雙黃花片對急性上呼吸道感染患者炎癥因子及 免疫功能的影響

王華　孟盼

〔摘要〕 目的 探討雙黃花片對急性上呼吸道感染患者炎癥因子和免疫功能的影響。方法 將72例受試者按1∶1的比例，隨機分為雙黃花片治療組和感冒清片對照組，療程5 d；觀察急性上呼吸道感染疾病的臨床療效，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定血清炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α含量，流式細胞儀（FACS Calibur）檢測外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。結果 經治療后，治療組疾病綜合療效明顯高于對照組（P<0.01）。治療組患者血清炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。治療組患者的T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 雙黃花片治療急性上呼吸道感染有較好的療效，可降低炎癥因子水平，提高機體免疫能力。

〔關鍵詞〕 急性上呼吸道感染；風熱證；雙黃花片；炎癥因子；免疫功能

〔中圖分類號〕R289.5；R254.1 〔文獻標志碼〕B 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.05.021

Effect of Shuanghuanghua Tablet on Inflammatory Factors and Immune Function in

Patients with Acute Upper Respiratory Infection

WANG Hua1， MENG Pan2， CHEN Mingfeng3， ZHANG Suying2*

（1. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China；

2. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China； 3. The Eighth Hospital of

Changsha， Changsha， Hunan 410100， China）

〔Abstract〕 Objective To explore the effect of Shuanghuanghua tablet on inflammatory factors and immune function in patients with acute upper respiratory infection. Methods A randomized method was used to divide 72 subjects into the treatment group （Shuanghuanghua tablet） and the control group （Ganmaoqing tablet）， according to the proportion of 1：1， with a course of 5 days. The clinical efficacy of acute upper respiratory tract infection was observed. The serum inflammatory factors interleukin 2 （IL-2）， interleukin 6 （IL-6）， interleukin 8 （IL-8） and tumor necrosis factor alpha （TNF-α） were determined by double-antibody sandwich ABC-ELISA. The level of T cell subsets of peripheral blood CD3+， CD4+， CD8+ and CD4+/CD8+ was detected by Flow cytometry （FACS Calibur）. Results After treatment， the curative effect of the treatment group was significantly higher than the control group （P<0.01）. The levels of serum inflammatory factors IL-2， IL-6， IL-8 and TNF-α in the treatment group were significantly lower than the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The T-cell subgroup CD3+， CD4+， CD8+ and CD4+/CD8+ in the treatment group were significantly higher than the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Shuanghuanghua tablet has a good therapeutic effect on acute upper respiratory infection， which can reduce the level of inflammatory factors and improve the immune ability of the body.

〔Keywords〕 acute upper respiratory infection； wind-heat syndrome； Shuanghuanghua tablet； inflammatory factors； immune function

急性上呼吸道感染主要是由病毒感染引起 [1]，由于病毒類型較多，其發病率非常高。感染病毒的種類不同及病人個體免疫力不同，病情輕重也不一。迄今為止，西醫多以退熱對癥治療或抗生素輔助治療方法為主，缺乏特效抗病毒藥物。因病毒侵襲人體后，會啟動一系列免疫病理變化[2]。本課題選取了72例急性上呼吸道感染風熱患者，探討雙黃花片對急性上呼吸道感染（風熱證）患者炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α的水平和T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

1.1.1 西醫診斷標準 參照“十一五”國家級規劃教材《內科學》第七版內容[3]。（1）有感冒反復發作史。（2）以局部癥狀為主，全身癥狀可有或不明顯。①局部癥狀：噴嚏、鼻塞、流涕、有時咳嗽、咽痛、咽喉紅腫、聲嘶、流淚；②全身癥狀：發熱微惡寒、全身不適、頭痛頭昏、倦怠無力、氣短懶言。（3）血象：白細胞計數多正常或偏低。

1.1.2 中醫診斷標準 參照《中華人民共和國中醫藥行業標準·中醫病證診斷療效標準》[4]和專家意見制定。（1）主癥：①發熱；②咽痛；③鼻塞；④噴嚏；⑤氣短乏力、少氣懶言；（2）次癥：①流涕；②咳嗽；③頭痛；④肢體酸痛；⑤惡寒；⑥口干。凡具備主癥①②③④≥2項，次癥≥2項，結合體征及舌脈即可辨證為急性上呼吸道感染風熱證。

1.1.3 納入標準 （1）符合西醫、中醫疾病診斷標準；（2）符合風熱證的中醫證候診斷標準；（3）病程≤36小時；（4）年齡為18歲～65歲；（5）自愿加入本研究，并簽署知情同意書。

1.1.4 排除標準 （1）本次就診前36小時內已使用其他治療本病藥物者（包括抗病毒、激素、解熱鎮痛等中西藥物和治療方法）；（2）體溫≥39.0 ℃；（3）根據體征、癥狀、實驗室檢查或咽拭子細菌培養有細菌感染的高度可能性，如白細胞計數>10.0×109/L、嗜中性粒細胞≥80%或咽拭子細菌培養結果為陽性；（4）已經發現肺部出現陰影或感染體征；（5）合并氣管—支氣管炎、咽—結膜熱、鼻竇炎、過敏性鼻炎、化膿性扁桃體炎、肺炎、肺結核等；（6）合并心、腦、肺、肝、腎及造血等系統嚴重原發性疾病，以及精神病受試者；（7）過敏性體質（對2類以上物質過敏者），或對本制劑組成成分過敏者；（8）血肌酐（Cr）超過正常值上限，谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、尿素氮（BUN）超過正常值上限1.5倍；（9）妊娠、哺乳期及準備受孕婦女；（10）在入組前1個月內參加其他臨床研究。

注：因納入標準中規定病人發病時間需在36 h內，而咽拭子細菌培養結果需3～5 d才能出來，則受試者可先入組，等咽拭子細菌培養結果出來后，剔除結果陽性者。

1.2 一般資料

觀察患者72例為2015年5月至2016年12月湖南中醫藥大學第一附屬醫院呼吸科門診病人。隨機分為治療組36例，對照組36例，病程≤36 h。治療組中，男19例，女17例；平均年齡（36.03±6.35）歲。對照組男16例，女20例；平均年齡（38.42±7.01）歲。兩組病例的基線資料包括身高、生命體征（腋下體溫、呼吸、脈搏）等差異均無統計學意義（P>0.05），具可比性。

1.3 治療方法

1.3.1 治療組 雙黃花片（由黃芪、黃芩、金銀花組成，由湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑室提供，批號20150201），用法用量為：口服，3片/次，3次/d。

1.3.2 對照組 感冒清片[國藥準字Z13021722，圣大（唐山）藥業有限公司，0.22 g/片]口服，3片/次，3次/d。

2組療程均為5 d。

1.4 觀察指標和方法

1.4.1 疾病的臨床療效判定[5] 臨床癥狀積分計分標準為主癥按無、輕、中、重度分別計0、2、4、6分，舌象、脈象僅做參考，不計入總分。痊愈：治療5 d以內體溫恢復正常，癥狀體征消失，且無反復。顯效：治療5 d以內體溫恢復正常，癥狀積分減少≥70%。有效：治療5 d以內體溫較以前降低，癥狀積分減少≥30%，但<70%。無效：治療5 d以內體溫未降或升高，癥狀積分減少<30%。

1.4.2 免疫細胞檢測 患者空腹于治療前和治療后分別取外周血5 mL，采用不同單抗染色測定CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+細胞水平。每個采樣管采集50 μL血液，分別加入5 μL PerCP偶聯CD3單克隆抗體、FITC偶聯CD4單克隆抗體、PE偶聯CD8單克隆抗體、FITC偶聯CD3單克隆抗體和PE偶聯CD16CD56單克隆抗體。樣品在室溫下放置0.5 h， 再加入FACS細胞裂解液，靜置6 min。用PBS緩沖液洗過2遍后，進流式細胞儀（FACS Calibur）上檢測。

1.4.3 炎癥因子檢測 患者空腹于治療前和治療后分別取外周血5 mL，分離血清，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α含量。抗人IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α與單抗結合，分別加入生物素標記的抗人IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α抗體，形成免疫復合物連接在板上，過氧化物酶標記的親和素與生物素結合，加入酶底物TMB，出現顏色，加TMB終止液，顏色改變。在不同波長處測定OD值，通過繪制標準曲線求出標本中的物質濃度。

IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α ELISA試劑盒購自北京中杉金橋公司，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+抗體購自BD公司。MK3型酶標儀購自美國Thermo公司，流式細胞儀購自美國BD公司。

1.5 統計學分析

采用SPSS 16.0統計學軟件進行結果分析。所有的統計檢驗均采用雙側檢驗，計量資料用“x±s”表示，t檢驗；計數資料采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床療效比較

治療5 d后，治療組患者總有效率為94%顯著高于對照組72%，差異有統計學意義（P<0.01），結果見表1。

2.2 兩組患者血清炎癥因子比較

治療前2組患者的血清炎癥因子 TNF-？琢、IL-2、IL-6、IL-8水平比較，差異無統計學意義。治療后治療組患者的血清炎癥因子TNF-？琢、IL-2、IL-6、IL-8水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），結果見表2。

2.3 兩組患者免疫功能比較

治療前2組患者的T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較，差異無統計學意義。治療后治療組患者的T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），結果見表3。

3 討論

急性上呼吸道感染，是鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，絕大多數是自限性疾病，也是基層醫院最常見的疾病之一[6-7]。西醫治療急性上呼吸道感染采用抗生素治療，目前濫用抗生素現象仍然十分嚴重，已成為世界性難題，我國抗生素的使用率不僅嚴重呈上升趨勢，而且引起耐抗生素致病菌日漸增多[8-10]。中醫學認為上呼吸道感染是由于風邪兼挾寒熱暑濕等邪外襲肺衛而引起，同時也與體虛衛外不固、肺經素有痰熱伏火等稟賦素質有關[11]。中醫藥治療具有早期起效迅速、療效顯著、費用低、副作用較少等特點。

本研究結果表明，治療5 d后，治療組患者疾病綜合療效總有效率為94%，顯著高于對照組72%，雙黃花片主要由黃芪、黃芩、金銀花組成，具有清熱解毒、益氣扶正作用，起到扶正祛邪之效。黃芪素有“入肺補氣，入表實衛，為補氣諸藥之最”味甘，性微溫，為補氣升陽之圣藥，又能增強機體的免疫力[12]。金銀花芳香疏散，善散肺經熱邪，透熱達表，黃芩苦寒，善邪肺火及上焦實熱，與金銀花配伍，清熱解毒之功大增[13]。三藥搭配攻補兼施，相輔相成，具有清宣肺氣、清熱解毒、平衡陰陽，從而達到“扶正以祛邪”“邪去而正安”的目的。急性上呼吸道感染存在炎癥反應，外周血中腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）和IL-1、IL-2、IL-6、IL-8等炎性細胞因子的高表達已成為病毒感染的標志[14]，TNF-α可通過激活T細胞，促進IL-1、IL-2、IL-6、IL-8的產生及分泌，而IL、TNF-α及趨化因子對介導炎癥反應發生、調節免疫應答強度起重要作用[15]。這些炎癥因子在外周血含量上升將會導致機體發熱等一系列炎性反應產生和病情的加重。治療后治療組患者的血清炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、和TNF-α明顯低于對照組（P<0.05）。說明雙黃花片可減輕急性上呼吸道感染的炎癥反應。急性上呼吸道感染導致機體免疫功能的免疫細胞亞群、免疫細胞及因子失衡，而機體抵御病毒感染主要依靠T細胞介導的細胞免疫，CD3+、CD4+、CD8+等T細胞亞群降低，雙向免疫功能紊亂[16]。治療后治療組患者的T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。說明雙黃花片可提高上呼吸道感染的免疫功能，其作用機理可能與調節T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+有關，從而保護機體，阻止疾病的發展，促進的疾病的恢復。雙黃花有較好的鎮咳、祛痰、退熱及調節免疫等藥理作用[17]，有研究表明金銀花中黃酮類、有機酸、三萜皂苷類，黃芩中黃芩素、黃芩苷，黃芪中黃酮類，均具有抗炎、抗菌、調節免疫等藥理作用[18-20]。總之，雙黃花片通過調節機體免疫網絡，降低炎癥因子水平，提高免疫功能，起到抗病毒免疫作用，對治療急性上呼吸道具有較好的臨床療效。

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