利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬對多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗患者外周血T細胞亞群及氧化應激水平的影響*

冷少華 王延洲 趙小蘭

(陸軍軍醫大學附屬西南醫院，1.健康管理中心；2.婦產科，重慶 400038)

多囊卵巢綜合征(PCOS)是育齡期婦女常見的一種代謝異常、神經內分泌紊亂的綜合性疾病，其臨床癥狀主要包括：月經稀發或閉經、多毛、肥胖、長期不排卵及高雄激素血癥等[1-3]。胰島素抵抗(IR)主要是指正常水平的胰島素促進葡萄糖利用能力和攝取能力下降，機體各器官、組織代償性分泌胰島素以維持機體血糖穩定的代謝狀態[4]。近年來研究表明PCOS與IR關系緊密，且認為IR和高胰島素血癥是PCOS的決定性因素[5-6]。臨床上積極尋求有效的治療方法是近年來臨床研究熱點。本文研究旨在探討利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬對多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗患者外周血T細胞亞群及氧化應激水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選自我院于2014年12月～2016年12月期間收治的PCOS伴IR患者92例。按照隨機表法分為觀察組46例與對照組46例。觀察組46例中，年齡20～39歲、平均年齡(27.94±3.56)歲，平均體重指數(BMI)(22.64±1.87)kg/m2；對照組46例中，年齡21～40歲、平均年齡(27.56±3.71)歲，平均BMI(22.59±2.03)kg/m2。診斷標準：PCOS診斷依據《婦產科學》[7]標準：月經稀發或閉經及以下兩個標準中的一條：B超卵巢呈多囊性改變，臨床或者生化的高雄激素血癥；IR診斷標準：按照空腹血糖(FPG)和胰島素測定值，計算出穩態模型(HOMA)下的胰島素抵抗指數HOMA-Ir=FPG×空腹胰島素/22.5，按照國際通用標準HOMA-IR≥2.77為胰島素抵抗。入組標準及排除標準： 入組標準：①符合PCOS和IR診斷標準者。②經醫院倫理委員會許可。③簽訂知情同意書者。排除標準：①由高泌乳素血癥、下丘腦性閉經或垂體、先天性腎上腺皮質增生、甲狀腺功能等造成排卵障礙者。②合并肺、腎、肝等功能嚴重異常者。③精神疾病者。兩組一般資料具有可比性。

1.2 治療方法

1.2.1 對照組 口服枸櫞酸氯米芬膠囊(生產廠家：上海衡山藥業有限公司；批準文號：國藥準字H31021107)50 mg/次，每日1次，連續應用5 d；觀察組：在對照組基礎上皮下注射利拉魯肽(生產廠家：諾和諾德中國制藥有限公司；批準文號：注冊證號S20110046)0.6 mg/次，每日1次，連續應用5 d。兩組療程均為3個月經周期。

1.2.2 療效評價標準 ①顯效：患者癥狀、體征消失或者明顯改善，以及患者血清激素水平恢復正?；蛘呋菊！＂谟行В夯颊甙Y狀、體征改善，以及患者血清激素水平改善。③無效：患者癥狀、體征及血清激素水平無改善?？傆行?(顯效例數+有效例數)/總例數×100%。

1.2.3 觀察指標 月經干凈后第三天 ①觀察兩組治療前和治療后BMI和卵巢體積變化。②觀察兩組治療前和治療后FINS和HOMA-IR變化。③觀察兩組治療前和治療后激素水平變化，分別于治療前后抽取3 mL外周靜脈血，以離心半徑15 cm，轉速為每分鐘3000轉，離心10～12 min，分離血清，于-20℃下保存待測。④觀察兩組治療前和治療后外周血T淋巴細胞亞群水平變化，分別于治療前后采集3 mL外周靜脈血，將其放置于EDTA抗凝管中，且依次加入10 μL CD3+、CD4+、CD8+抗體，放置于室溫條件下避光孵育30 min，然后加入溶血素200 μL于每管中，于室溫條件下避光放置15 min，裂解紅細胞。觀察溶液澄清透明后，加入1 mL的預冷PBS溶液中，再放置于室溫條件下以離心半徑15 cm、3000 r/min、離心12 min，分離血清，然后再滴加100 μL的1%多聚甲醛溶液中固定，測定外周血T淋巴細胞亞群，應用美國BD公司的流式細胞儀及配套試劑。⑤觀察兩組治療前和治療后氧化應激指標水平變化，分別于治療前后抽取3 mL外周靜脈血，以離心半徑15 cm，轉速為每分鐘3000轉，離心10～12 min，分離血漿，于-20℃下保存待測。

1.3 統計學分析 采用SPSS19.0軟件分析，針對本研究數據中計量資料以t檢驗，計數資料以2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者療效比較 觀察組治療總有效率(82.61%)高于對照組(60.87%)(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者療效比較[n,(×10-2)]Table 1 The curative effect

2.2 兩組患者治療前后BMI和卵巢體積變化比較 兩組治療前BMI和卵巢體積比較無統計學差異(P>0.05)；兩組治療后BMI和卵巢體積降低(觀察組：t=12.7845、21.4211，對照組：t=6.8848、9.7507，P<0.05)；觀察組治療后BMI和卵巢體積低于對照組(t=6.5840、11.5294，P<0.05)，見表2。

2.3 兩組患者治療前后血清激素水平變化比較 兩組治療前LH、FSH和T水平比較無統計學差異(t=0.3174、0.5466、0.4095，P>0.05)；兩組治療后LH、FSH和T水平降低(觀察組：t=12.0924、21.4211、12.4576，對照組：t=6.2643、3.6756、5.8940，P<0.05)；觀察組治療后LH、FSH和T水平低于對照組(t=5.8437、7.0905、7.0161，P<0.05)，見表3。

Table2ComparisonofBMIandovarianvolumechangesbeforeandaftertreatment

組別nBMI(kg/m2)卵巢體積(mm3)觀察組46 治療前22.64±1.879.56±0.87 治療后18.56±1.09①②6.13±0.65①②對照組46 治療前22.59±2.039.48±0.86 治療后20.17±1.25①7.83±0.76①

注：與本組治療前比較，①P<0.05；與對照組治療后比較，②P<0.05。

Table3Comparisonofserumhormonelevelsbeforeandaftertreatment

組別nLH(mU/mL)FSH(mU/mL)T(nmol/mL)觀察組46 治療前12.89±2.145.21±0.982.54±0.56 治療后8.35±1.38①②4.03±0.56①②1.39±0.28①②對照組46 治療前12.75±2.095.32±0.952.49±0.61 治療后10.25±1.72①4.69±0.67①1.87±0.37①

注：與本組治療前比較，①P<0.05；與對照組治療后比較，②P<0.05。

2.4 兩組患者治療前后FINS和HOMA-IR變化比較 兩組治療前FINS和HOMA-IR比較無統計學差異(t=0.4052、0.1843，P>0.05)。兩組治療后FINS和HOMA-IR降低(觀察組：t=19.0150、13.0330，對照組：t=11.2612、6.1503，P<0.05)；觀察組治療后FINS和HOMA-IR低于對照組(t=7.6955、7.8588，P<0.05)，見表4。

Table4ComparisonofFINSandHOMA-IRbeforeandaftertreatment

組別nFINS(μIU/L)HOMA-IR觀察組46 治療前15.73±1.093.69±0.54 治療后11.82±0.87①②2.41±0.39①②對照組46 治療前15.64±1.043.71±0.50 治療后13.29±0.96①3.10±0.45①

注：與本組治療前比較，①P<0.05；與對照組治療后比較，②P<0.05。

2.5 兩組患者治療前后外周血T淋巴細胞亞群變化比較 兩組治療前CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比較無統計學差異(t=1.9718、0.2118、0.4081，P>0.05)；兩組治療后CD3+和CD4+/CD8+降低(觀察組：t=15.2924、8.0866，對照組：t=7.5792、4.5340，P<0.05)；觀察組治療后CD3+和CD4+/CD8+低于對照組(t=7.7320、5.9132，P<0.05)，見表5。

Table5ChangesofTlymphocytesubsetsinperipheralbloodbeforeandaftertreatment

組別nCD3+(×10-2)CD4+(×10-2)CD4+/CD8+觀察組46 治療前72.39±1.4230.27±4.351.28±0.24 治療后68.27±1.1529.84±3.660.97±0.10①②對照組46 治療前71.84±1.2530.45±3.781.30±0.23 治療后70.03±1.0329.13±4.131.12±0.14①

注：與本組治療前比較，①P<0.05；與對照組治療后比較②P<0.05。

2.6 兩組患者治療前后氧化應激指標變化比較 兩組治療前MDA和SOD水平比較無統計學差異(P>0.05)；兩組治療后MDA降低而SOD增加(觀察組：t=16.9844、12.0362，對照組：t=7.8818、5.4794，P<0.05)；觀察組治療后MDA低于對照組而SOD高于對照組(t=9.3624、6.6042，P<0.05)，見表6。

2.7 兩組不良反應比較 觀察組治療期間出現8例不良反應，發生率為17.39%，其中包括胃腸道反應3例、皮疹3例、2例頭痛；對照組治療期間出現5例不良反應，發生率為10.87%，其中包括胃腸道反應3例、2例頭痛。兩組不良反應發生率比較無統計學差異(X2=0.8062，P>0.05)。

Table6Comparisonofoxidativestressbeforeandaftertreatment

組別nMDA(U/L)SOD(μg/mL)觀察組46 治療前22.69±2.3710.45±2.17 治療后15.13±1.87①②17.94±3.62①②對照組46 治療前22.54±2.3410.71±2.31 治療后18.94±2.03①13.56±2.67①

注：與本組治療前比較，①P<0.05；與對照組治療后比較，②P<0.05。

3 討論

枸櫞酸氯米芬是常用于治療PCOS的一種藥物，主要通過提高黃體功能促進排卵，糾正PCOS患者內分泌功能障礙，研究報道表明，部分PCOS患者對克羅米芬促排卵效果不佳，認為其原因可能為存在胰島素抵抗[8-9]。利拉魯肽是新一類降糖藥物胰高血糖素樣肽-1類似物，近年來已成為2型糖尿病患者調整血脂、血壓和血糖相關研究的一個新焦點[10]。藥理研究表明，利拉魯肽可通過促進胰島β細胞的新生和分泌，且能夠延緩胰島β細胞凋亡的速度，改善胰島素抵抗，且能夠延緩胃排空，抑制胰高血糖的分泌，減少進食，已廣泛應用于臨床[11-12]。本研究結果表明，觀察組治療總有效率高于對照組，說明利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬可提高療效；觀察組治療后LH、FSH和T水平低于對照組，說明利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬可可降低激素水平；觀察組治療后FINS和HOMA-IR低于對照組，說明利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬可改善患者胰島功能；兩組不良反應發生率比較無統計學差異，說明利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬用藥安全性良好。

正常免疫應答過程主要依賴于各種免疫細胞，尤其是各T淋巴細胞亞群間的相互制約與相互協調。T淋巴細胞輔助受體CD4、CD8不能同時表達成熟的T淋巴細胞表面，因此，應用CD4單克隆抗體與CD8單克隆抗體可將外周血中或者外周淋巴器官中的T淋巴細胞分為2個主要亞群CD4+和CD8+[14-15]。成熟的T淋巴細胞表面均可表達CD3分子。外周血T淋巴細胞亞群在數量上的協調比例，尤其是CD4+/CD8+的比值是反映細胞免疫平衡的重要敏感指標，從而有利于反映機體免疫反映的調節能力。近年來研究表明，PCOS伴IR患者體內免疫活躍，認為可能與自身免疫相關，且其體內存在免疫異常，表現為細胞免疫增強[16]。本研究結果表明，觀察組治療后CD3+和CD4+/CD8+低于對照組，說明利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬可改善患者細胞免疫功能。

氧化應激反應增強時PCOS重要的一個病理過程，其中血中大量氧化應激物質能夠加重卵巢功能損傷，從而致使PCOS體內激素水平紊亂加重。PCOS患者體內氧化應激反應程度增加會使得卵泡細胞中鈣離子負荷促進細胞凋亡的加重。近年來研究認為PCOS氧化應激狀態可能與IR密切相關[17]。本研究結果表明，觀察組治療后MDA低于對照組而SOD高于對照組，說明利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬可改善患者氧化應激反應。

4 結論

利拉魯肽聯合枸櫞酸氯米芬對多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗患者療效明顯，可顯著改善患者外周血T淋巴細胞亞群和氧化應激，具有重要的臨床應用價值。

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