熱休克蛋白90在胃癌患者外周血中的表達及其臨床意義

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(1.雅安市人民醫(yī)院腫瘤科，四川 雅安 625000；2.雅安市人民醫(yī)院消化內(nèi)科)

胃癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率排名均位于前列，不僅增加了家庭經(jīng)濟和國家醫(yī)療資源負擔，更給患者身心造成了嚴重創(chuàng)傷，嚴重威脅著無數(shù)人的生命[1]。胃癌死亡率非常高，主要原因在于胃癌臨床表現(xiàn)比較滯后，一般出現(xiàn)臨床特征時已達到中晚期，并且內(nèi)鏡檢查、活檢等胃癌診斷方法也很難真正做到普及，這都導(dǎo)致胃癌很難能夠被及時發(fā)現(xiàn)，極大耽誤了胃癌患者最佳治療時間[2]。大量臨床實踐證明，血清標志物不僅能夠有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤，而且還與浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性腫瘤生物學行為相關(guān)，能夠?qū)︻A(yù)后情況進行評價[3]。因此，本文旨在探討血清熱休克蛋白90(heat shock protein 90, HSP90)對胃癌診斷的價值，并分析其與腫瘤直徑、臨床分期、浸潤深度、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)等臨床病理特征的相關(guān)性，評估其對腫瘤生物學行為的評價意義。

1 資料與方法

1.1研究對象選取2014年1月至2017年1月期間我院收治的70例胃癌患者(胃癌組)和70名健康志愿者(對照組)作為研究對象，所有患者均經(jīng)病理學檢查確診為胃癌。胃癌組男性43例，女性27例，中位數(shù)年齡61歲(29～76歲)；對照組男性45例，女性25例，中位數(shù)年齡59歲(27～78歲)，兩組性別比和年齡均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。本研究已獲得所有胃癌患者和志愿者的知情同意。

1.2方法

1.2.1 血樣采集與檢測 所有研究對象均于清晨空腹抽取靜脈血，低溫高速離心機4 ℃低溫離心，取上層血清保存于-80 ℃冰箱中備用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測血清中HSP90含量，試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司提供，嚴格按照試劑盒進行檢測，大致操作步驟如下：將血清樣本從冰箱拿出后平衡至室溫，酶標板各孔對應(yīng)加入血清或標準品，恒溫孵育箱中37 ℃避光孵育1.5 h，傾去液體后加入生物素化抗體工作液，再次孵育1 h，洗滌后甩板，加入酶結(jié)合物工作液，繼續(xù)孵育0.5 h，再次洗滌后加入底物溶液，待標準品出現(xiàn)明顯梯度后加入終止液，測定吸光度并計算HSP90含量。

1.2.2 統(tǒng)計學處理 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計，所有數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)M (P25～P75 )表示，HSP90的胃癌診斷價值通過采用受試者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲線進行評價，并記錄約登指數(shù)(Youden index，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，P<0.05代表有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié) 果

2.1各組血清熱休克蛋白90含量的比較

與對照組比較，胃癌組血清中HSP90含量顯著升高，中位數(shù)為對照組的1.75倍，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，結(jié)果見表1。

表1 各組血清熱休克蛋白90含量的比較[M(P25～P75)]

2.2血清熱休克蛋白90對胃癌的診斷價值分析本研究采用ROC曲線評價血清HSP90對胃癌的臨床診斷價值，結(jié)果表明，血清HSP90診斷胃癌的ROC曲線下面積為0.754，95%置信區(qū)間為(0.673,0.835)，以約登指數(shù)作為準確度評價指標，當約登指數(shù)取最大值0.429時，靈敏度和特異性分別為80.00%和62.86%，ROC曲線見圖1。

圖1 血清HSP90診斷胃癌的ROC曲線分析

2.3血清熱休克蛋白90表達與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性分析本研究分析結(jié)果表明，胃癌患者血清HSP90在不同性別、年齡、腫瘤直徑、臨床分期、浸潤深度、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等分組中均無顯著性差異(P>0.05)，結(jié)果見表2。

表2 血清HSP90表達與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性分析

3 討 論

HSP90是指機體在應(yīng)激原的刺激下，細胞內(nèi)快速合成的一類蛋白質(zhì)，廣泛存在于原核生物和真核生物中，有研究結(jié)果顯示HSP90在腫瘤細胞中表達顯著高于正常細胞的2～10倍[4]。在正常情況下，HSP90表達相對較低，但當細胞處于應(yīng)激狀態(tài)時HSP90表達會升高數(shù)倍[5]。HSP90具有高度保守性，屬于ATP依賴型的分子伴侶，是細胞內(nèi)活躍程度最高的分子伴侶之一，介導(dǎo)蛋白質(zhì)折疊、裝配和轉(zhuǎn)運等過程，對于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象和活性、調(diào)控蛋白降解等過程有著重要意義[6]。HSP90作為細胞內(nèi)重要的調(diào)節(jié)蛋白，是眾多細胞信號通路的關(guān)鍵組成蛋白，廣泛參與細胞增殖、機體發(fā)育、免疫調(diào)控等生理過程，對于維持機體正常運轉(zhuǎn)意義重大[7]。

隨著研究的不斷深入，研究發(fā)現(xiàn)HSP90與腫瘤細胞凋亡、腫瘤免疫、腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，HSP90主要負責調(diào)節(jié)腫瘤細胞所需周期蛋白、激酶等蛋白的活性，介導(dǎo)相關(guān)癌蛋白構(gòu)象成熟、轉(zhuǎn)運和轉(zhuǎn)化等過程[8]。Tas等[9]研究表明，黑色素瘤患者血清HSP90含量顯著高于健康人群，具有一定的臨床診斷價值，但HSP90表達與患者年齡、性別、病變部位、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分級以及化療效應(yīng)均無顯著相關(guān)性。Sun等[10]在肝細胞癌血清標志物篩選中發(fā)現(xiàn)，相對于正常人群，肝細胞癌患者血清HSP90含量異常升高超過6倍，該結(jié)果提示血清HSP90很可能成為肝細胞癌診斷的血清學指標。Wang等[11]對322份胃癌組織樣本進行研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中HSP90陽性率為69.6%， HSP90表達與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分級等顯著相關(guān)，并且可作為無復(fù)發(fā)生存期和總生存期的獨立預(yù)后因素，表明腫瘤組織HSP90對于胃癌診斷、化療效果評估、預(yù)后判斷等具有參考價值。綜上所述，血清HSP90可能對于胃癌診斷、腫瘤惡性生物學行為評價等具有重要臨床參考價值，并且可行性較高。

本研究結(jié)果表明，胃癌患者血清HSP90含量顯著高于健康人群。ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清HSP90區(qū)別健康人群和胃癌患者的曲線下面積0.754，表明血清HSP90具有中等胃癌診斷價值。準確度評價指標約登指數(shù)最大值為0.429，此時對應(yīng)的靈敏度和特異性分別為80.00%和62.86%，表明血清HSP90用于診斷胃癌具有較高的靈敏度，不易發(fā)生漏診的情況，但特異性較低，易導(dǎo)致誤診的發(fā)生，因此，在實際臨床工作中，應(yīng)根據(jù)具體情況對診斷結(jié)果進行分析。本研究還對血清HSP90表達與性別、年齡、腫瘤直徑、臨床分期、浸潤深度、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的關(guān)系進行了分析，結(jié)果表明血清HSP90與臨床分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為無顯著相關(guān)性，對于評價胃癌患者腫瘤生物學行為無重要價值。HSP90具有提高細胞生存能力，維持蛋白穩(wěn)定性功能，在胃癌的發(fā)育、生長、分化及基因轉(zhuǎn)錄過程中均起到十分重要的作用[12]。在各種應(yīng)急因素刺激下，HSP基因可被異常激活，HSP蛋白表達量增加，有效激活細胞自我防御功能，維持細胞穩(wěn)定，避免細胞調(diào)查，且可有效保護胃癌細胞面授凋亡因素刺激，進而促進胃癌的發(fā)生及發(fā)展[13]。

綜述所述，血清HSP90表達與胃癌診斷關(guān)系較大，但與臨床病理特征、胃癌患者化療效果評價、預(yù)后判斷等的相關(guān)性不大，有待進一步探討。

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