高效液相色譜法建立頭孢地尼膠囊有關物質檢測方法

于梅

摘 要： 目的：本文通過建立頭孢地尼膠囊的有關物檢測方法，并對其進行方法學驗證。方法：色譜柱為Agela XBP C18色譜柱，柱溫為35℃，進樣量為：20ul，檢測波長為254nm，流速1.0ml/min。梯度洗脫。結果：該方法通過耐用性試驗，頭孢地尼的檢測限為0.14μg/ml，能有效的檢出雜質；專屬性較好，在酸、堿、氧、光、熱的破壞條件下各雜質均能有效分離。結論：該方法簡單、便捷、易操作，專屬性好，靈敏度高，方法可行。

關鍵詞： 頭孢地尼膠囊；有關物質；高效液相色譜

目前頭孢類藥種類比較多，頭孢地尼為第三代頭孢菌素，抗菌譜廣，對葡萄球菌和鏈球菌屬的抗菌作用較好。為了患者用藥安全，我們對有關物的檢測方法進行研究。

1.儀器與試藥

1.1儀器

儀器名稱：十萬分之一電子天平 型號：XS105DU 廠家：梅特勒

儀器名稱：高效液相色譜儀 型號：Aiglent 1200 廠家：安捷倫

1.2試藥

供試品：頭孢地尼膠囊 規格：0.1g（以C14H13N5O5S2計）；批號：171108、171109、171110。

2.方法驗證

2.1色譜條件

色譜柱為Agela XBP C18 4.6*250mm柱子；流動相A為0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調節pH值至5.0），流動相B為0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調節PH值至5.0）-乙腈-甲醇（450：320：230），流動相A、B都每1000ml中加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液0.3ml。按梯度進行洗脫，流動相A：0-2min95%，2-22min：95%-75%，22-32min為75-50%，32-37min為50-95%%，37-40min為95%。柱溫為35℃，進樣量為：20ul，檢測波長為254nm，流速1.0ml/min[1]。

2.2測定方法

取裝量差異項下的內容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于頭孢地尼37.5mg），置棕色量瓶中，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中約含頭孢地尼1.5mg的溶液，濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密量取續濾液1ml，置100ml量瓶中，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液[2]。

2.3檢測限

精密稱取頭孢地尼對照品適量，配制成1.5mg/ml的溶液，系列稀釋，進樣量為20μl，當信噪比為3：1時，測得頭孢地尼的最小檢測濃度為0.14μg/ml，供試品溶液濃度為1.5mg/ml，相差約10000倍，因為10000倍能有效的檢測有關物質。

2.4耐用性

分別考察流動相中四甲基氫氧化銨濃度變化、檢測波長變化、流動相比例、pH值變化、柱溫變化、以及采用三根色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化。

2.4.1檢測波長變化：①254nm。②260nm。③250nm。

2.4.2溫度變化：①38℃。②35℃。③45℃。

2.4.3流速變化：①1ml/min。②0.8ml/min。②1.2ml/min。

2.4.4色譜柱變化：①奧泰（兩個批號）③Wondasil。

結果：頭孢地尼主峰與相鄰雜質的分離度均大于2.0，主峰與相鄰雜質能有效的分離。因此該方法耐用性較好。

2.5溶液穩定性

精密稱取頭孢地尼膠囊138.25mg，于50ml容量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液，在室溫條件下放置12小時，分別于0h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h取樣，注入液相色譜儀，并考察頭孢地尼的相關雜質的變化。結果：頭孢地尼溶液較穩定，但其E-異構體峰面積有增大趨勢，其RSD分別為0.25%，2.98%，但是在6h內RSD分別為：0.22%，1.06%。其他雜質均無明顯變化。由此可見頭孢地尼膠囊的溶液6小時內較穩定。配制溶液時在6小時內使用。

2.6專屬性

2.6.1供試品溶液制備

精密稱取供試品適量（約相當于頭孢地尼37.5mg），置25ml量瓶中，加流動相A溶解后，稀釋至刻度，搖勻，過濾。

2.6.2酸破壞

供試品：精密稱取66.86mg，置25ml量瓶中，加流動相A溶解后，加入5ml 1mol/L鹽酸溶液，置80℃水浴加熱1.5小時后，取出放置室溫，再加入5ml 1mol/L的氫氧化鈉溶液中和，用流動相A定容至刻度。

酸堿空白：精密稱取空白混合輔料31.25mg，置25ml量瓶中，同法配制酸空白。

2.6.3堿破壞

供試品：精密稱取67.99mg，置25ml量瓶中，加流動相A溶解后，加入1mol/L 氫氧化鈉溶液0.5ml，室溫放置10分鐘后，加1mol/L 鹽酸溶液0.5ml中和，加流動相A稀釋至刻度[3]。

堿破壞空白：精密稱定空白混合輔料29.23mg，置25ml量瓶中，同法配制堿空白。

2.6.4氧化破壞

供試品：精密稱取68.55mg，置25ml量瓶中，加流動相A溶解后，加入10%雙氧水2.0ml，室溫放置30分鐘后，稀釋至刻度。

氧化空白：精密稱取空白混合輔料30.85mg，置25ml量瓶中，同法配制氧化空白溶液。

2.6.5光照破壞

供試品：精密稱取68.00mg，置25ml量瓶中，于6000 lx條件下放置30小時，加流動相A溶解后，稀釋至刻度。

2.6.6熱破壞

供試品：精密稱取67.21mg，置25ml量瓶中，置于110℃烘箱內加熱10小時后，加流動相A溶解后，并稀釋至刻度。

熱破壞空白：精密稱定空白混合輔料28.26mg，置25ml量瓶中，同法配制熱空白。

精密量取上述各專屬性破壞溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

結果：所有供試品經過酸、堿、氧化、高溫及光照破壞后，且切酸空白、堿空白、氧化空白對有關物質均不干擾，主峰與相鄰雜質的分離度均大于1.5，分離度均符合藥典要求，各雜質之間均能有效的分離，說明此方法的專屬性較好。

2.7有關物質檢查

取三批中試樣品（171108、171109、171110）按照測定方法進行有關物質進行檢查。結果：E-異構體分別為：0.07%、0.08%、0.07%；復合物A分別為：0.12%、0.14%、0.13%；雜質B分別為：0.05%、0.02%、0.03%；相對保留時間0.76處雜質分別為0.35%、0.37%、0.35%；最大單一雜質分別為：0.08%、0.09%、0.09%；總雜質分別為：0.79%、0.82%、0.84%。綜合上述檢查結果，三批樣品的有關物質均能有效的檢出。

3.討論

綜上所述，本文通過建立頭孢地尼膠囊的有關物質檢查方法，并進行方法學驗證，同時也采用經過驗證的方法進行三批中試樣品檢驗。結果有關物質均能有效的檢出。此方法簡單、便捷、靈敏度較高，方法可行[4]。

參考文獻

[1] 李揚. 頭孢地尼膠囊有關物質方法學 黑龍江科技信息 2016，（6）.

[2] 頭孢地尼有關物質分析方法的比較研究 - 中國抗生素雜志 - 2012， 37（8）.

[3] 高效液相色譜法測定頭孢地尼有關物質 - 天津藥學 - 2008， 20（6）.

[4] HPLC測定頭孢地尼的含量及有關物質 - 中國新藥雜志 - 2003， 12（2）.