原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血T淋巴細(xì)胞表型分析

尹建藍(lán)　陳慧

[摘要] 目的 從原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的外周血T淋巴細(xì)胞表型分析其可能發(fā)病機(jī)制。方法 方便選擇2014年1月—2016年12月就診的因不明原因?qū)е聫?fù)發(fā)性流產(chǎn)的患者共40例，隨機(jī)收集同期自愿要求終止妊娠的健康早孕婦女70名，檢測(cè)兩組外周血清淋巴免疫表型分布差異。結(jié)果 ①URSA組CD4+ CD8+比例（1.59±0.61）%、CD4+CD8-/CD3+T細(xì)胞比率（52.3±6.4）%明顯高于正常組（1.31±0.52）%、（49.1±5.4）%（t1=2.55，P1=0.012； t2=2.79，P2=0.001）。②與正常早孕組相比，URSA組CD4+HLA-DR+/CD4+比率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.60，P=0.552）；而CD3+HLA-DR+/CD3+[（24.8±6.2）% vs （20.4±5.7）%]、CD8+HLA-DR+/CD8+ [（35.6±10.1）% vs （24.9±9.1）%]比率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t1=3.77，P1=0.000；t2=5.70，P2=0.000）。結(jié)論 CD4+ CD8+細(xì)胞比例增加、外周血T淋巴細(xì)胞的活化可能是導(dǎo)致URSA發(fā)病的免疫基礎(chǔ)，活化T細(xì)胞表型可考慮作為URSA檢測(cè)得輔助診斷指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)；淋巴細(xì)胞；診斷

[中圖分類(lèi)號(hào)] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）04（c）-0042-03

Analysis of Peripheral Blood T Lymphocyte Phenotype of Patients with Unexplained Recurrent Abortion

YIN Jian-lan1， CHEN Hui2

1.Department of Obstetrics， Dongguan Maternal and Infant Healthcare Hospital， Dongguan， Guangdong Province， 523112 China；2.Department of Obstetrics， Second Affiliated Hospital of Zhongshan University， Guangzhou，Guangdong Province， 510120 China

[Abstract] Objective To analyze the possible onset mechanism of peripheral blood T lymphocyte phenotype of patients with unexplained recurrent abortion. Methods 40 cases of patients with unexplained recurrent abortion diagnosed in our hospital from January 2014 to December 2016 were selected， 70 cases of healthy women with early pregnancy who volunteered to terminate the pregnancy at the same period were collected， and the difference in the distribution of peripheral blood T lymphocyte phenotype was tested. Results The CD4+ CD8+ ratio and CD4+CD8-/CD3+T cell ratio in the URSA group were obviously higher than those in the normal group[（1.59±0.61）%， （52.3±6.4）% vs （1.31±0.52）%， （49.1±5.4）%] （t1=2.55，P1=0.012；t2=2.79，P2=0.001）， and the difference in the CD4+HLA-DR+/CD4+ ratio between the two groups was not obvious（t=0.60， P=0.552）， and the CD3+HLA-DR+/CD3+ ratio and CD8+HLA-DR+/CD8+ ratio obviously increased，[（24.8±6.2）% vs（20.4±5.7）%]， [（35.6±10.1）% vs （24.9±9.1）%]， and the differences were statistically significant （t1=3.77，P1=0.000；t2=5.70，P2=0.000）. Conclusion The increase of CD4+ CD8+ cell and activation of peripheral blood T lymphocyte phenotype may the immune basis of the URSA onset， and the activation of T cell phenotype can be considered as the adjunctive diagnosis index of URSA test.

[Key words] Recurrent abortion； Lymphocyte； Diagnosis

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（RecurrentspontaneousAbortion，RSA）發(fā)病率在育齡婦女中約2%～3%，多指相同的性伴侶發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)現(xiàn)象[1]。RSA的病因復(fù)雜，近半數(shù)RSA患者無(wú)法通過(guò)現(xiàn)有的臨床診斷方法進(jìn)行識(shí)別且治療效果并不理想，又稱(chēng)不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)（URSA）[2]。URSA易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響婦女身體健康。尋找原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病機(jī)制，對(duì)于該病診治及后續(xù)疾病進(jìn)展有重要意義，早期研究顯示[3]，T淋巴細(xì)胞亞群紊亂可能與本病相關(guān)，該文由此提出對(duì)2014年1月—2016年12月間該該院接收治療的40例URSA患者外周血T淋巴細(xì)胞表型進(jìn)行分析，以找尋其可能發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取40例于該院接受治療的URSA患者作為研究對(duì)象，入選標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)超聲檢查后初步判斷孕卵枯萎或者胚胎停止發(fā)育，胎兒心臟無(wú)跳動(dòng)或者未發(fā)現(xiàn)原始胚胎；根據(jù)醫(yī)院RSA篩查的臨床路徑進(jìn)行病因篩查，符合URSA診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。選擇與URSA組同期的健康早孕并自愿終止妊娠的孕婦70名作為正常對(duì)照組，剔除存在染色體異常、內(nèi)分泌失調(diào)、生殖道感染、自身免疫性疾病史及不良妊娠（自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等）孕產(chǎn)史患者，所有孕婦在7～12周實(shí)施人工流產(chǎn)，術(shù)前B超檢查，可見(jiàn)心臟跳動(dòng)，胚芽，確保胚胎發(fā)育正常，排除：①手術(shù)實(shí)施前出現(xiàn)腹痛、陰道出血等提示先兆流產(chǎn)體征孕婦；②服用甾體激素類(lèi)藥物；③放置宮內(nèi)節(jié)育器。所有患者均獲知情同意并經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行該次研究。統(tǒng)計(jì)兩組患者年齡、體重、流產(chǎn)次數(shù)等一般資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。

1.2 方法

URSA組患者于入院時(shí)、正常早孕組孕婦則于行人工流產(chǎn)術(shù)當(dāng)天抽取外周靜脈血2 mL，取專(zhuān)用試管按檢測(cè)細(xì)胞組編號(hào)后，分別吸取外周血樣品50 μL于對(duì)應(yīng)試管中，將10 μL BDTritestCD4FITC/CD8PE/CD3 PerCP與5 μL Anti-HLA- DRA PC抗體加入流式管底部標(biāo)記T細(xì)胞各亞群及其活化。同時(shí)設(shè)置同型對(duì)照管（全血+相應(yīng)的單色熒光克隆抗體）；避光反應(yīng)15 min后吸取溶血素500 μL加入其中，之后PBS洗滌離心留取沉淀物，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)CELLQuest軟件分析散點(diǎn)圖中各淋巴細(xì)胞亞群的比例及相關(guān)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

所得數(shù)據(jù)均錄入后通過(guò)SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)行t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血T淋巴細(xì)胞免疫表型

兩組中CD3+T細(xì)胞比例、CD4-CD8+/CD3+細(xì)胞比率均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），URSA組CD4+ CD8+比例、CD4+CD8-/CD3+T細(xì)胞比率明顯高于正常組（P<0.01），見(jiàn)表 2。

2.2 外周血活化T淋巴細(xì)胞表型分析

與正常早孕組相比，URSA組CD4+HLA-DR+/CD4+比率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而CD3+HLA-DR+/CD3+[（24.8±6.2）% vs （20.4±5.7）%]、CD8+HLA-DR+/CD8+[（35.6±10.1）% vs （24.9±9.1）%]比率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t1=3.77，P1=0.000；t2=5.70，P2=0.000），見(jiàn)表3。

3 討論

外周血中最主要的淋巴細(xì)胞即為T(mén)淋巴細(xì)胞，其在免疫刺激、調(diào)節(jié)以及免疫反應(yīng)中均起著重要作用，故而在免疫治療過(guò)程中常以T細(xì)胞亞群的改變作為衡量療效的重要觀察指標(biāo)。黃艷星[4]經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)RSA患者的蛻膜組織中CD8+細(xì)胞逐漸降低，進(jìn)而使得CD4+/CD8+的比值呈現(xiàn)出明顯升高的趨勢(shì)，為CD8+T細(xì)胞在妊娠過(guò)程中重要性提供了一定依據(jù)；CD4+T細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫[5]，該細(xì)胞的數(shù)量逐漸增多或者功能亢進(jìn)都會(huì)使母體的細(xì)胞免疫功能逐漸增加，對(duì)胚胎發(fā)生較強(qiáng)的免疫排斥反應(yīng)，引起流產(chǎn)發(fā)生[6]，該文結(jié)果顯示，URSA組CD4+ CD8+比例（1.59±0.61）%、CD4+CD8-/CD3+T細(xì)胞比率（52.3±6.4）%明顯高于正常組（1.31±0.52）%、（49.1±5.4）%（P<0.01），與上述結(jié)論基本一致。

淋巴細(xì)胞發(fā)揮免疫反應(yīng)前需經(jīng)歷的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)即為細(xì)胞活化，主要是靜止T淋巴細(xì)胞受到刺激后增殖活化，形成效應(yīng)細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞因子的分泌及細(xì)胞因子受體和粘附分子在細(xì)胞表面的表達(dá)[7]。淋巴細(xì)胞的活化或抑制狀態(tài)可通過(guò)特定的細(xì)胞表面分子標(biāo)記物表示。人類(lèi)白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）系統(tǒng)是一群與人的免疫應(yīng)答相關(guān)聯(lián)的基因簇，目前有研究發(fā)現(xiàn)，在同種異體免疫中，增加的部分父親一方的人類(lèi)白細(xì)胞抗原會(huì)對(duì)抗父方細(xì)胞毒抗體（APCA）、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)封閉抗體（MLR-Bf）及抗獨(dú)特型抗體（Ab2）產(chǎn)生抑制作用，而上述抗體卻在正常妊娠中發(fā)揮重要作用，若出現(xiàn)表達(dá)低下或缺失就可引發(fā)URSA[8]。趙花等[2]研究結(jié)果標(biāo)明，URSA組CD3+HLA-DR+[（25.68 ± 9.09）% vs （19.13±7.91）%]、CD8+HLA-DR+T[（34.37 ± 11.91）% vs （24.14±11.71）%]淋巴細(xì)胞均較正常組明顯增加（P<0.05），該文結(jié)果顯示與正常組相比，URSA組CD3+HLA-DR+/CD3+[（24.8±6.2）%vs（20.4±5.7）%]、CD8+HLA-DR+/CD8+ [（35.6± 10.1）%vs（24.9±9.1）%]比率明顯增加（P<0.05），而CD4+T細(xì)胞活化比例則無(wú)明顯變化（P>0.05），與上述結(jié)果基本一致，故而推測(cè)URSA患者CD3+T、CD8+T細(xì)胞過(guò)度活化可能是其致病的免疫基礎(chǔ)，有望成為URSA的輔助診斷及病情監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

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（收稿日期：2018-01-23）