局部晚期維、漢族食管鱗癌血清蛋白差異表達(dá)相關(guān)通路分析

（1新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤中心 新疆 烏魯木齊830054）

（2新疆醫(yī)科大學(xué) 新疆 烏魯木齊830000）

（3新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院VIP醫(yī)學(xué) 新疆 烏魯木齊830054）

食管癌已被列為新疆特高發(fā)惡性腫瘤之一，具有明顯的民族差異，哈薩克族和維吾爾族發(fā)病率很高，且逐年上升；臨床療效和預(yù)后差，且不同民族間療效及預(yù)后不盡相同。目前尚無明確的預(yù)測(cè)其療效的分子標(biāo)記物。本研究將對(duì)比維漢食管癌患者局部晚期血清蛋白的差異及其相關(guān)通路的分析，為今后靶基因通路研究打下基礎(chǔ)。

1.材料與方法

1.1 材料收集

收集新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年6月—2015年06月收治的臨床分期為III～I(xiàn)VA期的維吾爾族食管鱗癌患者28例、漢族食管鱗癌患者35例。分別選取性別、年齡等相匹配的維吾爾族、漢族健康體檢者14、10例作為對(duì)照組。采集接受放化療前食管鱗癌患和健康體檢者外周靜脈血5ml，所有食管癌患者完成同期放化療后，按照隨訪時(shí)間長短再次采集靜脈血5ml。所有病例均經(jīng)胃鏡活檢，組織病理確診為鱗狀細(xì)胞癌，分期為III～I(xiàn)VA期食管癌患者，一般狀況(PS)評(píng)分≤2分。所有患者預(yù)計(jì)生存期≥6個(gè)月，無主要器官功能障礙，心、肺、肝、腎功能基本正常。

1.2 方法

采用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)（iTRAQ)，該技術(shù)通過蛋白質(zhì)提取、消化，利用多種同位素試劑標(biāo)記蛋白多肽，然后用高精度質(zhì)譜儀串聯(lián)分析，篩選綜合治療前后食管癌患者及健康對(duì)照者血清蛋白質(zhì)譜表達(dá)差異。

1.3 血清差異蛋白的篩選標(biāo)準(zhǔn)

按對(duì)比要求進(jìn)行組間比較，組間比值大于1.2（表達(dá)上調(diào)）或小于0.833（表達(dá)下調(diào)），P＜0.05為差異蛋白的篩選標(biāo)準(zhǔn)。其中組間比值大于1.5為顯著表達(dá)上調(diào)，組間比值小于0.6為顯著表達(dá)下調(diào)，對(duì)篩選的差異蛋白進(jìn)一步在http∶//www.uniprot.org進(jìn)行驗(yàn)證。

2.結(jié)果

（1）83個(gè)維吾爾族局部晚期食管鱗癌對(duì)比正常對(duì)照組的差異蛋白被導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫后，將不同的蛋白質(zhì)富集到共同代謝途徑中，共得到127個(gè)差異蛋白的KEGG通路，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的KEGG通路有7個(gè)（P＜0.05）,與腫瘤有相關(guān)性的通路有1個(gè)（表1）。

（2）46個(gè)漢族局部晚期食管鱗癌對(duì)比正常對(duì)照組的差異蛋白被導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫后，將不同的蛋白質(zhì)富集到共同代謝途徑中，共得到36個(gè)差異蛋白的KEGG通路，P＜0.2的KEGG通路有13個(gè),與腫瘤有相關(guān)性的通路有3個(gè)（表2）。

表1 食管癌患者放化療前組與健康對(duì)照組比對(duì)篩選的血清差異蛋白富集的KEGG通路

3.討論

我們將維吾爾族食管癌差異表達(dá)的血清蛋白導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫后，共得到127個(gè)差異蛋白的KEGG通路，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的KEGG通路有7個(gè)（P＜0.05）,與腫瘤有相關(guān)性的通路有1個(gè)，Toll-like receptors（TLR）通路與口腔癌[1]、卵巢癌[2]、非小細(xì)胞肺癌[3]及食管癌[4]等的發(fā)生發(fā)展都有一定相關(guān)性，其中對(duì)于食管癌的研究也僅限于食管腺癌，該研究者發(fā)現(xiàn)在食管腺癌中TLR通路基因發(fā)生了周期性的突變，TLR4突變對(duì)細(xì)菌脂多糖的響應(yīng)能力下降，而這個(gè)突變可能破壞先天免疫信號(hào)，并促進(jìn)一個(gè)有利于腫瘤發(fā)生的微環(huán)境。在此研究中，食管鱗癌患者差異蛋白組蛋白H2B、脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）均參與該通路，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，通路的功能與這兩種差異蛋白生物學(xué)特性保持了一致性，可作為今后的重點(diǎn)研究。

我們又將局部晚期漢族食管鱗癌患者治差異蛋白導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫后，得到36個(gè)差異蛋白KEGG通路，由于治療前與對(duì)照組相比KEGG通路未得到明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異通路，故選擇P＜0.2的通路進(jìn)行分析，共篩選出腫瘤相關(guān)通路3個(gè)，分別為小細(xì)胞肺癌通路、趨化因子信號(hào)通路、甲狀腺癌通路。而治療后選擇P＜0.05有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異且和腫瘤相關(guān)通路有小細(xì)胞肺癌通路、趨化因子信號(hào)通路。兩組比較中小細(xì)胞肺癌通路由于特異性較強(qiáng)，故再此食管癌研究中不做過多闡述。

研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體[5]，與趨化因子結(jié)合后激活胞內(nèi)下游信號(hào)通路Ras和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶-絲裂原活化蛋白激酶(extracellular regulated protein kinasemitogen-activated protein kinases，ERK-MAPK)[6]，影響腫瘤生長和凋亡[7]。Teicher等[8]研究發(fā)現(xiàn)CXCL12與CXCR4結(jié)合后，通過激活CXCR4偶聯(lián)的G蛋白，激活磷脂酰肌醇-3激酶 (phosphatidylinositide 3-kinases，PI3-K)、MAPK和轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB(nuclear factorκB，NF-κB)信號(hào)通路，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移；趨化因子及其受體和腫瘤免疫相關(guān)，CCL21通過與CCR7結(jié)合，募集調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制抗腫瘤應(yīng)答[9]；同時(shí)通過分泌羥固醇，刺激周圍組織中成熟樹突狀細(xì)胞停止表達(dá)CCR7，使其不能前往淋巴結(jié)啟動(dòng)抗腫瘤應(yīng)答，進(jìn)而逃避免疫攻擊[10]。

趨化因子信號(hào)通路中漢族食管癌患者有血小板因子參與，且均為下調(diào)。考慮血小板因子的功能為抑制腫瘤的血管生成，故猜測(cè)如果此蛋白上調(diào)，是否可進(jìn)一步激活該通路，而影響腫瘤的生長。

由于食管癌分子蛋白可以參加數(shù)百種通路，且通路之間影響也有相互交叉，且無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的通路也并非真正意義上無效果的通路，故特異性通路需要更多的 有質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)來探索及驗(yàn)證。

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