芍藥苷對深Ⅱ度燙傷誘導的肝損傷小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達的影響

韓玉芳，張　瑋，蘇瑜恒，張　潔，張　偉，路　瑤

芍藥苷(paeoniflorin，PF)是從中草藥芍藥中提取的化合物，在藥物化學分類中屬于單萜類糖苷化合物[1]。近些年來，大量基礎(chǔ)研究提示芍藥苷具有一定的藥理作用[2]。燙傷是日常生活和戰(zhàn)時常見且復雜的外傷疾病，燙傷可導致休克、組織器官缺血缺氧，進一步損傷肝腎肺等實體器官[3]。近幾年，中藥成分用于燙傷所致臟器損傷是研究熱點之一[4]。作者通過研究芍藥苷對深Ⅱ度燙傷誘導的肝損傷小鼠肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase，AST)水平和Bax、Caspase-3表達，為燙傷所誘發(fā)的肝損傷防治提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1實驗用品與試劑組織蠟塊切片機(德國Leica公司)，芍藥苷(西安昊軒生物科技有限責任公司)，ALT與AST試劑盒(艾美捷科技有限公司)，兔源單抗Bax、Caspase-3(美國CST公司生產(chǎn))，ABC免疫組化試劑盒(天津麥蘭波公司)，DAB組化顯色試劑套裝(天津麥蘭波公司)。

1.2實驗動物雄BABc小鼠30只，體質(zhì)量25～30 g，由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供，在SPF級條件下飼養(yǎng)。

1.3動物建模與用藥30只BABc小鼠隨機分為3組，每組10只，分別為對照組、模型組、芍藥苷組。對模型組、芍藥苷組小鼠進行Ⅱ度燙傷處理：實驗前使用100 g·L-1硫化鈉背部去毛，采用水合氯醛(400 mg·kg-1)麻醉小鼠，采用90 ℃熱水燙傷小鼠皮膚，造成占15%體表總面積的深Ⅱ度創(chuàng)面[5]。芍藥苷組則在建模前按60 mg·kg-1芍藥苷進行灌胃1次。

1.4樣品采集與處理燙傷后12 h處死小鼠，并取血與肝組織，檢測ALT與AST 水平變化情況。肝臟固定于4%中性甲醛溶液中，按病理科實驗程序制作組織石蠟切片，然后進行HE染色與免疫組化標記Bax、Caspase-3表達與定位。

2　結(jié)果

2.1小鼠ALT與AST水平變化與對照組比較，燙傷處理后的小鼠血清 ALT與AST 水平顯著上升，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而芍藥苷組經(jīng)芍藥苷提前預處理后，小鼠血清ALT與AST水平與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與對照組比較，芍藥苷組小鼠血清 ALT與AST 水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　芍藥苷對損傷小鼠ALT與AST的影響(n=10)　U/L

注：①與模型相比較：P<0.05。

2.2小鼠肝組織病理變化在HE染色中，與對照組相比，燙傷處理后小鼠肝臟組織出現(xiàn)細胞水腫，部分區(qū)域可見壞死，且壞死誘發(fā)炎性細胞浸潤，損傷程度明顯，較嚴重區(qū)域可見肝小葉結(jié)構(gòu)遭受破壞。而芍藥苷預處理后小鼠肝臟組病理學改變明顯減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，見圖1。

2.3肝損傷小鼠Bax、Caspase-3表達對3組小鼠肝組織進行免疫組化染色，光鏡下可見肝臟細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，此著色間接體現(xiàn)為Bax、Caspase-3表達陽性。Bax與Caspase-3蛋白在對照組小鼠肝組織中呈低表達，而燙傷處理后的小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達增高；芍藥苷預處理的小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達均有不同程度減少，結(jié)果提示芍藥苷可抑制深Ⅱ度燙傷誘導的肝損傷小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達，見圖2。

圖1　小鼠肝組織病理變化(HE，×400)

圖2　小鼠肝組織Bax、Caspase-3 表達(免疫組化染色,×400)

3　討論

嚴重燙傷后各器官會發(fā)生不同程度的缺血缺氧損傷[6]，若不及時治療 ，會產(chǎn)生大量氧自由基、炎性介質(zhì)等有害物質(zhì)[7-8]，損害各器官功能[9-10]。ALT與AST 主要存在于肝細胞中，當肝細胞受損時血中含量增加；深度燙傷可引起肝細胞損傷，且ALT與AST釋放入血增加[11]。結(jié)果顯示，燙傷后的小鼠血清 ALT與AST 水平顯著上升，而芍藥苷組經(jīng)芍藥苷提前預處理后，小鼠血清ALT與AST水平與模型組比較顯著減少；與對照組比較，芍藥苷組小鼠血清 ALT與AST 水平差異無統(tǒng)計學意義。與對照組相比，燙傷處理后小鼠肝臟組織出現(xiàn)細胞變性與壞死，壞死誘發(fā)炎性細胞浸潤，損傷程度明顯，較嚴重區(qū)域可見肝小葉結(jié)構(gòu)遭受破壞；而芍藥苷預處理后小鼠肝臟組織損傷改變減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整。實驗結(jié)果表明，芍藥苷可有效減輕深Ⅱ度燙傷誘導的肝損傷。

機體內(nèi)外各種因素上調(diào)Bax表達，均能促進機體內(nèi)細胞凋亡或細胞壞死[12]。Caspase-3作為蛋白水解酶類，可涉及細胞信號傳導及細胞死亡的執(zhí)行[13]，當機體遭到復雜因素刺激時，Caspase-3則轉(zhuǎn)為活性片段Cleave Caspase-3，激活凋亡的級聯(lián)反應[14]，誘導細胞凋亡或死亡[15]。免疫組化結(jié)果表明，對照組小鼠肝組織Bax、Caspase-3低表達，模型組小鼠肝組織Bax、Caspase-3陽性表達明顯增多，而芍藥苷組小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達程度均有不同程度降低。經(jīng)芍藥苷干預的小鼠血清 ALT與AST含量明顯減少，小鼠肝臟組織病理學結(jié)果得到明顯改善，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，提示芍藥苷可有效減輕深Ⅱ度燙傷誘導的肝損傷，其機制可能與降低Bax、Caspase-3表達以抑制肝細胞凋亡有關(guān)。

參考文獻：

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