丹黃散促進糖尿病足潰瘍大鼠創面毛細血管新生

邸鐵濤+張春玲+陳露+龍麗+侯丹+劉洹穎+宋慶娜+黃薔

[摘要] 目的 將中藥丹黃散外敷用于糖尿病大鼠足潰瘍創面，觀察其對潰瘍創面的促愈作用，探討其促愈機制。方法 建立糖尿病大鼠足潰瘍模型，設12只中藥組、12只西藥組、12只空白組，另設12只正常組，空白組與正常組不添加干預方法，西藥組采用生長因子凝膠外敷，中藥組采用丹黃散外敷。測量不同時間點大鼠潰瘍面的愈合面積，通過HE染色、Masson染色觀察創面新生組織內毛細血管和成纖維細胞的增生情況。 結果 對4組大鼠不同時間點愈合率進行比較，差異有統計學意義（P<0.05）。中藥組、西藥組與空白組比較，能明顯促進創面的愈合，加快創面愈合的速度，縮短愈合時間（P=0.001）。HE染色、Masson染色觀察顯示，中藥組與西藥組創面組織中炎性細胞較之空白組與正常組減少，新生毛細血管及成纖維細胞增多。結論 丹黃散可明顯提高創面的愈合率，促進潰瘍的愈合，其機制可能與促進創面新生毛細血管形成、促進成纖維細胞的增殖有關。

[關鍵詞] 丹黃散；創面愈合；血管新生；成纖維細胞；中醫藥

[中圖分類號] R259 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2017）08（b）-0165-03

糖尿病足的發病機制極其復雜且難以愈合，存在多種學說。有學者認為，糖尿病患者體內高血糖持續狀態和晚期糖基化終末產物的大量蓄積可以造成血管的損傷，這可能是導致糖尿病足潰瘍難以愈合的原因[1]。糖尿病足存在毛細血管與神經病變，中醫脈絡學說認為糖尿病足中血管的損傷尤其是微血管損傷可造成潰瘍發生發展和遷延不愈。中藥丹黃散由丹參、大黃、當歸、沉香、松香、沒藥共6味傳統中藥組成，具有清熱解毒、活血利濕，祛腐生肌等功效，可明顯促進創面的愈合[2]。該實驗將丹黃散外敷于糖尿病大鼠潰瘍創面，觀察不同時間的創面愈合率和新生創面的毛細血管增生情況，探討丹黃散促愈糖尿病足潰瘍的作用機制，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實驗動物 SPF級200 g左右雄性SD大鼠，購自重慶醫科大學動物研究所。45只高脂高糖飼料喂養一個月，隔夜禁食后腹腔注射10%STZ 40 mg/kg，3 d后測空腹血糖大于16.7 mmol/L為成模糖尿病大鼠。選擇大鼠背部較為平坦之處脫毛，龍膽紫標記約1.5 cm×1.5 cm大小面積，水合氯醛麻醉后在無菌條件下將造模區皮膚剪去，深達筋膜。

1.1.2 藥物制備 丹黃散由該院藥劑科統一制備，丹參、大黃、地榆、乳香、沉香、沒藥共6味中藥按照1：1比例混合粉碎成粉過六號篩。對照藥選用重組人表皮生長因子凝膠（批號：14020213）。

1.2 實驗方法

1.2.1 給藥方法 將糖尿病潰瘍成模后大鼠隨機分為3組，中藥組、西藥組、空白組各12只、另取正常SD大鼠12只設為正常組，空白組和正常組不進行藥物干預。中藥組創面外敷丹黃散，西藥組創面外敷生長因子凝膠，1次/d觀察30 d。

1.2.2 HE染色、Masson染色 創面中心點取新生肉芽組織（約3 g），平均分為2份分別進行HE、Masson染色，采用多功能熒光顯微鏡觀察組織創面和周圍組織的病理形態。

1.3 統計方法

采用SPSS 20.0統計學軟件處理數據，實驗數據以均數±標準差（x±s）表示，行t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4組大鼠不同時間點愈合率比較

采用重復的方差分析對4組大鼠不同時間點愈合率進行比較，差異有統計學意義（P<0.05）。中藥組與西藥組比較，差異無統計學意義，說明丹黃散在促進糖尿病大鼠潰瘍愈合上與生長因子凝膠具有同等作用；中藥組、西藥組與空白組比較，差異有統計學意義（P=0.001），說明丹黃散與生長因子凝膠均能明顯促進創面的愈合，短愈合時間。4組大鼠不同時間點愈合面積從大到小具有相同趨勢，可依次排列為：中藥組>西藥組>正常組>空白組。見表1。

2.2 組織HE染色與Masson染色

光鏡觀察結果：空白組可見較多炎性細胞，少見成纖維細胞，罕見新生毛細血管；正常組較空白組炎性細胞數量減少，成纖維細胞增多，可見散在的新生毛細血管；西藥組和中藥組較空白組，可見少量的炎性細胞，成纖維細胞數量較多，大量新生毛細血管。總體上看，中藥組毛細血管增生明顯，成纖維細胞較多且染色較深，炎性細胞少見，西藥組、正常組居中，空白組最差，極少見血管增生，炎性細胞浸潤明顯。見圖1。

3 討論

糖尿病足（Diabetic Foot，DF）又稱糖尿病肢端壞疽，屬中醫“消渴”“脫疽”“瘡瘍”范疇。WHO將糖尿病足定義為糖尿病患者由于合并神經病變及各種不同程度末梢血管病變而導致下肢感染、潰瘍形成和（或）深部組織的破壞[3]。糖尿病足潰瘍存在不同程度的血管和神經病變，中醫脈絡學說認為糖尿病足患者血管尤其是微血管損傷造成了足潰瘍的發生和發展[4]，潰瘍創面缺乏新生肉芽組織與毛細血管致使其遷延不愈，由新生毛細血管和成纖維細胞構成的肉芽組織形成在潰瘍面愈合過程中至關重要，可直接影響潰瘍面愈合過程及預后。新生毛細血管可改善創面微循環，提供營養物質和氧氣，加速創面新陳代謝，促進潰瘍面愈合；而成纖維細胞在皮膚損傷后可被激活，使胞質中出現張力纖維，從而促進潰瘍面愈合。

中醫治療糖尿病足潰瘍以“拔膿祛腐”“脫瘡生肌”“補益氣血”“活血化瘀”等法通暢氣血、去腐生肌。丹黃散是該院十余年的經驗總結，在中醫“筋癰”理論指導下結合現代藥理研究形成的院內制劑，主方為丹參、大黃、當歸、沉香、松香、沒藥等6味中藥按1：1：1比例組成的外用散劑，方中丹參為君藥，性溫味甘辛，具有擴張血管、改善微循環、抗菌及消炎等作用[5]。大黃共為君藥，性寒味苦，具有清熱解毒、涼血祛瘀、抗炎解毒等作用[6]，可抑制多種細胞和病毒；當歸為臣藥，性溫味甘辛，具有抗血小板集聚、減少血粘度、提高單核吞噬細胞系統的吞噬功能等作用；沒藥為佐藥，性溫味辛苦，具有散血消腫、止痛生肌等作用，還能促進粘膜再生[7]；沉香共為佐藥，性溫味辛苦，具有行氣鎮痛、抗菌抑菌等作用；松香為使藥，性辛甘，有鎮靜理氣、拔膿祛腐、生肌止痛等效果，諸藥合用具有清熱解毒、活血利濕，祛腐生肌等功效，可明顯促進創面愈合。該實驗中HE染色和Masson染色結果均表明，丹黃散與重組人表皮生長因子凝膠均有促進新生毛細血管生長、增殖、升高成纖維細胞數等作用，中藥組、西藥組較空白組與正常組顯微鏡相同視野下可見成纖維細胞、新生毛細血管數量明顯增多，從而促進潰瘍創面新生肉芽組織生成，促進創面愈合，縮短愈合時間。推測，這很可能是丹黃散促進糖尿病潰瘍創面愈合的作用機制。此外，不同時間點各組大鼠創面愈合率的比較也支持這一結論，中藥組、西藥組第7、15、21、28天創面愈合率均優于正常組與空白組，具有相同趨勢，可依次排列為：中藥組>西藥組>正常組>空白組，中藥組、西藥組促進潰瘍創面愈合療效顯著。

該研究將中藥制劑丹黃散外敷用于糖尿病足潰瘍模型大鼠，通過測量不同時間點大鼠潰瘍面的愈合面積，計算、比較各組大鼠不同時間點潰瘍創面的愈合率，觀察HE染色、Masson染色中創面新生組織中毛細血管、成纖維細胞的增生情況，對比四組大鼠創面愈合情況。結果顯示中藥丹黃散可明顯提高大鼠潰瘍創面的愈合率，促愈糖尿病大鼠潰瘍，其機制可能與促進創面新生毛細血管形成、促進成纖維細胞的增殖有關。

[參考文獻]

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[3] Apelqvist，Bakker K，van Houtum WH，et al.International consensusand guidelines on the management and the prevention of the diabeticfoot.International Working Group on the Diabetes Foot[J].DiabetesMetab Res Rev，2000.16（1）： 84.

[4] 魏聰，常麗萍，趙珊珊.脈絡學說指導防治“脈絡-血管系統病”的理論探微[J].疑難病雜志，2015（11）：1101- 1103.

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[6] 齊君，楊秋芳.外用大黃治療難愈性外傷及潰瘍[J].現代中醫藥，2003（5）：59.

[7] 李曦，張麗宏，王曉曉，等.當歸化學成分及藥理作用研究進展[J].中藥材，2013，36（6）：1023-1028.endprint