小議PCR技術在中藥鑒定中的應用

張曉哲

摘 要：中藥是我國傳統的醫用藥物，古人治病都離不開中藥，中藥在古代乃至現代，都起著不可替代的作用。中藥種類較多，有人工種植的，也有野生的，同一種中藥，在不同的種植產地或者生長模式下，質量和藥效就存在較大的差異。中藥鑒定一直以來就是一個難題，一方面源于中藥市場較為混亂，弄虛作假，以次充好的情況經常發生，外行人很難辨別出中藥的品質，本文從中藥鑒定出發，分析PCR技術在中藥鑒定中的應用。

關鍵詞：PCR技術 中藥鑒定 應用

中圖分類號：Q55 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）03（b）-0213-02

1 相關概述

1.1 中藥鑒定學

中藥鑒定學主要是對中藥的質量和品種進行鑒定和研究，制定出中藥質量鑒定標準，尋找新的藥源。中藥鑒定的五大方法：性狀鑒定法、基原鑒定法、生物鑒定法、理化鑒定法、顯微鑒定法。

1.2 PCR技術

PCR技術屬于生物鑒定法的一種，PCR技術又叫聚合酶鏈式反應技術，可以實現特定DNA片段的擴增。PCR技術的優點在于，可以實現微量DNA的增加，該項技術不僅適用于研究歷史人物殘骸和古生物化石，還可以用于中藥的檢驗，只要從中藥中分離出NDA，便可以利用PCR技術增大分離出來的DNA，用于對比。

2 鑒定中藥真偽優劣的必要性

中藥用于疾病治療，好品質的中藥可以實現治病救人的目的，品質差的中藥不僅藥效較低，還會對人的身體有害。中藥中假藥和劣藥的存在，會影響藥品生產、科研結果，導致臨床治療失敗，不僅帶來經濟損失，還會誤病害人。因此，對中藥進行鑒定，區分其中的“真偽優劣”，也就是中藥的真假以及中藥質量的好壞，很有必要。當前中藥真偽的辨別依舊是個難題，中藥中經常出現一些混品、偽品、摻偽品的行為，究其原因主要有：

首先，人為失誤。出現誤種、誤采、誤收、誤售、誤用的行為。如將藏邊大黃、河套大黃誤種為大黃；將風寒草（聚花過路黃）誤采為金錢草（過路黃）；市場上將十字花科芫菁的種子，冒充菟絲子；用絲石竹的根冒充桔梗；用參薯的塊莖冒充山藥等。其次，名稱、外形、基原相近的中藥品種容易出現混亂。以防己商品為例，種類繁多，廣防己、粉防己、木防己、漢防己，名稱相近，容易弄混。最后，人為故意作假，以假充真。受到經濟利益的影響，中藥市場出現造假的行為，例如：將銀環蛇縱剖成條狀，接上小蛇頭盤，冒充金錢白花蛇，也有用帶有環紋的幼蛇來冒充金錢白花蛇，也有使用白色油漆的方式，畫出環紋，冒充金錢白花蛇；部分商家將馬鈴薯片進行加工，用來冒充白附片；使用其他動物的皮熬膠，冒充阿膠。

中藥的質量直接關系到，用藥的藥量以及用藥效果，質量是中藥的生命。因此，中藥在明確品種后，必須注意對中藥的檢查，辨別中藥的真假優劣，對于不符合用藥標準的中藥，不能使用。

3 基于PCR技術的分子生物鑒定技術

3.1 PCR-RFLP技術

PCR-RFLP技術，又叫聚合酶鏈式反應-限制性內切酶長度多態性技術，可以對中藥的品種進行鑒別，還可以對中藥的摻偽程度進行監測。例如：運用PCR-RFLP技術，可以對川貝母進行檢測，檢測樣品中存在的摻偽比例，這種半定量的檢測方法，可以避免一些商戶，在川貝母中摻入偽品。具體測試方法如下：首先，提取NDA，按照體積比，從川貝母粉中進行DNA的提取，同不同比例偽品的NDA進行對比。其次，利用PCR-RFLP技術，在凝膠電泳后通過軟件分析條帶強弱來計算摻偽量。

3.2 RAPD技術

RAPD技術可以實現對基因組的動態性分析，該項技術有著操作快捷、簡單、靈敏的特點，RAPD技術用于中藥鑒定，可以實現對中藥生藥材，例如：名貴生藥材、動物類生藥材進行檢測，查找其中的混淆品和代用品。RAPD技術存在穩定性和重復性較差的特點，導致其應用不廣泛。

3.3 位點特異性PCR技術

位點特異性PCR技術是基于SNP位點的基因分型方法，該技術用于中藥鑒定，可以通過PCR反應，實現中藥真偽的鑒別，有著快速、操作簡單的特點，可以很好地適用于中藥材的鑒別。以何首烏的檢測為例，位點特異性PCR技術，可以對何首烏、接近何首烏的混淆品進行ITS2序列的變異性分析，尋找變異位點，依靠特異性引物的設計，確定PCR的反應條件，使用平板凝膠電泳的方法，用毛細管凝膠電泳檢測特異性PCR擴增產物，實現對何首烏的PCE分子鑒定。

3.4 ISSR技術

ISSR技術（錨定簡單序列重復技術），該項技術有著多態性高、重復性好的特點，是近年來，新發展起來的一種分子標記技術，廣泛地應用于中藥鑒定方面。ISSR技術，使用錨定的微衛星DNA做為引物，在PCR技術中，錨定引物可以引起特定位點退火，從而使與錨定引物互補間隔不太大的重復序列間DNA片段進行PCR擴增。在對中藥雞血藤進行鑒定時，可以采用ISSR技術，具體措施如下：選擇5個ISSR的隨機引物，進行雞血藤以及混偽品擴增，可以看出擴增出的DNA指紋圖譜，有著明顯的差異性。由此可以看出ISSR技術可以用于雞血藤及其混偽品的辨別。

4 PCR技術鑒定方法的不足之處

PCR技術雖然可以用于中藥的鑒定，但是依舊存在不足之處，例如：部分中藥可能存在次生代謝產物，這會影響到DNA的提取工作，經過炮制的中藥同樣會影響到DNA的提取。分子生物檢測技術，由于分子存在看不到摸不著的特性，需要經過大量的實驗，來進行鑒定方法的探索和優化，需要測試人員具有專業的技術能力。部分中藥藥材，會受到產地、種植方法、栽培變異等條件的影響，影響分子標記法穩定性和重現性，需要對大量的中藥樣品進行驗證。中藥鑒定需要不斷尋找準確、便捷、高效的鑒定方法，分子標記鑒別方法，雖然有著一定的科學性，但是需要經過DNA提取、PCR擴展、電泳檢測，相比其他鑒定方法，更加耗時，需要進一步完善。

5 結語

綜上所述，從古至今，中藥在治療中都有著很好的應用，中藥的種類繁多，存在名稱相似或者外形相似的情況，加上以次充好、假冒偽劣情況的存在，做好中藥鑒定很有必要。在中藥鑒定方法中，生物鑒定法是一種重要的鑒定方式?；赑CR技術分子生物鑒定技術可以很好地用于中藥的鑒定，鑒定中藥的品質以及其中的摻偽比例。常見的分子生物鑒定技術有：PCR-RFLP技術、RAPD技術、位點特異性PCR技術和ISSR技術。相較于其他鑒定方法，PCR技術鑒定方式，耗費時間較長，依舊需要不斷完善，保證鑒定的快捷、高效和準確。

參考文獻

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