生物活性肽調節腸黏膜免疫功能和結構的meta分析

印虹　吳雅桐

【摘 要】目的：通過meta分析的方法探究國內外生物活性肽對腸黏膜免疫調節作用的相關文獻，綜合分析生物活性肽調節腸黏膜免疫作用機制以及對機體腸黏膜結構的綜合影響，從而能為生物活性肽對機體腸黏膜免疫健康的促進作用提供有力根據。方法：應用計算機在揚州大學圖書館檢索數據庫包括萬方數據庫、SCI、CNKI數據庫、Web of Science、EBSCO等，收集國內外關于生物活性肽對腸黏膜免疫作用的研究，根據生物活性肽對SIgA的濃度變化以及對腸絨毛長度和隱窩深度影響的指標數據，將篩選出符合的文獻進行數據的合并處理，并利用StataSE12.0進行meta分析。結果：經過文獻檢索與篩選，共找到相關文獻21篇，其中有10篇有效文獻符合meta分析要求，得到總的樣本量為196，meta分析結果表明：在腸黏膜免疫功能和結構的研究中，對于SIgA濃度變化指標，[SMD=2.643，95%CI=（2.003，3.282），P<0.05]；對于腸絨毛長度/隱窩深度（V/C）指標，[SMD=2.701，95%CI=（1.891，3.512），P<0.05]，說明實驗組與對照組間的差異具有統計學意義。結論：生物活性肽對腸道SIgA有一定促分泌作用，同時能夠增加腸絨毛長度改善腸黏膜結構。因而在促進腸黏膜免疫、改善腸道黏膜結構、減少腸道有害菌群數量和增強腸道生物屏障方面，生物活性肽具有一定的積極作用。

【關鍵詞】meta分析；生物活性肽；黏膜免疫；腸黏膜結構

中圖分類號： R151 文獻標識碼： A 文章編號： 2095-2457（2018）14-0113-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.14.050

Meta analysis of bioactive peptides regulating intestinal mucosal immune function and structure

YIN Hong WU Ya-tong

（Department of cooking and nutrition， School of tourism and cuisine， Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu， 225000， China）

【Abstract】Objective： To investigate the immunoregulatory effects of bioactive peptides on intestinal mucosa at home and abroad by meta-analysis， and to analyze the mechanism of bioactive peptides to regulate intestinal mucosal immune function and the combined effect of intestinal mucosal structure Effectively for the bioactive peptides on the body's intestinal mucosal immune health promotion to provide a strong basis. And ultimately through the application of bioactive peptides to improve intestinal flora， intestinal mucosal immune to enhance the purpose of promoting the health of the body. Methods： The database of Yangzhou University Library， including Wanfang database， SCI， CNKI database， Web of Science and EBSCO， was used to search the database of bioactive peptides. The bioactive peptides were used to study the effect of bioactive peptides on SIgA Concentration changes and the impact of intestinal length and crypt depth of the index data， will be screened to meet the literature for data processing， and the use of StataSE12.0 meta analysis. Results： 21 literatures were searched and screened. Among them， 10 valid literatures met meta-analysis requirements， and the total sample size was 196. The meta-analysis showed that in the study of intestinal mucosal immune function and structure， For SMG=2.643，95%CI=（2.003，3.282），P<0.05]； for intestinal villus length/crypt depth （V/C）， [SMD=2.701，95%CI=（1.891，3.512），P<0.05）， indicating that the difference between the experimental group and the control group was statistically significant. Conclusion： Bioactive peptides have a certain secretory effect on intestinal SIgA， and can increase the length of intestinal villus to improve intestinal mucosal structure. Therefore， bioactive peptides have a positive effect in promoting intestinal mucosal immunity， improving intestinal mucosal structure， reducing the number of harmful intestinal flora and enhancing intestinal barrier.

【Key words】Meta-analysis； Bioactive peptides； Mucosal immunity； Intestinal mucosal

0 引言

生物活性肽是一類對機體有許多重要生理功能的物質[1]。大量研究表明， 生物活性肽在促進動物的胃腸道發育和成熟、促進蛋白質合成與肌肉生長、增強機體免疫力等方面均發揮顯著的作用[2]?；钚噪木哂卸喾N人體代謝和生理調節功能，易于消化吸收，有增進免疫、調節激素、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用，食用安全性極高，是當前國際食品界最熱門的研究課題和極具發展前景的功能因子。

活性肽的分類可按原料、保健功能和來源來劃分[3]。如按原料劃分：乳肽、大豆肽、玉米肽等；按照保健功能：免疫活性肽、神經活性肽、降血壓肽和抗菌多肽等；按來源：內源性生物活性肽和外源性生物活性肽[4]。

腸道黏膜免疫是機體免疫系統的重要部分。腸黏膜表面的抗原引發腸道中的黏膜反應，腸道黏膜中的淋巴結將捕獲的抗原轉移到巨噬細胞，然后其對抗原進行加工，并轉移給輔助性T細胞，然后激活B淋巴細胞，B淋巴細胞分化增強，產生大量分泌型IgA（SIgA），腸道黏膜免疫反應主要依靠分泌至黏膜表面及腸腔中的免疫球蛋白（以SIgA為主）和腸道黏膜內以淋巴細胞為主體的免疫活性細胞，共同完成腸道的局部免疫功能[5]。腸黏膜表面布滿由上皮和固有層向腸腔內突出形成的細小突起，稱為腸絨毛。腸黏膜絨毛高度是指從絨毛的頂部到絨毛—隱窩結合處的距離；隱窩深度定義為鄰近的腸絨毛之間內陷的深度。營養物質的吸收和消化作用依靠腸道上的環行皺襞、腸絨毛以及絨毛表面的柱狀上皮細胞等結構來完成。一般情況下，腸黏膜絨毛長度的增加和隱窩深度的降低有助于腸道營養物質的吸收[6]。

Meta分析是對具備特定條件的、同課題的諸多研究結果進行綜合的一類統計方法。在世界范圍內，盡管各學者在研究設計、對象選擇、樣本含量、指標選擇、統計方法等方面不完全相同，導致研究得到的結果也不完全一致，但是meta分析可以對同一研究目的或項目的幾個或幾十甚至上百的獨立研究的結果進行系統的、定量的綜合性分析[7]。Meta分析在醫學領域應用最為廣泛，應用最多的是對干預性的隨機對照試驗的評價，在觀察性研究和交叉對照研究中也得到推薦[8]。

綜上，關于生物活性肽對于腸黏膜免疫的研究有了一些結果，但是這些結果不一致，如實驗對象差異大、樣本量小、研究指標分散等等，因此適合開展meta分析整合信息。

1 材料和方法

1.1 文獻檢索

以“生物活性肽”，“腸黏膜免疫”，“腸黏膜結構”為關鍵詞，在揚州大學圖書館網站檢索檢索數據庫包括萬方數據庫、SCI、CNKI數據庫、Web of Science、EBSCO等，查找國內外關于生物活性肽對腸黏膜免疫作用研究的文獻。資料的種類包括學位論文，會議報告，實驗報告，期刊文章，電子文獻等。

1.2 文獻納入標準

對于生物活性肽調節腸黏膜免疫結構和功能的作用，（1）確定以SIgA濃度變化和腸絨毛長度/隱窩深度（V/C）為研究指標的文獻，各樣本測定方法必須準確，有樣本含量，均數，標準差等數據，且均采用統計學的方法對采集的樣本進行整理分析。（2）文獻發表時間在2000-2016年之間（3）實驗對象為小鼠、斷奶仔豬或仔雞（4）采用隨機對照實驗設計，實驗組與對照組設置合理。

1.3 文獻排除標準

（1）采用其他研究指標；（2）個體案例的報道、經驗總結、對理論的探討、綜述和摘要等研究類型文獻；（3）重復發表或結果模糊不清的文獻；（4）單純的以描述為主的實驗研究。

1.4 統計學方法

利用StataSE12.0軟件進行meta分析，由于此研究指標為定量變量，所以在meta分析中選擇Continuous類型（此類型適用于連續型定量結局變量的meta分析，錄入數據時需要輸入實驗組和對照組的例數，均數和標準差）分析。統計分析設定置信區間為95%，統計方法選擇標準化均數差。異質性檢驗若P值≤0.05，則說明研究結果不同質，采用隨機效應模型計算合并過的綜合效應；若P>0.05，則說明各研究結果不具有異質性所以采用固定效應模型計算合并過的綜合效應。

2 結果

2.1 文獻檢索結果

通過萬方數據庫、SCI、CNKI數據庫、Web of Science、EBSCO等初步檢索得到相關文獻36篇，再進行初步篩選得到21篇，最終根據文獻納入標準篩選出有效可用文獻10篇。納入的10項實驗研究的設計、實驗動物數量、實驗動物處理方法、實驗動物種類和生物活性肽用量有一定差異，但所得實驗數據可以使用。

2.2 meta分析過程

利用stata軟件進行meta分析首先要對各研究作同質性檢驗。統計學異質性是用來描述一系列研究中效應量的變異程度，也表明除可預見的偶然機會之外的研究間存在的差異性。常用I2檢驗來檢測異質性，？可將異質性分為四個程度：0：（當I2為負值時，我們將其設為0）表明沒有異質性；0-40%：輕度異質性；40%-60%：中度異質性；70%-90%：較大的異質性；75%-100%：很大的異質性. 異質性較低，選擇固定效應模型，異質性較大時，選擇隨機效應模型。

2.2.1 生物活性肽對分泌型免疫球蛋白A（SIgA）濃度變化的meta分析

對納入文獻的數據進行整合，因為所選指標分泌型免疫球蛋白A（SIgA）濃度變化為連續性指標，因此需要提取各實驗組與對照組的例數、均數和標準差。

以SIgA為指標，實驗組對照組各有82例。首先進行異質性分析，可知I2=55.5%，有一定異質性，因此采用隨機效應模型。SIgA濃度的SMD=2.643，95%CI=（2.003，3.282），P=0.017<0.05，表明效應合并值與0的差異具有統計學意義。

圖1森林圖顯示無效線豎線的橫軸尺度為0，每條橫線為實驗研究的95%可信區間上下限的連線，其線條長短直觀地表示了可信區間范圍的大小，線條中央的小方塊為SMD值的位置，方塊大小為權重大小。圖中方塊完全位于垂直線的右側表明效應合并值的百分之95置信區間未包括0，表明效應合并值與0的差異具有統計學意義，可以認為注射生物活性肽的實驗組SIgA濃度高于對照組，因此可得出生物活性肽對SIgA濃度有促增長作用。

2.2.2 生物活性肽對腸黏膜結構（V/C）的meta分析

以腸黏膜結構（V/C）為研究指標，實驗組對照組各有114例，顯示I2=68.0%，有一定異質性，因此采用隨機效應模型。腸絨毛長度/隱窩深度（V/C）的SMD=2.701，95%CI=（1.891，3.512），P<0.05，表明效應合并值與0的差異具有統計學意義。

此時可進行亞組分析，將實驗組和對照組的腸黏膜結構再分成十二指腸組（a組）、空腸組（b組）和回腸組（c組），再進行異質性檢驗，可知a組異質性較小。

由圖2整體森林圖和圖3亞組森林圖均顯示：方塊完全位于垂直線的右側表明效應合并值的百分之95置信區間未包括0，表明效應合并值與0的差異具有統計學意義，因此可以得出實驗組V/C大于對照組，實驗組腸黏膜結構比對照組有所改善。

2.3 檢驗發表偏倚

我們常用漏斗圖檢測偏倚。將單個研究估計得來的效果與每項研究的樣本含量兩個指標分別為x和y軸作出的散點圖形被。如果我們收集的研究沒有發表偏倚，那么理論上按照上面的方法做出的散點圖呈現倒置的漏斗型。因為效果估計值的準確性與研究樣本量呈正相關，所以小樣本研究的結果離散程度較大，散開在漏斗圖的底部，隨著樣本含量增加，標準誤減少，研究精度增加，散點趨向密集，大樣本研究效應的點估計密集在一個較窄的范圍內。如果漏斗圖不對稱或者不完整，說明可能存在發表偏倚。

本研究的漏斗圖顯示，右側散點6個略多于左側4個，圖形稍有不對稱，可能原因為樣本含量較小，因此入選文獻稍有發表性偏倚但發表偏倚不大。

3 討論與思考

3.1 討論

3.1.1 meta分析結果的評價

對于生物活性肽對腸黏膜免疫功能和結構的調節作用，meta分析的結果均顯示積極的促進作用。由分析結果可知生物活性肽可促進腸黏膜分泌型免疫球蛋白A的分泌以及改善腸道黏膜結構，從而促進腸道對營養物質的吸收以及增強免疫效應。在本次meta分析納入的10篇國內外文獻中，由于實驗對象，實驗設計以及生物活性肽的種類選擇略有不同，導致分析數據具有一定的異質性，但不影響meta分析的統計學意義的判斷。根據僅有的10組研究數據，存在一定的發表性偏倚。發表偏倚在一定程度上影響meta分析的結果，但控制發表偏倚很難實現，因此在進行meta分析前要將所有的文獻資料收集齊全[10]。另外，大樣本的研究結果多數情況下可能接近所有研究（包括發表和未發表）的平均水平。因此， 敏感性分析時， 應比較大樣本研究的效應合并值與總的效應合并值是否一致， 這也有助于判斷是否存在發表偏倚。由于此次meta分析的樣本量較小，作出的判斷仍需要完善，對于meta分析的結果，由于過程中納入的標準不一樣，不同的人可能得到不同的結論，甚至是相互矛盾的結論。因此，我們需要更加謹慎地對待分析結果。

3.1.2 思考

之所以選擇“生物活性肽”和“腸黏膜免疫”作為關鍵字進行meta分析，是因為目前生物活性肽已經被廣泛應用于醫藥、食品、保健品、飼料等生活中的諸多領域，隨著人們對肽的認識不斷深入，各種活性肽的生產及應用前景越來越好，市場潛力也越來越大。生物活性肽的生理活性涉及人體的消化、吸收、營養代謝調控、生長發育、免疫、神經調節等各個環節。目前認為生物活性肽在腸黏膜免疫領域的研究剛開始起步，其應用前景廣泛并且切身關系到人們的腸道健康。腸道是人體內最大的消化器官，同時也是最大的免疫器官。人體腸道內的黏膜總面積約為300m2，是人體內環境與外環境間直接交流的巨大的界面。在所有黏膜系統中，腸黏膜系統是非常重要的，其免疫機制在體液免疫和細胞免疫的基礎上又具有其特殊性和復雜性，目前還沒有得到更為清楚的認識[11]。腸黏膜免疫屏障作為保護動物機體免受外來病原微生物侵擾的重要防線，可在抗原的刺激下利用免疫細胞和免疫相關物質產生特異性免疫應答，同時可對無害抗原下調免疫反應或產生免疫耐受[12]。一旦腸黏膜免疫屏障受損，腸通透性增加、腸菌群失調，可導致細菌和（或）內毒素易位，并可誘發和（或）加重全身炎癥反應和多器官功能障礙，對危重疾病的發生、發展、轉歸有重要影響[13]?，F代社會，人們越來越關注自身健康，而由腸黏膜誘發的健康問題也越來越多，因此如何改善腸黏膜免疫結構和功能已經刻不容緩[14]。因此，在生物活性（下轉第95頁）（上接第115頁）肽領域結合腸黏膜免疫研究開發有助于人體腸道健康的藥物、食品和其它產品是勢在必行的。

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