化血膽對急性心肌缺血大鼠保護作用實驗研究

孔春芹　駱始華　李瓊超　陳蓉　陳清華 張超

【摘 要】 目的：初步觀察化血膽對急性心肌缺血保護作用。方法：采用pit尾靜脈注射方法制備大鼠急性心肌缺血模型。將SD大鼠隨機分為5組：正常對照組、模型組、硝酸異山梨醇酯組、復方丹參滴丸組、化血膽組。各組均在連續灌胃15d后造模，測定大鼠15、30 s，1、3、5、10、20 min心電圖，腹主動脈采血，制備血清測定AST、CK、LDH、SOD、MDA含量。結果：化血膽具有抗心肌缺血的作用。J點位移與模型組比較（P<0.01），化血膽可明顯降低血清心肌酶AST、CK、LDH 和MDA的含量，提高血清SOD活性（P<0.05或P<0.01）。結論：化血膽具有抗心肌缺血的作用，可能與抗氧化有關，具體作用機制還待進一步研究。

【關鍵詞】 化血膽；心肌缺血；實驗研究

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）10-0022-03

化血膽Melasma arvense （Benth.） Hand.-Mazz.為玄參科植物黑蒴屬的全草，性涼、微苦，具有祛濕、平肝、散瘀活血功效，可治療黃疸型肝炎、肝腫大、跌打傷瘀腫、痛經等[1]。民間常用于化瘀消腫，對跌打損傷、外傷等導致的淤血腫塊有很好的消腫止痛之效。一般采取酒泡服用，外擦內服。化血膽藥物在滇東南一帶：臨滄、普洱、紅河、版納、文山作為一種常用的活血化瘀藥，采用方便，使用頻率高，伹藥物資源已不足。因此，采用現代科學方法對該藥物開展初步藥效實驗研究，明確藥效，不但能為臨床用藥提供理論指導，還能為開發具有自主知識產權的民族藥新藥提供實驗依據。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 清潔級SD雄性大鼠40只，體重（180±30）g，由四川省醫學科學院實驗動物研究所提供，動物合格證號：SCXK（川）2010-22。

1.2 藥品與試劑 化血膽由云南中醫學院中藥學院民族醫藥學院馮德強教授提供，鑒定為玄參科植物黑蒴屬的全草。復方丹參滴丸（天津天士力制藥有限公司，批號100207），垂體后葉素（pit，天津生物化學制藥有限公司，批號20090702），SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所），MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所），硝酸異山梨酯（江蘇方強制藥有限責任公司，批號20091129）

1.3 BL-420E生物信號采集系統（成都泰盟科技有限公司），臺式低速離心機（上海電機廠）。

2 方法

2.1 動物造模 參照文獻方法[2-3]制備大鼠急性心肌缺血模型。實驗前一天進行pit敏感性篩選。（挑選標準：①具備Q-RS-T波群；②J點上升或ST段抬高或壓低0.1mv以上，T波先高聳后低平或倒置的大鼠作為實驗用鼠）。正常對照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水，其余各組尾靜脈注射pit 0.6U/kg，10s內勻速注射完畢。

2.2 分組及給藥 將挑選出的敏感SD大鼠40只，隨機分為正常組、模型組、硝酸異山梨醇酯組、復方組、化血膽組，每組8只。在正常飼養基礎上，同時給予相應成分溶液連續灌胃15 d后復制模型。

2.3 檢測指標

2.3.1 大鼠心電圖 末次給藥1.5 h后各組大鼠用10%水合氯醛0.25 mL/100 g腹腔注射，麻醉后背位固定。造模前，用BL-420E 生物信號采集系統采集II導聯正常心電圖5 min，造模后，分組記錄各組注射pit完畢后15 s、30 s，1、3、5、10、20 min的心電圖。

2.3.2 血清心肌酶（AST、CK、LDH）及超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量 待大鼠心電圖記錄完畢后，腹主動脈取血，低速離心3 000 r/min，15 min，取血清保存于-20℃冰箱，送云南中醫學院第一附屬醫院檢測。

2.3.3 統計學方法 使用SPSS 17.0軟件進行處理，所有數據均用均數加減標準差（x[TX-*3]±s）表示，采用單因素方差分析。若滿足正態方差齊性，用LSD法進行分析；方差不齊時，用Tamhanes T2法。P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 對大鼠急性心肌缺血心電圖的影響 ①模型組與正常組比較，缺血后各時間點J點升高與正常組比較差異均有統計學意義（P<0.01），提示造模成功；②化血膽組與模型組比較具有統計學差異（P<0.01），表明藥物對急性心肌缺血后20 min內都有不同程度的預防作用；③統計學與正常組比較：在急性心肌缺血后10 min、20 min后與正常對照組比較差異無統計學意義（P>0.05），提示化血膽對急性心肌缺血后期具有具有穩定、顯著的保護作用。見表1。

3.2 對大鼠急性心肌缺血心率的影響 ①模型組與正常組比較，缺血后各時間點心率與正常組比較差異均有統計學意義（P<0.01）；②藥物組與模型組比較：化血膽組對缺血后15s、10min與模型組比較差異具有統計學意義（P<0.05），化血膽組對缺血后（30s、1min、3min、5min、20min）pit導致的急性心肌缺血心率降低改善作用不明顯。見表2。

3.3 對急性心肌缺血大鼠血清心肌酶的影響 ①模型組與正常組比較，缺血前后大鼠血清心肌酶差異有統計學意義（P<0.05），提示造模成功；②化血膽組與模型組比較，大鼠血清心肌酶差異具有統計學意義（P<0.05），化血膽對急性心肌缺血后心肌損傷具有較好的保護作用。見表3。

3.4 對急性心肌缺血大鼠超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量的影響 各給藥組與模型組比較，SOD 及MDA差異均有統計學意義（P<0.05），表明化血膽藥物對急性心肌缺血具有提高SOD活性，降低丙二醛含量，從而對心肌缺血發揮預防的保護作用。見表4。

4 討論

心肌缺血指心臟的血液灌注減少， 導致心臟的供氧減少， 心肌能量代謝失常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態[4]。中醫根據心肌缺血病理過程中所表現出的癥狀多將其歸屬于“卒心痛”、“厥心痛”等范疇。目前抗心肌缺血中藥研究是中藥藥理研究熱點之一。心肌缺血是多種心臟疾患的初始階段， 臨床上主要表現為冠心病心絞痛、心肌梗死等心肌缺血性癥狀，屬于中醫“胸痹”、“心痛”范疇。其病性總屬本虛標實，心脈痹阻為發病主要病機，基本治法為活血化瘀、宣痹通陽、扶正固表等[5-6]。

心電圖測量作為無創性檢查手段，對心肌缺血的評估、診斷、預防等有很大幫助。血清心肌酶為多年來臨床上作為心肌壞死的檢測標記物，心肌缺血壞死時，細胞膜的完整性受到損害，膜的通透性增加，酶由細胞內因釋放而減少，血清中酶活性增加。因此，心肌酶的檢測對心肌受損程度具有一定參考價值，也可以作為心肌梗塞范圍的定量指標[7]。從實驗結果分析筆者可以看出，化血膽對pit所致的大鼠急性心肌缺血具有很好的保護作用， 在降低血清心肌酶含量、提高SOD活性、降低MDA含量方面具有較好的治療作用，但其發揮作用的物質基礎及作用機理還有待進一步深入、系統的研究。

參考文獻

[1]云南思茅中草藥選[M].云南：云南省思茅地區革命委員會，1971：162.

[2]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].3版.北京：人民衛生出版社，2012：1203.

[3]陳清華，莫莉，袁肇凱，等.養心通脈方有效成分部位抗心肌缺血的實驗研究[J].中華中醫藥學刊，2008，9（9）：1910-1912.

[4]明磊，盧丹，劉金平，等.抗心肌缺血中藥有效成分研究進展[J].人參研究，2010（3）：38.

[5]張玲，中藥防治心肌缺血損傷作用機制研究進展[J].遼寧中醫雜志，2010，37（10）：2070.

[6]蔡光先，趙玉庸.中西醫結合內科學[M].北京：中國中醫藥出版社，2005：198.

[7]Wang Q D，Pernow J，Sjoquist P O，et al.Pharmacological possibilities for protection against myocaedical reperfusion injury[J].Cardiovasc Res，2002，55（1）：25-37.

（收稿日期：2018-03-24 編輯：陶希睿）