精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液50R在模擬臨床使用過程中的穩定性研究

梅麗　栗鳳娟　牛瑞娟　卓盼　王軍軍

[摘要] 目的 選取該公司生產的與原研廠家的精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R），按照萬邦筆使用說明書對筆芯內精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）進行完全模擬臨床注射操作，至注射行程終點，對其初始、中間、取樣后筆芯中剩余藥液的含量與可溶性重組賴脯胰島素進行檢測，評價其在臨床使用中是否穩定和符合相關規定。方法 采用Inertsil ODS-SP色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為0.2 mol/L 硫酸鹽緩沖液-乙腈（74∶26）；檢測波長為214 nm；流速為0.8 mL/min；柱溫為40℃。模擬臨床注射操作，在指定時間點取樣檢測。結果 全部樣品各時間點取樣與剩余藥液的含量均在產品標示量的90.0% ～105.0%范圍內，可溶性重組賴脯胰島素在45.0%～55.0%范圍內，RSD（n=6）均在2.0% 以內，符合相關規定。結論 患者在臨床使用中嚴格依據筆式注射器及筆芯使用說明書進行操作，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）筆芯內重組賴脯胰島素含量與可溶性重組賴脯胰島素均未發生顯著變化，穩定性良好。

[關鍵詞] 精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）；萬邦筆；含量；可溶性賴脯胰島素；臨床使用；高效液相色譜儀

[中圖分類號] R587.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2017）12（b）-0024-03

[Abstract] Objective To evaluate whether it is steady and conforms to the related regulations in clinical use by selecting the mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection（50R） produced by our company and conducting the totally simulation clinical injection operation to the final point of injection course， and testing the content of residual liquid in cartridge and soluble recombinant lyline insulin. Methods Inertsil ODS-SP chromatographic column （250 mm×4.6 mm，5 μm）； mobile phase 0.2 mol/L；sulfate buffers-acetonitrile（74：26）； detection wavelength 214 nm； flow rate 0.8 mL/min； column temperate 40℃， and the clinical injection operation was stimulated and the samples were selected for test at the specific time point. Results The samples at various time points and content of residual liquid of all samples were in the 90.0%～105.0%， and the soluble recombinant lyline insulin was 45.0%～55.0%， and RSD（n=6） was in 2.0%， conforming to the related regulations. Conclusion The patients should conduct the operation strictly according to the pen injector and instructions， and there are no obvious changes of mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection （50R）， content of residual liquid in cartridge and soluble recombinant lyline insulin， and the stability is good.

[Key words] Mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection （50R）； Wanbang pen； Content； Soluble recombinant lyline insulin； Clinical use； High performance liquid chromatography

2型糖尿病（T2DM）是常見的一種內分泌代謝疾病，該病具有遺傳易感性，尤其在環境因素的觸發下易發病[1]。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結構的不斷變化，其發病率呈上升趨勢[2-3]。精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）含有50%的可溶性重組賴脯胰島素和50%的精蛋白鋅重組賴脯胰島素，與可溶性賴脯胰島素相比，皮下吸收速度更加迅速，滿足餐后胰島素的需要。并且魚精蛋白結合后釋放緩慢，作用時間比較長，可以替代基礎分泌[4]。林旋等人[5]的研究還發現精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）可明顯改善2型糖尿病患者血糖代謝，增強其免疫功能，減輕炎癥反應，從而降低其心血管事件的發生。張宏穎等[6]的研究結果表明精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）可以更好的控制餐后血糖，尤其是早晚餐后血糖，并且無嚴重的低血糖事件發生，具有較好的安全性。而且注射時間非常靈活，進餐即打針，給患者帶來了極大的方便。目前大量研究表明精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）（商品名：優泌樂50）在臨床治療2型糖尿病安全、方便、有效，值得臨床推廣應用[7]。所以研究精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液在臨床使用過程中的穩定性研究具有非常重要的意義。

1 儀器與試藥

儀器：島津20A高效液相色譜儀。對照品：賴脯胰島素對照品（批號：140729-200501）。參比制劑：精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）（商品名：優泌樂50，批號：C509110A）。樣品：精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）（批號：B201608501、B201608502、B201608503）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.2 mol/L硫酸鹽緩沖液-乙腈（74：26）；柱溫：40℃；流速：0.8 mL/min；檢測波長：214 nm；進樣量：20 μL。

2.2 系統適用性

取賴脯胰島素對照品適量，加0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 mL中含1 mg的溶液，放置，使A21脫氨賴脯胰島素含量為0.8%～11.0%。在上述色譜條件下，重組賴脯胰島素主峰與A21脫氨賴脯胰島素峰之間的分離度不小于3.0，重組賴脯胰島素主峰的拖尾因子不大于1.5。該色譜條件用于含量測定，按外標法以賴脯胰島素峰與A21脫氨賴脯胰島素峰面積之和計算。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取賴脯胰島素對照品適量，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1 mL中含20單位的溶液，作為對照品溶液。

2.4 檢測方法及結果

每批樣品分別取12 支，分為6組（2支/組）進行試驗。按照筆式注射器及筆芯使用說明書緩慢顛倒或滾動筆芯至規定次數，將筆芯和注射器針頭正確安裝于胰島素筆式注射器上，排出筆芯中的氣泡后，正確設置注射劑量為30 IU[d1～d9，模擬臨床中患者用法與用量，按照體重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的給藥劑量計算]，并注射出藥液，取下注射器針頭，將上述裝有筆芯的筆式注射器于室溫下避光靜置。每24 h重復上述操作，分別在d1、d3、d6、d9收集注射出的藥液至容器中，并迅速用微量移液槍快速精密吸取兩份200 μL藥液備用。按照上述方法注射至行程終點前15 IU處（預實驗測定），放置24 h，將筆式注射器及筆芯緩慢顛倒或滾動筆芯規定次數，推注藥液至行程終點，用微量移液槍從容器中快速精密吸取200 μL藥液，用于剩余藥液混勻后的檢測[1]。

取200 μL藥液，加入0. 99 mol/L鹽酸溶液6 μL，振搖使其完全澄清，用0. 01 mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1 mL中含20單位的溶液，作為含量供試品溶液。取200 μL 藥液與0.1 mol/L 200 μL Tris-鹽酸緩沖液[pH （8.2，25±1）℃]，混合，振搖，（25±1）℃放置1 h，用0.2 μm微孔濾膜濾過，取濾液，每1 mL加入0. 99 mol/L鹽酸溶液15 μL，作為可溶性賴脯胰島素供試品溶液，見表1。

3 總結與討論

該研究選取該公司生產的三批精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）和禮來公司的優泌樂50，按照使用說明書，完全模擬臨床注射操作，按照體重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的給藥劑量計算，選擇注射劑量為30 IU，并且選取了患者單次注射劑量100 μL （ 即10 IU） 作為小樣本量待測樣品溶液的體積。同時，為排除胰島素注射筆的注射精度對實驗結果的影響，采用先注射出較大體積的藥液，再用微量移液槍吸取的方式，盡量排除可能引入的系統誤差，孫雪等[8]的研究發現小樣本量法及大樣本量法檢測同批次預混注射液，得到的結果無顯著區別，并符合方法學的驗證，因此該次研究可以真實反映每只筆芯的實際含量。

該研究中的注射行程終點是依據萬邦筆的使用說明書“注射筆停止”的描述進行確定。在預試驗中考察了三批筆芯樣品的實際裝量，并檢測了注射至行程終點時殘余在筆芯中的藥液體積，依據上述數據最終確定注射至行程終點的取樣時間點，并最終選取了注射至行程終點前15 IU 處作為剩余藥液的混勻體積，以考察玻璃珠在筆芯內的運動空間減小后，樣品中的重組賴脯胰島素含量和可溶性重組賴脯胰島素是否穩定和符合規定。結果表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）在使用過程中和使用終末期含量和可溶性賴脯胰島素沒有顯著差異，并且含量和可溶性賴脯胰島素均符合質量標準要求（90.0%～105.0%與40.0%～ 55.0%），因此，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）在使用中和使用終末期可保證成分充分混勻。

由于該實驗的溫度僅是模擬臨床使用藥常見的使用和保存溫度，不能代表其他特殊溫度條件。患者在使用過程中嚴格按照使用說明書操作時可以完全保證藥品的質量。

在可溶性賴脯胰島素的檢測過程中，通過向藥液中加入tris緩沖液使部分與魚精蛋白物理吸附的可溶性重組賴脯胰島素達到解吸附的效果。混懸液中的晶體大小約為1～20 μm，0.2 μm 濾膜可將其完全濾過，從而使可溶性重組賴脯胰島素的檢測結果準確可靠。

隨著精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）在臨床中的廣泛應用，已經有不少學者研究其在臨床應用中的療效，但是對筆芯質量控制及檢測使用中的筆芯質量還沒有見報道[9-12]。該實驗模擬臨床使用精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）的操作及室溫保存條件，運用高效液相色譜法測定胰島素含量，考察其在使用過程中的變化，為臨床開啟預混胰島素注射液后正確使用和保存提供依據。

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（收稿日期：2017-09-20）