白芍總苷與哌替啶聯(lián)合使用的鎮(zhèn)痛耐藥性研究

尚曉宇 張楠 郭愛鑫 孫艷濤

【摘 要】目的：研究白芍總苷（TGP）與哌替啶（PD）聯(lián)合使用的鎮(zhèn)痛耐藥性效果。方法：將60只小鼠隨機(jī)平均分為對(duì)照組、TGP1組（3mg/ml）、TGP2組（6mg/ml）、TGP3組（9mg/ml）、PD組（3mg/ml）和聯(lián)合注射組（TGP6mg/ml、哌替啶3mg/ml）。每只小鼠腹腔注射藥物1.0mL藥物。測(cè)量給藥前及給藥后不同時(shí)間（10、20、30、60min）小鼠的痛閾值。對(duì)上述對(duì)照組、TGP1組、TGP2組、TGP3組和聯(lián)合注射組小鼠在連續(xù)8天給藥并每天測(cè)痛，觀察藥物鎮(zhèn)痛作用及耐受性。繼續(xù)給藥一天后，立即注射納洛酮，觀察小鼠的戒斷反應(yīng)。結(jié)果：白芍總苷與閾下劑量哌替啶配伍使用可顯著提高小鼠痛閾。結(jié)論：白芍總苷與閾下劑量哌替啶合用可以增強(qiáng)鎮(zhèn)痛效果，從而減少哌替啶的用量，具有一定的耐受性但不產(chǎn)生依賴性，降低其藥物依賴性的發(fā)生率。

【關(guān)鍵詞】白芍總苷；鎮(zhèn)痛；耐受性；依賴性；哌替啶

[Abstract] Objective：To study the effect of analgesic drug resistance combined with TGP and pethidine （PD）.Methods The 60 mice were randomly divided into control group、TGP1 group （3mg/ml），TGP2 group （6mg/ml），TGP3 group （9mg/ml），PD group（3mg/ml）and combined injection group （TGP6mg/ml、PD3mg/ml）.Intraperitoneal injection of 1.2mL of drugs per mouse .The pain threshold of the mice was measured before and after the administration of the drug （10，20，30，60min）.The mice in the control group，TGP1 group，TGP2 group，TGP3 group and the combined injection group were given the drug for 8 consecutive days and the pain was measured daily to observe the drug analgesic effect and tolerance.One day after the drug was administered，naloxone was injected immediately to observe the withdrawal reaction of the mice.Results The combined use of total glucoside of paeoniae alba and subthreshold dose pethidine can significantly improve the pain threshold of mice.Conclusion Radix paeoniae alba total glycosides and subthreshold dose of dolantin share can enhance the analgesic effect，thus reducing the amount of pethidine，have certain tolerance but not become dependent，reduce the incidence of drug dependence.

[Key words] Radix paeoniae alba total glycosides； analgesic； tolerance； dependency； pethidine.

【中圖分類號(hào)】R730.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）04--01

癌癥會(huì)給患者帶來難以忍受的痛苦，尤其癌癥晚期病灶較大，不斷向附近組織器官進(jìn)行浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，癌癥疼痛的發(fā)生率大大提升。癌癥性疼痛多為持續(xù)性疼痛，并隨著病灶的增大而不斷加劇，嚴(yán)重影響患者休息、睡眠，給患者帶來極大的身心痛苦[1]。因此，解除癌癥疼痛的方法主要是鎮(zhèn)痛藥物的使用。目前臨床上使用的鎮(zhèn)痛藥主要有兩類：一類是以嗎啡為代表的麻醉性鎮(zhèn)痛藥，另一類是以阿司匹林為代表的非甾體抗炎藥。前者效能較強(qiáng)，但易產(chǎn)生耐受性和依賴性，并伴有機(jī)體免疫功能的降低。后者雖無明顯依賴性，但鎮(zhèn)痛作用弱，不良反應(yīng)較多。因此這兩類藥的應(yīng)用均收到了限制。

白芍屬于毛茛科植物芍藥的一種干燥根，有效成分為白芍總苷，起到保護(hù)肝臟、抗炎等作用[2]。研究顯示，TGP參與了眾多的生理功能的調(diào)節(jié)，白芍總苷的藥理及臨床研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷具有多途徑抑制自身免疫反應(yīng)，對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有確切療效等作用。同時(shí)，有研究表明，靜脈滴注白芍總苷粉針劑可顯著減少醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，揭示具有鎮(zhèn)痛作用[3]。但尚未見進(jìn)一步的研究。因此，我們擬進(jìn)一步觀察白芍總苷的鎮(zhèn)痛作用，并且將白芍總苷與閾下劑量哌替啶合用，觀察二者合用后的鎮(zhèn)痛效果，為研制副作用少的中西醫(yī)結(jié)合的鎮(zhèn)痛復(fù)方制劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑、藥物與儀器 白芍總苷（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供，批號(hào)：180101）臨用前生理鹽水稀釋，鹽酸哌替啶（青海制藥廠有限公司產(chǎn)品）用生理鹽水稀釋，鹽酸納洛酮（naloxone，北京華素制藥股份有限公司產(chǎn)品）臨用前生理鹽水稀釋，生理鹽水（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供），HH—4型快速恒溫水浴箱。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康雌性小鼠60只，體重（20±2）g，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)過程中室溫控制在（22±1）℃。60只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、TGP1（3mg/ml）、TGP2（6mg/ml）、TGP3（9mg/ml）、PD組（3mg/ml）和聯(lián)合注射組（TGP6mg/ml、PD3mg/ml），每組動(dòng)物10只。腹腔注射給藥，每只小鼠每天不同濃度給藥1.0ml。分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)和檢測(cè)，共9天。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 參照藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)熱板法[4]，控制恒溫水浴裝置的水溫在（55±0.5）℃，將小鼠置于熱板上，記錄至舔足時(shí)間作為痛閾，基礎(chǔ)痛閾要求在10～30s之間，以60s作為高痛閾極限，超過60s者棄之不用。室溫（22±1）℃。給藥前測(cè)2次痛閾（間隔10min），取平均值作為小鼠基礎(chǔ)痛閾。給藥后分別在10、20、30、60min測(cè)小鼠痛閾值一次并記錄。

1.4 藥物耐受性測(cè)試 選用上述實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組、TGP1組、TGP2組、TGP3組、PD組和聯(lián)合注射組小鼠，按照上述方法連續(xù)8天以同樣的方式給藥并測(cè)定各組小鼠痛閾，記錄每天各組小鼠在不同時(shí)間的陰性后足數(shù)。

1.5 藥物依賴性測(cè)試 第9天給藥立即注射納洛酮，觀察小鼠的戒斷反應(yīng)，如全身震顫、搔耳、舔后足。10min內(nèi)上述反應(yīng)出現(xiàn)大于3次的即為陽性小鼠，記錄各組陽性小鼠個(gè)數(shù)[2]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 在熱板法痛閾的測(cè)試中，采用以表示，原始數(shù)據(jù)先做方差齊性檢驗(yàn)，在依賴性測(cè)試中，數(shù)據(jù)用10 min內(nèi)出現(xiàn)的陽性小鼠個(gè)數(shù)表示。計(jì)數(shù)資料組之間比較采用χ?檢驗(yàn)（確切概率法）；計(jì)量資料采用方差分析，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 藥物鎮(zhèn)痛作用 表1可以看出，白芍總苷與哌替啶本身都有一定的鎮(zhèn)痛作用，但合用后可顯著提高小鼠的痛閾，其鎮(zhèn)痛效應(yīng)顯著強(qiáng)于單獨(dú)用藥組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且TGP質(zhì)量濃度從3mg/kg遞增至9mg/kg，其鎮(zhèn)痛效果逐漸升高，說明TGP的鎮(zhèn)痛效果具有明顯的劑量依賴性。但是TGP1組與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

PD組的鎮(zhèn)痛作用明顯高于TGP組，其中TGP2組中，各段間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），聯(lián)合注射組鎮(zhèn)痛效果高于PD組（P<0.05，表1）。

與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與PD組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.2 藥物耐受性 連續(xù)8天給藥后，各組差異較顯著，TGP2組、TGP3組、PD組和聯(lián)合注射組的鎮(zhèn)痛效果均有不同程度的降低（圖1）。運(yùn)用重復(fù)數(shù)據(jù)方差分析得出不同時(shí)間水平鎮(zhèn)痛效果呈下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）。聯(lián)合使用組優(yōu)于PD組和TGP2組鎮(zhèn)痛效果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.00），提示TGP和PD具有協(xié)同鎮(zhèn)痛作用。第三天開始，各組出現(xiàn)耐受現(xiàn)象，聯(lián)合注射組與PD組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第8天聯(lián)合注射組效果顯著高于PD組（P=0.00），提示聯(lián)合注射組下降幅度要小于單獨(dú)用藥。

2.3 藥物依賴性 第9天給藥后，立即注射鹽酸納洛酮，PD組的戒斷反應(yīng)陽性體征小鼠數(shù)目顯著高于對(duì)照組，且PD組的戒斷反應(yīng)陽性體征小鼠數(shù)目高于聯(lián)合使用組（P<0.05），而TGP2組、TGP3組與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05，表2）。提示TGP本身不具有依賴性，并且對(duì)PD的依賴性有改善作用。

3 討論

TGP是毛茛科植物芍藥的一種干燥根的有效成分，參與了體內(nèi)多種生理功能的調(diào)節(jié)。孔霞[5]等研究證明了白芍總苷有顯著的鎮(zhèn)痛作用。王永祥等[6]研究發(fā)現(xiàn)白芍總苷在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴性抑制小鼠扭體和嘶叫，提示白芍總苷對(duì)白細(xì)胞介素-2的抑制作用，可能參與其鎮(zhèn)痛機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TGP從低濃度到高濃度，鎮(zhèn)痛效果逐漸升高。

同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行TGP與PD聯(lián)合使用的鎮(zhèn)痛效果研究：PD的鎮(zhèn)痛效果顯著高于TGP。近期研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷對(duì)于由脂多糖（LPS）等刺激誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)炎癥具有顯著的抑制作用[7]。同時(shí)，芍藥苷可顯著減輕由阿片介導(dǎo)的神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞活化以及神經(jīng)炎癥的產(chǎn)生[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TGP和PD聯(lián)合使用后鎮(zhèn)痛效果顯著高于單獨(dú)使用PD或TGP（P<0.05）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示了TGP與PD具有協(xié)同作用，TGP顯著增強(qiáng)了PD的鎮(zhèn)痛效果，其機(jī)制可能與白芍總苷減輕神經(jīng)炎癥有關(guān)。

在癌癥疼痛的治療中，以嗎啡為代表的麻醉性鎮(zhèn)痛藥效很強(qiáng)，但容易產(chǎn)生依賴性[9]，而未見TGP具有依賴性的研究。本實(shí)驗(yàn)連續(xù)注射TGP的小鼠產(chǎn)生了耐受性，TGP的鎮(zhèn)痛效果隨注射次數(shù)逐步降低，但是與PD組的比較結(jié)果顯示，TGP鎮(zhèn)痛作用下降較PD平緩。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TGP與PD合用，可以明顯延緩耐受性，使PD的鎮(zhèn)痛效果持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間。

PD一旦產(chǎn)生了依賴性，停藥后會(huì)出現(xiàn)明顯的戒斷反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)也予以證實(shí)，在給小鼠連續(xù)注射PD九天后，立即注射阿片類受體阻斷劑納洛酮，小鼠出現(xiàn)了明顯的戒斷反應(yīng)癥狀。而連續(xù)注射TGP九天后的小鼠在注射納洛酮后并未出現(xiàn)顯著的戒斷反應(yīng)，提示TGP不具有依賴性（成癮性）。本實(shí)驗(yàn)中，聯(lián)合注射連續(xù)九天的小鼠戒斷反應(yīng)減弱，表明TGP對(duì)PD的依賴性產(chǎn)生了改善作用。

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)小鼠單獨(dú)注射TGP、PD與聯(lián)合注射TGP和PD后測(cè)量小鼠痛閾值，證實(shí)TGP具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，并且與PD有協(xié)同作用。這可能與白芍總苷減輕神經(jīng)炎癥有關(guān)，增強(qiáng)了哌替啶的鎮(zhèn)痛作用，這為臨床研制鎮(zhèn)痛的中西醫(yī)結(jié)合用藥提供了新思路。

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