤雙鶴藥業股份有限公司，國藥準字H11020541，規格：0.25 g，批號為：151223、160316、160721）。

1.2方法

1.2.1方法學驗證

1.2.1.1色譜條件 色譜柱選擇Agilent C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（加磷酸調至pH=3.5）（30∶70），檢測波長：232 nm， 進樣量10 μl，1.0 ml/min流速，柱溫為室溫（30℃）。

1.2.1.2溶液的制備 ①供試品溶液的制備：精密稱取20顆鹽酸二甲雙胍片，研細后混勻，采用十萬分位天平精密稱定0.100 g供試品，轉移入50 ml容量瓶中，加入20 ml流動相后，加蓋超聲至澄清，放置室溫后加流動相至對應刻度后，用0.25 um有機濾膜過濾，取續濾液待用。②對照品溶液的制備：精密稱定10.19 mg鹽酸二甲雙胍對照品，轉移入20 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻至澄清即得。

1.2.1.3高效液相色譜法 ①精密度試驗：于“1.2.1.1”項色譜條件下，取對照品溶液重復進樣（n=6），進樣量均為10 ul，測定每次峰面積，結合所得數據計算RSD，結果RSD=1.3%<2.0%，達到藥典規定[6]，提示本法精密度良好。②重復性試驗： 取同批次二甲雙胍膠囊6份，根據“1.2.1.2①”項下供試品制備方法制備供試品溶液，采用“1.2.1.1” 項色譜條件，每份樣品進樣10ul，采集每次峰面積，結合所得數據計算RSD，結果RSD=1.2%<2.0%，達到藥典規定，提示本法重復性良好。③穩定性試驗：于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別取“1.2.1.2①”項供試品與“1.2.1.2②”項對照品溶液，采用“1.2.1.1” 項色譜條件，測定不同時間點的色譜峰面積，結合所得峰面積計算不同時間供試品濃度變化，結果RSD=1.2%<2.0%，達到藥典規定，提示對照品及供試品溶液在24 h內較為穩定。④回收率考察：采用5 ml移液管精密量取5 ml供試液（n=3），保存至3個錐形瓶內，依次加鹽酸二甲雙胍對照品2.17 mg、5.46 mg和10.19 mg，根據“1.2.1.2①”項步驟制備供試品溶液，進樣10 ul，測定對應樣品的峰面積，結合所得濃度計算回收率，所得回收率分別為：100.18%、100.22%和99.97%，平均100.12%，RSD 1.4%，達到藥典規定[3]。

1.2.1.4線性關系考察 采用對應刻度移液管分別量取“1.2.1.2②”下對照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.25 um有機濾膜過濾，取對應續濾液即為系列標準溶液。采用“1.2.1.1”項色譜條件，進樣10 ul，測定系列標準溶液色譜峰面積，并以峰面積為橫坐標和濃度縱坐標繪制標準曲線，得到方程為：Y =46657X-341531（r=0.9993），提示，鹽酸二甲雙胍濃度在1.14ug/ml～57.00ug/ml范圍內與峰面積存在良好的線性關系。

1.2.2樣品中鹽酸二甲雙胍含量測定 采用“1.2.1.1項”下色譜條件，分別測定鹽酸二甲雙胍對照品溶液與3批供試品溶液含量，并通過自身對照法對供試品中相關含量進行測定。

2結果

結果顯示，HPLC測定鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍平均含量（與標識量比較）為（101.55±0.47）%，見表1。

3討論

鹽酸二甲雙胍（C4H12ClN5）屬雙胍類降糖藥物，目前在糖尿病疾病控制中應用廣泛，其含量監測一直備受醫藥工作者所重視。本文選擇232 nm為檢測波長，其一是因此波段吸收系數大，吸光度強，其二是因此波段經色譜分離后，無雜峰干擾，檢測準確；而選擇緩沖鹽作為流動相則是因為本藥物屬鹽類物質[7-8]，在色譜柱分配過程中多存在多種離子形式共存，而存在雙頭或拖尾現象，加入緩沖鹽，可讓其pH穩定，保持酸堿平衡狀態，進而利于測量準確，經分析可知，上述檢測條件下，C4H12ClN5色譜峰形良好，分離度高。

通過本文結果我們可知，HPLC法準確性高、精密度好、重現性和相關性均符合相關要求，HPLC法通過色譜柱的分離作用，將鹽酸二甲雙胍制備過程中的有關物質、雜質等干擾有效分離，故而能方便的定位主要成分含量，從而更好的用于此類物質的質量控制，確保用藥安全。

參考文獻：

[1]邵雪力，侯森.高效液相色譜法測定鹽酸二甲雙胍片的含量[J].中國中醫藥咨訊，2011，03（12）：116-117.

[2]王長丹，臧恒昌，左艷紅.二甲雙胍格列吡嗪片中鹽酸二甲雙胍含量測定方法改進[J].藥學研究，2015，34（10）：574-576.

[3]孟梅，馬維青，陶存武，等.肥胖初發2型糖尿病患者早期降糖治療對血胰高血糖素、C肽的影響[J].中日友好醫院學報， 2013， 27（1）：21-24.

[4]李晗，高宏凱，胥陽，等.胃轉流術后非肥胖2型糖尿病患者血清胰高血糖素樣肽-1濃度變化的研究[J].中華臨床醫師雜志：電子版，2012，06（7）：119-121.

[5]李晗，高宏凱，胥陽，等.胃轉流術后非肥胖2型糖尿病患者血清胰高血糖素樣肽-1濃度變化的研究[J].中華臨床醫師雜志：電子版，2012，06（7）：119-121.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：化學工業出版社，2010.附錄XIX194.

[7]周平，童卉琦，白金，等.RP-HPLC 測定鹽酸二甲雙胍腸溶片的含量[J].中國執業藥師，2014，11（12）：34-36.

[8]宋新康，曾玉梅.高效液相色譜法測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量和釋放度[J].中國醫院用藥評價與分析，2016，16（6）：801-803.編輯/高章利