丹參酮ⅡA抑制血管平滑肌細胞增殖的作用機制探討

韓芬

VSMC在臨床上被認為是產(chǎn)生多種動脈疾病的細胞水平根源, 若VSMC加速生長, 則會在很大程上導致高血壓、冠心病及糖尿病等血管疾病的發(fā)生, 臨床研究認為對VSMC增殖進行抑制可對心血管疾病的預防和控制起到良好的作用［1］。丹參酮ⅡA具有溶脂性, 可對人體的血管細胞皮進行有效保護, 同時也可對血小板聚集進行抑制, 從而對心肌缺血區(qū)的冠狀動脈血流量情況進行有效的改善, 對VSMC增殖的抑制效果良好［2］。本文主要是通過實驗的方式對丹參酮ⅡA抑制VSMC增殖作用進行探討。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選取體重在125 g左右、身體健康的雄性SD大鼠120只, 分為對照組、A組和B組, 各40只。

1.2 材料與試劑

1.2.1 材料 丹參酮ⅡA(上海第一生化藥業(yè)有限公司), 低糖DMEM培養(yǎng)液(上海慧穎生物科技有限公司), 胎牛血清(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

1.2.2 試劑 V-FITC、Binding Buffer細胞凋亡檢測試劑盒(上海研卉生物科技有限公司), RT-PCR試劑盒(北京天根生化科技有限公司)。

1.3 實驗方法 將全部大鼠脫臼處死, 將其腹主動脈取下后祛除內(nèi)膜與外周結(jié)締組織, 所有操作過程均為無菌操作。使用具有預冷效果的PBS將大鼠的中膜組織進行沖洗, 剪成小塊后放置于培養(yǎng)瓶中, 將細胞放置于含有濃度為10%的FBS的DMEM低糖培養(yǎng)液當中, 并在濃度為5%的CO2、溫度約為37℃的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。1周后發(fā)現(xiàn)細胞在其組織邊處爬出, 之后平均隔1 d進行1次培養(yǎng)液的更換, 當細胞處于80%左右的融合狀態(tài)后, 進行傳代, 并取VSMC的4～6代完成純化后進行分組干預：對照組在VSMC中加入濃度為30%的50 μl FBS培養(yǎng)液；A組使用濃度為30%的25 μl FBS培養(yǎng)液、劑量為10 ml/L的25 μl丹參酮ⅡA；B組使用濃度為30%的25 μl FBS培養(yǎng)液、劑量為20 ml/L的25 μl丹參酮ⅡA。使用四唑鹽(MTT)法對細胞毒性進行檢測、流式細胞儀進行細胞凋亡檢測。

1.4 觀察指標 比較三組平滑肌細胞抑制情況及細胞凋亡情況、p21 mRNA相對表達量。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行分析處理。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組平滑肌細胞抑制情況比較 平滑肌細胞抑制情況：A、B組的吸光度值(0.639±0.018)、(0.298±0.015)均低于對照組(1.432±0.121), 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；A組吸光度值高于B組, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組平滑肌細胞抑制情況比較( ±s)

表1 三組平滑肌細胞抑制情況比較( ±s)

注：與對照組比較, aP＜0.05；與A組比較, bP＜0.05

組別 只數(shù) 吸光度值對照組 40 1.432±0.121 A組 40 0.639±0.018a B組 40 0.298±0.015ab

2.2 三組細胞凋亡情況、p21 mRNA相對表達量比較 對照組的細胞凋亡率、p21 mRNA相對表達量均低于A、B組, B組的細胞凋亡率、p21 mRNA相對表達量均高于A組, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討論

臨床上對冠心病和高血壓等心腦血管疾病常會使用中藥方法進行治療, 丹參屬于一種中藥藥材, 其性微寒、味苦,可作用于患者的心、肝等部位, 具有良好的活血通絡(luò)、清心除煩及止痛祛瘀的功效［3］。臨床上通過實驗顯示丹參具有較強的藥理作用, 可有效增強患者的心肌收縮能力、對冠狀動脈血管進行擴張、使血流量增加并能夠?qū)ζ湫呐K功能進行改善等。丹參是丹參酮ⅡA的最主要成分, 能夠?qū)ζ交〖毎鲋城闆r進行有效抑制, 具有積極的抗缺血缺氧、微循環(huán)的作用。在正常的生理狀況下, VSMC可對血管擴張情況進行有效調(diào)節(jié), 具有對血管功能的維持、對調(diào)節(jié)因子釋放的分泌作用［4,5］。但當機體內(nèi)的血管內(nèi)皮功能發(fā)生損傷后, 多種的細胞因子會得到釋放, 并會作用于VSMC膜受體當中, 從而將細胞內(nèi)的信號傳導通路進行全面激活, 最終形成對VSMC的增殖促進作用［6］。

在臨床上, 許多心血管疾病的病理基礎(chǔ)均為VSMC出現(xiàn)異常增殖情況而導致的［7］, 所以臨床上對VSMC增殖的抑制研究十分重視。本文主要是以SD大鼠作為研究對象, 通過對大鼠腹主動脈的培養(yǎng)來進一步獲取VSMC, 在此基礎(chǔ)上使用丹參酮ⅡA進行藥物干預, 并使用MTT檢測法對大鼠的細胞毒性進行檢測。通過檢測結(jié)果顯示, 直接加入FBS培養(yǎng)液的對照組的吸光度值明顯要高于使用劑量不同的丹參酮ⅡA+FBS培養(yǎng)液的A、B組(P＜0.05), 而A、B組進行組間比較顯示, A組的吸光度值明顯高于B組(P＜0.05)；對照組的細胞凋亡率與p21 mRNA表達量明顯低于A、B組(P＜0.05),B組的細胞凋亡率與p21 mRNA表達量明顯高于A組(P＜0.05)。由此可見使用丹參酮ⅡA可有效對VSMC的增殖進行抑制。p21基因表達產(chǎn)物為p21蛋白, 是一種細胞周期性的調(diào)控蛋白, 若受到相關(guān)條件的誘導便會發(fā)生促進細胞凋亡的情況［8-10］, 本研究中對照組的細胞凋亡、p21 mRNA表達量均低于A、B組, 可見丹參酮ⅡA可通過對p21 mRNA相對表達量的抑制, 進而對VSMC增殖進行有效抑制。

綜上所述, 丹參酮ⅡA對VSMC增殖的抑制作用顯著,且該藥物的機制在很大程度上同細胞周期蛋白p21的表達強度有關(guān)。

［1］ 李澤爭, 王葳, 王巍巍, 等.丹參酮ⅡA對大鼠血管平滑肌細胞增殖的抑制作用及機制探討.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2015, 16(10):861-865.

［2］ 陸敬平, 王沛.丹參酮ⅡA抑制血管平滑肌細胞增殖的機制.中國循證心血管醫(yī)學雜志, 2016, 8(10):1220-1222.

［3］ 席銳, 鄒琛, 陳楨玥, 等.同型半胱氨酸促進血管平滑肌細胞增殖的機制及辛伐他汀的干預作用.國際心血管病雜志, 2015,42(1):44-47.

［4］ 周煒, 劉瑋, 廖華, 等.睪酮抑制氧化型低密度脂蛋白誘導的血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化和增殖.細胞與分子免疫學雜志,2015, 31(6):775-778.

［5］ 劉娟, 曾羽, 商黔惠, 等.辣椒素對高鹽致大鼠血管平滑肌細胞增殖的抑制作用.中國動脈硬化雜志, 2017, 25(6):559-565.

［6］ 鄢艷, 占丹丹, 蘇曉霞, 等.殼聚糖對尿毒癥患者血管平滑肌細胞增生的抑制作用及其機制.中華腎臟病雜志, 2016, 32(8):598-603.

［7］ 李文婷, 鄒偉, 曹琳, 等.miR-145靶向抑制MMP-9表達對大鼠腦動脈血管平滑肌細胞增殖和遷移的影響.山東醫(yī)藥, 2017,57(26):25-28.

［8］ 董宜旋, 李靜.丹參酮ⅡA抑制同型半胱氨酸誘導的大鼠主動脈血管平滑肌細胞增殖和遷移及其機制研究.中國藥房, 2016,27(22):3072-3076.

［9］ 李欣, 杜俊蓉, 白波, 等.丹參酮ⅡA抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖及其機制研究.中國中藥雜志, 2008, 33(17):2146-2150.

［10］ 張海宏, 陳玉成, 梁玲, 等.丹參酮ⅡA對體外兔血管平滑肌細胞增殖和遷移的影響.四川大學學報(醫(yī)學版), 2008, 39(2):188-192.