破壁式方法提取藤茶中二氫楊梅素的工藝研究

鄭琳 龔自明

摘要：以湖北省恩施州富硒土壤上生長的藤茶（Ampelopsis grossedentata）為原料，開展破壁式提取二氫楊梅素的工藝研究。結(jié)果顯示，破壁式輔助提取條件下，常溫25 ℃，料液比1∶50（g∶mL），用100%純乙醇溶液提取5 min，提取液中二氫楊梅素含量為15.172%。

關(guān)鍵詞：藤茶（Ampelopsis grossedentata）;二氫楊梅素;破壁式提取;工藝研究

中圖分類號：TS201.1? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2018）22-0118-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.22.032? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Abstract： Using Ampelopsis grossedentata which is growing on the soil rich in selenium as material in Enshi of Hubei province，wall-breaking assisted extraction test of dihydromyricetin（DMY） was carried out. The results showed that under the condition of wall-breaking assisted extraction，5 min was extracted and the ratio of tea material to 100% pure ethanol solution was 1∶50（g∶mL） at room temperature（25 ℃），the content of DMY in tea soup was 15.172%.

Key words： Ampelopsis grossedentata; dihydromyricetin（DMY）; wall-breaking assisted extraction; process research

藤茶（Ampelopsis grossedentata）系葡萄科蛇葡萄植物顯齒蛇葡萄的莖葉，學(xué)名為顯齒蛇葡萄，是一種多年生的藤本植物。藤茶有效成分主要是黃酮，是目前植物中發(fā)現(xiàn)黃酮含量較高的植物。藤茶黃酮主要成分為二氫楊梅素，具有抗氧化、抑菌消炎、止咳化痰、降“三高”、抗癌等功能[1-7]。研究發(fā)現(xiàn)，一定質(zhì)量濃度的硒能促進(jìn)藤茶中黃酮類物質(zhì)的合成[8]，本研究以“世界硒都”-湖北省恩施州，富硒土壤上生長的藤茶為原料，用破壁式提取的方法提取其中二氫楊梅素成分，為工業(yè)化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)，為提高藤茶的利用率提供技術(shù)支撐。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 藤茶原料? 原料來自湖北省恩施州來鳳縣金藤子專業(yè)合作社。

1.1.2? 試驗(yàn)試劑? 乙醇為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），冰乙酸、乙腈為色譜純（美國Fisher Chemical），二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)品（上海源葉生物科技有限公司，純度98%）。

1.2? 方法

選用JHBE-50S型閃式提取器，其特點(diǎn)為基于組織破碎原理，將物料快速破碎至適當(dāng)粒度，同時伴有高速攪拌、超強(qiáng)振動、負(fù)壓滲濾等作用實(shí)現(xiàn)提取的目的，最大限度保留植物有效成分不會受熱破壞，溶劑用量小，提取時間短，效率高。

單因素試驗(yàn)：破壁式提取時間選取1、2、3、4、5、6 min，乙醇體積分?jǐn)?shù)選取0、20%、40%、60%、80%、100%，料液比選取1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70（g∶mL，下同），以此研究各因素的影響作用。

正交試驗(yàn)：通過單因素試驗(yàn)，分析各因素對二氫楊梅素提取量的影響，確定較佳的單因素試驗(yàn)條件范圍，在此基礎(chǔ)上，以提取時間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比為主要影響因素，各選出3個水平，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)分析（表1）。

1.3? 高效液相色譜分析檢測方法

色譜柱為Agilent TC-C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm）。流動相為甲醇-水（3∶7）（用冰乙酸調(diào)pH至3.5）。流速0.7 mL/min;檢測波長292 nm;柱溫35 ℃;進(jìn)樣量10 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取20 mg二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)樣品，溶解于上述流動相，精確定容至25.0 mL，得到0.8 mg/mL母液。然后取適量上述溶液，分別稀釋至1、4、8、16、32倍，即得濃度梯度為0.800、0.200、0.100、0.050、0.025 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液用高效液相色譜法進(jìn)行測定，以測定得到的色譜峰面積和已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度進(jìn)行回歸分析，得回歸分析曲線：y=（3e-8）x+0.012，R2=0.999，x表示峰面積，y表示樣品濃度（mg/mL）。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 單因素試驗(yàn)

圖1表明，提取液中二氫楊梅素的含量隨著提取時間的延長先升后降，提取時間為5 min時，提取含量達(dá)到最高，提取時間繼續(xù)延長，二氫楊梅素因氧化等原因發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，含量反而下降。

圖2表明，提取液中二氫楊梅素的含量隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的提高而增加，乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%與無水乙醇狀態(tài)相差不大。

圖3表明，在選取的料液比范圍內(nèi)隨著提取用水量的增加，提取液中二氫楊梅素含量一直呈上升趨勢，但當(dāng)料液比達(dá)到1∶50后，再增加提取用水量，對二氫楊梅素的浸出影響不大，反而會因溫度等原因加快二氫楊梅素的氧化，同時提高生產(chǎn)成本。

2.2? 正交試驗(yàn)確定破壁式提取二氫楊梅素的最佳條件

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，提取時間選取3、4、5 min，乙醇體積分?jǐn)?shù)選取60%、80%、100%，料液比選取? 1∶40、1∶50、1∶60，正交分析結(jié)果見表2和表3。由表2可知，提取二氫楊梅素含量最高的處理組合為A3B3C2，分析各因素K的變化率得到的最優(yōu)組合為A3B2C2，但由表3可知，A因素對結(jié)果的影響顯著，B因素和C因素對結(jié)果的影響不顯著。綜合表2和表3結(jié)果，并經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，得到最佳可行提取工藝組合為A3B3C2，即提取時間5 min，乙醇體積分?jǐn)?shù)100%，料液比1∶50，此條件下提取液中二氫楊梅素含量為15.172%。

3? 小結(jié)與討論

破壁式提取條件下，最佳提取工藝組合為提取時間5 min，乙醇濃度100%，料液比1∶50，此條件下提取液中二氫楊梅素含量為15.172%。提取時間對提取液中二氫楊梅素含量的影響顯著，乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比的影響不顯著。

破壁式提取方法批次處理量大，溶劑損耗較小，適用于工業(yè)化提取藤茶中二氫楊梅素成分。本研究以“世界硒都”-湖北省恩施州富硒土壤上生長的藤茶為原料，分析了破壁式提取方法對二氫楊梅素的提取效果，該方法綠色高效，對提高藤茶的利用率具有重要意義。

預(yù)計(jì)從兩方面著手開展后續(xù)試驗(yàn)：一是放大驗(yàn)證該方法的提取效果，為工業(yè)化生產(chǎn)二氫楊梅素提供理論及技術(shù)支持;二是進(jìn)一步篩選合適的樹脂，純化二氫楊梅素單體。

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