前列腺癌組織血管內皮生長因子-C及其受體-3、核干因子表達與病理分級的相關性

王縣平 嚴海員 楊 鋒 胡 俊 吳 奧 王 煒

(武漢市第九醫院泌尿外科，湖北 武漢 430081)

前列腺癌為男性泌尿系統最為常見的惡性腫瘤之一，研究表明，其發生率占男性腫瘤的9.7%〔1,2〕。前列腺癌因臨床表現隱匿、自然病程長，目前尚未普及檢查，故多數患者診斷時已處于疾病晚期。前列腺癌發生發展與多種因子相關，內皮生長因子(VEGF)-C為VEGF家族成員，而其受體(VEGFR)-3為VEGF-C酪氨酸激酶受體，兩者結合后具有促進機體血管及淋巴管生成作用〔3,4〕。研究〔5〕證實，VEGF-C與VEGFR-3結合后，可促進腫瘤中心及外周淋巴管生成，并具有誘導血管新生及維持血管內皮完整性等作用。核干因子(NS)為p53結合蛋白，其于已分化組織中不表達，干細胞或者腫瘤細胞表達水平顯著升高，且于干細胞及多種癌細胞增殖過程中發揮了重要作用。VEGF-C、VEGFR-3及NS于多種惡性腫瘤組織中表達水平異常已有研究證實，但前列腺癌組織表達及其與病理分級之間關聯尚未見報道。本研究探討前列腺癌組織VEGF-C、VEGFR-3及NS水平及其與病理分級之間相關性。

1 臨床資料

1.1一般資料 武漢市第九醫院2015年1月至2016年9月手術及均經術后病理檢查證實的前列腺癌患者40例為前列腺癌組，結合相關實驗室檢查結果及術后病理檢查均符合前列腺癌診斷標準〔6〕，年齡51～79歲，平均年齡(69.9±9.8)歲，體重指數(22.3±2.6)kg/m2，術前總前列腺特異性抗原(PSA)(149.6±43.6)ng/ml,游離PSA水平(16.3±6.9)ng/ml,前列腺體積(139.6±45.6)ml，Gleason評分(6.3±2.1)，TNM分級T1c級6例，T2b級13例，T2c級16例，T3a級5例。術前均未接受手術、化療及放療干預、中藥治療；取癌旁組織40份(癌旁組織組)，均經病理檢查證實。選擇同期行前列腺手術患者經病理檢查為正常組織者40例(對照組)，年齡49～81歲，平均年齡(70.3±9.3)歲，體質量指數(22.9±2.7)kg/m2。三組基本資料差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2VEGF-C、VEGFR-3水平測定 制作病理組織石蠟塊、切片，將石蠟切片常規脫蠟、蒸餾水沖洗后，再以磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡；將切片置入高壓鍋3 min后冷卻；再以PBS浸泡3次，每次5 min；滴加增強劑工作液后置于室溫下孵育10 min；滴加一抗后置于4℃冰箱內過夜，取出后再滴加增強劑工作液置于室溫環境下孵育20 min；再滴加酶標羊抗鼠/兔聚合物工作液(購自北京中杉金橋生物技術有限公司)置于室溫環境下孵育30 min；再以PBS浸泡3次，每次5 min；再以二氨基聯苯胺(DAB)顯色、蘇木素復染，常規脫水透明后使用中性樹膠封片，置于顯微鏡下觀察。

1.3NS水平測定 常規脫蠟，應用胰酶抗原修復；再應用3%H2O2消除內源性過氧化物酶活性后應用正常兔血清封閉；滴加羊抗人NS抗體，置于4℃冰箱過夜；滴加生物素標記的兔抗羊二抗，置于室溫環境下20 mnin；PBS清洗后滴加辣根過氧化物酶標記的鏈卵白素，置于室溫下孵育20 min；再以DAB顯色，蘇木素復染，封片，置于顯微鏡下觀察。

1.4結果評估 (1)VEGF-C結果判定：將封片置于200倍顯微鏡下觀察，以細胞核不染色、細胞質內發現棕色或者棕黃色顆粒作為陽性染色標準，其中，陰性：染色細胞數<10%；弱陽性：染色細胞數10%～25%；陽性：染色細胞數26%～50%；強陽性：染色細胞數>50%〔7〕。(2)VEGFR-3結果判定：細胞質內及細胞膜出現棕褐色顆粒為陽性，置于低倍鏡(100×)下觀察，陰性：染色細胞數<20%；弱陽性：染色細胞數20%～45%；陽性：染色細胞數46%～65%；強陽性：染色細胞數>65%〔8〕。(3)NS結果判定：以細胞質或者細胞核內出現淡黃色或者黃棕色為陽性細胞標志，陰性：陽性細胞率≤5%；弱陽性：陽性細胞率6%～25%；陽性細胞數26%～50%；強陽性：細胞染色率>50%〔9〕。

1.5統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件進行χ2檢驗、t檢驗、秩和檢驗。

2 結 果

2.1各組VEGF-C、VEGFR-3、NS比較 與對照組比較，前列腺癌組及癌旁組織組VEGF-C、VEGFR-3、NS陽性率均顯著增高(均P<0.05)；與癌旁組織組比較，前列腺癌組VEGF-C、VEGFR-3、NS陽性率顯著增高(P<0.05)。見表1。

表1 各組間VEGF-C、VEGFR-3、NS表達比較〔n(%)，n=40〕

與對照組比較：1)P<0.05，與癌旁組織組比較：2)P<0.05

2.2前列腺癌組織VEGF-C、VEGFR-3、NS表達與病理分級之間關系 與T1c級比較，T2b、T2c及T3a級VEGF-C、VEGFR-3、NS表達增強(均P<0.05)；與T2b級比較，T2c及T3a級表達增強(均P<0.05)；與T2c比較，T3a級表達增強，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 前列腺癌組織VEGF-C、VEGFR-3、NS水平與病理分級之間關系〔n(%)〕

1)與T1c級比較；2)與T2b級比較；3)與T2c級比較：均P<0.05

3 討 論

前列腺癌多發生于外周帶，遠離前列腺尿道部，早期缺乏典型癥狀，臨床確診時多已處于疾病晚期，多數患者僅能接受內分泌治療，喪失最佳手術時機。此外，前列腺癌臨床分期與治療措施及預后評估具有重要關聯。VEGF-C于人類基因定位于染色體4q34,為臨床第一個發現的具有調節淋巴管生成作用的VEGF家族成員〔10〕。研究〔11，12〕證實，VEGF-C具有誘導多種惡性腫瘤內或者腫瘤組織周圍淋巴管生成的作用，且與淋巴道轉移具有密切關聯。VEGFR-3主要表達于淋巴內皮細胞，其與VEGF-C結合后可誘導VEGFR-3酪氨酸激酶磷酸化，再通過胞質內信號傳遞等機制，促進DNA有絲分裂，最終導致靶細胞增殖〔13〕。本研究表明VEGF-C及VEGFR-3于前列腺癌組織表達增強明顯，且臨床分級越高，VEGF-C及VEGFR-3表達增強越明顯。研究〔14，15〕表明，VEGF-C及VEGFR-3結合后可促進內皮細胞生長因子激活，促進內皮細胞增殖；另一方面，還可促進腫瘤組織淋巴管擴張及增加淋巴管通透性，增加淋巴管周圍組織間隙內壓力，牽拉內皮細胞，增大淋巴管管腔，而導致重疊的內皮細胞開放，使腫瘤細胞更易進入淋巴管，促進轉移，此可能為前列腺癌組織VEGF-C及VEGFR-3表達水平增高及臨床分期高，其表達增強原因〔16，17〕。

人類NS基因位于3p21，其不僅存在于鼠的胚胎皮層干細胞等，還可見于人類多種腫瘤細胞。研究〔18〕證實，下調NS基因表達，可抑制腫瘤細胞增殖，表明其表達于腫瘤細胞自我更新過程中發揮了重要作用。國外研究〔19，20〕報道，NS可能為干細胞及腫瘤細胞中最重要的共同調節基因，其表達水平參與腫瘤細胞增殖；此外，BS基因表達水平與前列腺癌分化程度有密切關聯，細胞分化程度高，癌細胞惡性程度小，NS水平降低，表明NS參與前列腺癌發生及轉移，此可能為NS與前列腺癌病理分級具有相關性的原因之一。