QuEChERS結合氣相色譜-串聯質譜法測定吐根藥材中38種農藥殘留

孫 菡 ，袁 浩 ，徐艷梅 ，郭一璇

（1.河北省藥品檢驗研究院，河北 石家莊 050011； 2.河北省辛集市第一中學，河北 石家莊 052300）

吐根為茜草科頭九節屬植物 Cephaelis ipecacuanha（Brot.）A.Rich.或 Cephaelis acuminata Karsten 的干燥根及根莖，主要有效成分為生物堿，《歐洲藥典》[1]《美國藥典》[2]《日本藥局方》[3]均有收載。吐根主產地為巴西，我國不產，因此沒有相關標準，相關研究也較少。其主要用于催吐、鎮咳祛痰等，我國多用于止咳類成方制劑中，如小兒化痰止咳顆粒等。吐根主要活性成分為生物堿，其中主要成分為吐根堿、吐根酚堿等異喹啉型生物堿[4]。早期，我國企業主要通過進口流浸膏進行吐根酊及含吐根類成方制劑的生產，近些年隨著需求量的增加，國內企業也開始進口吐根藥材進行生產。隨著國內需求量連年增加，野生吐根已供不應求，種植面積必然會不斷增大，但國內暫無關于農藥殘留等的相關檢測與研究，對于多用于兒童止咳類成方制劑的藥材來說風險較大。本研究中參考國家禁限用農藥名目，最終確定適宜使用氣相色譜-串聯質譜（GC-MS/MS）法測定吐根中38種農藥殘留，并參考QuEChERS方法[5-10]，確定樣品提取方法。通過制訂GC-MS/MS檢測法[11-15]，并通過科學的驗證方式，建立了快速、靈敏的農藥殘留測定方法，收集了樣品農殘數據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GCMS-TQ8040型氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀，配有電子轟擊源（EI，日本Shimadzu公司）；AE240型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；超純水儀（美國 Millipore公司）；精密移液器（德國 Eppendorf公司）。

1.2 試藥

38種農藥試劑購自農業部環境保護科研檢測所、Solution in Methanol公司及 DR.Ehrenstorfor GmbH 公司；乙腈、丙酮為GC純，醋酸為色譜純（美國默克公司）；無水硫酸鎂，無水乙酸鈉，PSA，C18，硅膠，石墨化碳黑（博納艾吉爾公司）。吐根藥材來源于河北安國中藥市場，產地為巴西和哥斯達黎加，經河北省藥品檢驗研究院中藥室段吉平主任中藥師鑒定均為正品。

2 方法與結果

2.1 分析條件

2.1.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細管色譜柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫梯度：起始溫度 50 ℃ ，保持 1 min，以25℃ /min的速率升至 125℃，再以 10℃ /min的速率升至280℃，保持10 min；進樣口溫度：200℃；流速：1 mL /min；進樣量：1 μL；進樣方式：不分流。

2.1.2 質譜條件

離子源：EI源；離子源溫度：230℃；質譜傳輸接口溫度：280℃；碰撞氣體：氬氣；監測模式：多反應監測模式（MRM），每個農藥選擇2個特征MRM，其中一個作為定量離子對，另一個作為定性離子對，其中存在異構體的品種每個異構體選擇2個特征MRM，一個作為定量離子對，另一個作為定性離子對。詳見表1。

表1 38種農藥的保留時間、優化的質譜分析參數及試驗結果

圖1 38種有機磷農藥混合標準溶液的全掃描總離子流圖

2.2 溶液制備

標準貯備液：稱取固體農藥試劑適量，精密稱定，分別用丙酮配置成質量濃度約為100 μg/mL的單一農藥成分的標準貯備液；精密量取液體農藥標準試劑適量，分別用丙酮配制成質量濃度為5～50 μg/mL的單一農藥成分的標準貯備液，儲藏于-18℃冰箱中。精密量取標準貯備液，加丙酮配制成高、中、低3個質量濃度的38種農藥混合標準溶液。取高濃度混合標準溶液，在scan模式下測定總離子流圖(見圖1)。

供試品溶液：取藥材樣品，粉碎，過100目篩（樣品有一定毒性，易引起過敏，注意防護），取樣品3 g，精密稱定，加乙腈15 mL，浸泡30 min，勻漿，加入無水硫酸鎂與無水乙酸鈉的混合粉末（4∶1）5 g，搖勻，再置振蕩器上劇烈振搖（350次/分）3 min，于冰浴中冷卻10 min，離心（4 000 r/min）5 min，取上清液 9 mL，置已預先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管（無水硫酸鎂200 mg，PSA 200 mg，C18200 mg）中，渦旋，充分混勻，再置振蕩器上劇烈振搖（350 次 /分）5 min，離心（4 000 r/min）5 min，精密吸取上清液5 mL，氮氣吹至近干，用丙酮溶解并定容至1 mL，混勻。

空白樣品基質溶液：取空白藥材樣品，按供試品溶液制備方法制備空白基質溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：取系列質量濃度的38種農藥標準溶液加入空白基質，按擬訂色譜條件進樣分析，以質量濃度（μg/L）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線。結果表明，在選定范圍內兩者線性關系良好（r≥0.995）。

回收率試驗：分別取空白吐根藥材3 g，按照38個農藥品種的線性數據，以線性低點2倍，5倍，10倍的濃度折算加入量，每個點加入2份樣品，按擬訂方法進行試驗，計算38種農藥回收率。結果見表1。

精密度試驗：因樣品均未檢出上述農藥成分，因此使用回收率中加標回收數據作為連續測定數據，結果的RSD≤9.6%（見表 1）。

檢出限測定：以回收率試驗測定方法制備測定溶液進行試驗，以信噪比＝3確定方法的檢出限，38種農藥的檢出限范圍為 0.2 ～ 5.2 μg/kg（見表 1）。

2.4 樣品檢測

對7批次的吐根藥材按擬訂方法進行檢測，結果并未檢出上述農藥殘留。經與藥材提供方進行溝通發現，本次收集到的樣品以野生吐根為主，這應該是農藥殘留較少的主要原因。

3 討論

3.1 提取方法選擇

提取方法的選擇是殘留測定的重要步驟，方法簡便、效率高、凈化效果好等都是需要考慮的內容。本研究中參考近些年發展起來的QuEChERS農藥殘留測定方法，并根據自有設備對樣品提取方法進行研究。樣品提取中采用勻漿法替代中藥提取中常用的超聲法。此法簡便快捷，提取效率高，能有效減少試驗時間，但主要針對蔬菜、水果等含水量較高的樣品。而中藥材多為水分低于10%的干物質，提取中不利于目標物的游離，因此試驗中考慮加水浸泡使植物細胞膨脹，以提高提取效率。

3.2 凈化吸附劑選擇

選擇凈化吸附劑時考慮到樣品與待測成分的性質。對PSA、C18、氧化鋁、硅膠、弗羅里硅土等進行了比較，PSA主要用于去除糖類、酚類、有機酸、脂肪酸，并對親脂性色素有一定吸附作用，C18是重要的凈化劑，兩者實際應用較廣，與中性氧化鋁和弗羅里硅土相比對回收的影響更小，但是對色素的凈化作用弱；石墨化碳黑可去除色素等物質，但同時會導致回收率下降。考慮到吐根藥材色素含量低，不需要增加脫色劑，為保證回收率并兼顧溶液凈化效果，經過比對試驗，選擇無水硫酸鎂，PSA，C18各200 mg作為凈化吸附劑。

3.3 應用價值

雖然本試驗中的樣品均未檢出相應農藥殘留，但研究中建立的測定吐根中38種農藥殘留的GC-MS/MS法，操作快捷簡便、靈敏可靠，大大縮短了試驗室檢測時間，可用于將來吐根種植品上市后的農藥殘留檢測與數據收集工作。

參考文獻：

[1] European Pharmacopoeia Commission.EP7[M].Strasbourg：European Directorate Health Care，2010：1155-1156.

[2] The United States Pharmacopeial Convention.USP32-NF27[M].USA PharmacopoeiaRockville：The United States Pharmacopeial Convention，2009：2682.

[3] The Japanese Pharmacopoeia.JP15[M].Tokyo：Ministry of Health，Labour and Welfare，2006：1303.

[4] 孫 磊，肖宏華，金宏宇.吐根的生藥鑒定與薄層色譜鑒別[J].中國藥品標準，2012，13（5）：351-353.

[5] 孔令軍，張婭婷，谷令彪，等.中藥材農藥殘留的研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2015，21（21）：231-234.

[6] 李家春，伍靜玲，秦建平，等.基于Qu ECh ERS法-超高效液相色譜-串聯質譜法的5種中藥材中35種有機磷農藥殘留量的快速分析[J].藥物分析雜志，2016，36（1）：122-128.

[7] 陳曉水，邊照陽，楊 飛，等.對比3種不同的QuEChERS前處理方式在氣相色譜法-串聯質譜檢測分析煙草中上百種農藥殘留中的應用[J].色譜，2013，31（11）：1116-1128.

[8] 李 蓉，儲大可，張朋杰，等 .QuEChERS/HPLC-MS/MS法測定黃瓜、菜心、葡萄、香蕉中127種農藥殘留[J].分析測試學報，2015，34（5）：502-511.

[9] 徐 娟，陳 捷，王 嵐，等.QuEChERS提取與高效液相色譜-電噴霧電離串聯質譜聯用法檢測果蔬中的230中農藥殘留[J].分析測試學報，2013，32（3）：293-301.

[10] 王連珠，周 昱，黃小燕，等.基于 QuEChERS提取方法優化的液相色譜-串聯質譜法測定蔬菜中51種氨基甲酸酯類農藥殘留[J].色譜，2013，31（12）：1167-1175.

[11] Anastassiades M，Lehotay SJ，Stajnbaher D，et al.Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and ″dispersive solid-phase extraction″for thedetermination of pesticide residues in produce[J].J AOAC Int， 2003（86）：412-431.

[12] 田紹瓊，毛秀紅，苗 水，等.氣相色譜-串聯質譜法測定人參和黃芪中 7 種毒殺芬殘留量[J].色譜，2012，30（1）：14-20.

[13] 苗 水，郟征偉，毛秀紅，等.氣相色譜串聯質譜法同時測定黃芪中 238 種農藥殘留[J].中國藥學雜志，2012，47（4）：303-310.

[14] 譚福能，何媛媛.固相萃取-氣相色譜法檢測三七中有機磷農藥殘留[J].文山學院學報，2014，27（6）：1-3.

[15] 李麗莉，邱明明，何頌華，等.液相色譜-串聯質譜法測定黃芪中 119 中農藥殘留[J].藥物分析雜志，2012，32（3）：424-433.