高效液相色譜|示差折光測定糯米藕中果糖和葡萄糖含量

李紅梅++尤繼明++韓華++楊抗震

摘要：建立了高效液相色譜|示差折光測定糯米藕中果糖和葡萄糖含量的實驗方法。色譜柱采用Waters NH2柱（250 mm×4.6mm，5 μm），以乙腈∶水=80∶20為流動相，采用示差折光檢測器測定糯米藕中果糖和葡萄糖的含量。果糖和葡萄糖的線性范圍為2～40 mg/mL，檢出限為0.5 mg/mL，加標回收率為97.46%～101.32%，相對標準偏差1.81%～2.52%。該方法簡單、快速、準確、重現性好，適用于糯米藕中果糖和葡萄糖的定量分析。

關鍵詞：糯米藕；葡萄糖；果糖；高效液相色譜；示差折光檢測

中圖分類號：TS207.3

文獻標識碼：A文章編號：16749944（2017）16000102

1引言

糯米藕又稱蜜汁藕、桂花糯米藕、香糯蓮藕等，是江蘇省地方傳統特色食品之一，也是特色加工農產品之一。糯米藕是以鮮藕為主要原料，配以水、糯米、白砂糖、桂花等輔料，經清洗、切節、灌糯米，蒸煮或不蒸煮，切片或不切片，包裝、高溫殺菌等等工序制成的蓮藕制品，以其香甜、香氣濃郁而享有口碑，是我國特有的傳統食品之一，深受人們的喜愛，而其中的果糖和葡萄糖[1，2]含量還未見報道。目前，文獻報道的還原糖的分析方法有滴定法、光度法[3～5]、毛細管電泳法[6]、離子色譜法[7～9]、液相色譜法[10～18]、質譜法[19]等。示差折光檢測器（Refractive Index Detector）是一種高度穩定和靈敏的液相色譜和凝膠滲透色譜檢測器，可用于檢測在紫外光范圍內吸光度不高的化合物，如聚合物、糖、有機酸和甘油三酸酯。因此，本研究應用高效液相色譜|示差折光方法對糯米藕中果糖和葡萄糖含量的測定進行了探究。

2材料與方法

2.1材料和儀器

糯米藕（企業提供）、果糖 葡萄糖；乙腈（色譜純），Tedia公司；實驗用水，超純水。

E2695/2414液相色譜|示差折光檢測器，Waters公司；Synergy超純水機，美國密理博公司；BSA224S電子天平，Sartorius公司。

2.2實驗方法

2.2.1色譜條件選擇

色譜柱：Waters NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶水=80∶20；檢測池溫度：40℃；柱溫：40℃；進樣量10 μL；流速1.0 mL/min。

色譜柱方面，實驗選擇了C18和NH2柱，因為這兩種柱子在實驗室中比較常見，是分析實驗中常用柱子。實驗中發現糖在C18柱子中不會被保留，只有在氨基柱子上能夠分離分析出，所以在實驗中選擇了氨基柱作為分析實驗用柱。流動相的選擇中，在乙腈∶水=80∶20時候，標準品達到很好的基線分離。

2.2.2標準溶液配制

準確稱取果糖和葡萄糖標準品，用流動相溶解分別配制成2、5、10、20、40 mg/mL的混標溶液，搖勻，經0.45 μm 濾膜過濾，取濾液備用，作為標準品溶液。

2.2.3樣品溶液配制

糯米藕樣品粉碎勻漿后，稱取糯米藕5 g，置于100 mL燒杯中，加入30 mL水，用玻璃棒攪拌使試樣完全溶解，轉移至100 mL容量瓶中，然后再用10 mL水洗燒杯三次并轉移至上述100 mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，經0.45 μm濾膜過濾，取濾液作為樣品溶液。

3結果與討論

3.1線性關系的考察

精密吸取兩種糖混合標準溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品峰面積為縱坐標，以對照品溶液濃度（mg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程跟相關系數見圖1。兩種糖在2～40 mg/mL之間線性關系良好。并以信噪比等于3為標準，測得果糖跟葡萄糖的檢出限為0.5 mg/mL。

3.2精密度試驗

精密吸取混合標準品溶液10 μL重復進樣6次，記錄色譜圖峰面積，并測定峰面積的平均值和相對標準偏差，測定結果見表1。連續6次實驗結果顯示，果糖和葡萄糖精密度實驗相對標準偏差為0.17%、0.08%，本實驗測定果糖和葡萄糖精密度良好，具有良好的準確度。

3.3重復性實驗

取同一樣品，按照供試樣品溶液制備方法重復測定6次，記錄色譜圖，測定結果見表2。

結果表明，重復性實驗果糖相對標準偏差為0.99%，葡萄糖相對標準偏差為0.84%。用該方法測果糖和葡萄糖含量重復性良好。

3.4回收率實驗

在上述優化好的條件下，分別在糯米藕樣品中添加標樣，進行添加回收率和精密度實驗。測定結果見表3，回收率在97.46%～101.32%之間，重復測定7次，計算各組分的相對標準偏差在1.81%～2.52%之間。表明高效液相色譜|示差折光法能夠滿足實際樣品的測定需求。

3.5樣品測定

取6批糯米藕按2.3.3方法制備樣品溶液，精密吸取樣品供試液10μL，標準品混合溶液10 μL，分別注入高效液相色譜儀，以外標法計算含量，見表4，樣品中果糖跟葡萄糖含量見表4。果糖和葡萄糖標準品及樣品的HPLC色譜圖見圖2，3，從圖中可知通過上述條件標準品和樣品都能夠達到很好的基線分離，果糖和葡萄糖出峰時間分別在6.5 min和7.0 min左右，結果令人滿意。

4結論

采用高效液相色譜|示差折光方法來測定糯米藕中果糖和葡萄糖含量，對實驗條件進行了優化，色譜柱采用Waters NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈∶水=80∶20為流動相分離效果較好，并對該條件了進行了實驗方法的考察和實際樣品的測定，結果表明該法穩定、準確、快速，適用于糯米藕中果糖和葡萄糖的含量測定。endprint

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