安徽省3個規(guī)?；i場高致病性豬藍耳病免疫效果觀察

管亮

摘 要：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）對安徽地區(qū)3個規(guī)?；i場的96份血清進行了檢測。以了解高致病性豬藍耳病的免疫抗體，結果顯示，3個規(guī)?；i場高致病性豬藍耳病免疫抗體陽性率分別為91.7%、100%、100%，表明3個規(guī)模化豬場的高致病性豬藍耳病的免疫抗體陽性率較高，有2個場免疫合格率達100%，免疫效果理想，應繼續(xù)堅持長期有效地免疫接種。

關鍵詞：豬場；高致病性豬藍耳??；抗體；免疫效果

中圖分類號 S85 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）12-0104-3

高致病性豬藍耳?。℉PRRS）是由豬繁殖與呼吸道綜合征病毒引起的一種急性高致病性傳染病[1]，臨床上主要表現(xiàn)為母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病，其發(fā)病快、病死率高，對我國養(yǎng)豬業(yè)的危害極大，造成了巨大的經濟損失。安徽省是養(yǎng)豬大省，部分地區(qū)豬群密度逐年上升，豬只的抵抗力逐步下降，集約化豬場中由高致病性豬藍耳病造成的豬群死亡所占比重較大，不僅給豬場造成了巨大的經濟損失，還使肉產品廢棄率增高[2]。眾多臨床試驗顯示，疫苗免疫在此病的防控中效果顯著，因此制定合理的免疫措施尤為關鍵[3]。定期對豬群進行免疫抗體檢測具有十分重要的意義，通過抗體檢測數(shù)據(jù)可以判斷豬群的整體免疫狀態(tài)，從而制定適合于該豬場的合理免疫程序，指導生產實踐。為了解安徽省高致病性豬藍耳病的抗體水平和免疫狀況，并為該病的防治提供科學依據(jù)，本研究對安徽地區(qū)3個規(guī)模化豬場的共96份抽樣血清進行了高致病性豬藍耳病抗體檢測，分析其免疫效果和影響因素。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清 對安徽省3個規(guī)模化豬場（甲、乙、丙）送檢的血液樣品，經離心機5000r/min離心3min，分離血清，置-20℃冰柜保存。詳細記錄樣品的來源，編號，送檢日期等。檢測血清共96份，其中甲場豬群日齡為3～4個月生長時期的豬；乙場豬群日齡為4個月生長時期的豬，被檢豬群已經免疫過1次高致病性豬藍耳病疫苗；丙場豬群日齡為種母豬。

1.1.2 試劑 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒購自于美國愛德士有限公司，批號為L221。

1.2 方法

1.2.1 操作步驟 （1）將待檢血清用稀釋液40倍稀釋（5μL樣品加195μL樣品稀釋液），每個樣品使用1個獨立的吸頭。在相應的孔中加入100μL已稀釋好的樣品。在包被孔內分別加入100μL沒有稀釋的陰性對照和陽性對照，每次檢測加2孔。18～25℃孵育30±2min。（2）吸取各孔的液體棄入廢液筒。每孔加300uL，洗滌液洗滌3～5次，每次靜置2～3min，每次洗滌后應吸去孔內的液體（避免包被孔干燥）。最后一次洗滌時，將每塊板中殘留的洗滌液扣拍到濾紙片上。（3）每孔加入100μL辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG抗體，18～25℃孵育30±2min。（4）每孔加入100mLTMB底物液，18～25℃孵育15±1min。（5）每孔加入終止液100mL終止反應，用酶標儀測量并記錄樣本和對照的吸光值A（620）。

1.2.2 判定標準 檢測結果的陽性對照平均值減去陰性對照平均值必須≥0.150，陰性對照平均值必須≤0.150，檢測結果判定為有效；否則判結果無效，試驗中的操作值得懷疑，應按照操作說明書重做一次試驗。PRRSV抗體的陽性/陰性通過計算樣品與陽性對照（S/P）的比值進行判定：

[SP=樣品OD值-陰性對照平均OD值陽性對照平均OD值-陰性對照平均OD值]

當S/P值<0.40，樣品應判定為PRRSV抗體陰性（-）。

當S/P值≥0.40，樣品應判定為PRRSV抗體陽性（+）。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 計量資料均用均值加減標準差（[x-±s]）表示，用spss19軟件行單因素方差分析。

2 結果與分析

應用ELISA方法對安徽地區(qū)3個規(guī)?；i場的96份血清進行高致病性豬藍耳病抗體水平檢測，結果見表1。由表1可知，96份血清中，陽性血清93份，陽性率達到96.9%，免疫效果良好。甲場血清僅檢出3份呈陰性，陽性檢出率為91.7%，超過國家規(guī)定標準70%[5]。乙場和丙場血清抗體陽性檢出率達到100%，免疫效果好。此3個規(guī)?；i場免疫效果均良好。這可能與豬場經營者比較重視豬藍耳病疫苗接種，堅持豬群長期接種免疫有關。經統(tǒng)計學分析，甲場、乙場和丙場的血清豬藍耳抗體的S/P值差異不顯著（P<0.05）。

3 討論

3.1 豬藍耳病免疫接種對免疫效果的影響 疫苗免疫是預防和控制高致病性豬藍耳病的最有效措施，疫苗免疫效果的好壞直接關系到該病的防控效果[4]。觀察三場檢測結果，豬藍耳病免疫效果良好，抗體陽性率普遍較高。免疫效果良好的原因可能與疫苗本身品質較好、免疫程序成熟、檢測周期合理等因素有關。梁建波等報道弱毒疫苗在母豬配種前30d免疫1次，產后10～20d加強免疫1次，仔豬在20～30日齡再免疫1次；滅活苗在母豬配種前50d、25d進行2次免疫，產后10～20d加強免疫1次，仔豬、商品豬免疫2次，間隔3～4周[5]。種母豬是豬場高致病性豬藍耳病疫苗免疫的重中之重，加強種母豬免疫不僅能提高母豬的保護率，更主要的是使仔豬具有良好的母源抗體，避免仔豬感染豬藍耳病病毒。上述3個大型規(guī)模豬場比較重視高致病性豬藍耳病的預防，疫病防控意識在不斷增強。

3.2 不同豬藍耳病抗體檢測方法的優(yōu)缺點 檢測高致病性豬藍耳病抗體的常用方法有ELISA和金標試紙法。本文使用ELISA方法檢測豬藍耳病抗體水平，其定性判斷準確率可達97%。ELISA方法的優(yōu)點主要有：（1）專一性強。抗原與抗體的免疫反應是專一反應；（2）靈敏度高。由于抗體聯(lián)結上了酶，因此，借助酶與底物的顯色反應，顯示抗原抗體結合物，大大提高了檢測的靈敏性；（3）結果易觀察；（4）操作簡便。能在較短時間內檢測較大數(shù)量樣品檢測[6]。金標試紙法的優(yōu)點主要有：操作簡單方便，全血即可檢測，讀數(shù)較快。其靈敏度和特異性較ELISA低。對于未免疫豬藍耳病疫苗的豬，運用ELISA可以準確監(jiān)測出豬藍耳病的感染情況，對豬藍耳病的對癥治療和有效防控具有指導意義[7]。

3.3 不同豬藍耳病疫苗對免疫效果的影響 豬藍耳病疫苗主要有弱毒疫苗和滅活疫苗兩種。有資料報道，仔豬藍耳病弱毒苗免疫效果好于滅活疫苗[8]。滅活苗與弱毒苗各有優(yōu)缺點。弱毒苗注入體內的效果與感染野毒沒有多大差別。如果疫苗的基因序列與豬群存在的病毒基因序列相似性達到70%～80%時，該群體使用此種疫苗效果較好。如果基因序列不同，則可能會引起豬藍耳病的變異。滅活苗誘導有效免疫力的能力較弱毒苗差，但其安全性較高[9]。每個豬場要因地制宜，根據(jù)豬場的自身疫病情況選擇合適的疫苗進行免疫接種。滅活苗的安全性大大高于弱毒苗，而且不存在散毒的危險，然而再好的滅活苗的效果也不能和弱毒苗相比。所以一般建議種豬場和陽性場選用滅活苗，而陰性場最好選用免疫效果好的弱毒疫苗[10]。

3.4 豬藍耳病的免疫防制 本研究檢測的血清來自于安徽地區(qū)3個大型規(guī)模豬場，分析總體數(shù)據(jù)看出，甲場高致病性豬藍耳病的免疫效果低于乙場和丙場，甲場應加強高致病性豬藍耳病的免疫意識，調整免疫程序，加大免疫劑量，定期進行免疫檢測。對此，提出以下幾點建議：（1）堅持開展補免工作，提高免疫密度。豬場應采取集中免疫和適時補免相結合的原則，做到“應免盡免，不留空當”，豬群免疫密度和質量提高了，才能有效地控制疫病的發(fā)生與流行[11]。（2）制定科學合理的免疫程序，及時做好重大動物疫病的常規(guī)免疫，酌情加大免疫劑量，以克服母源抗體的影響，刺激機體快速產生合格的抗體，保證豬群抵抗病毒的感染。對免疫耐受豬要及時淘汰，從而保持豬群整體免疫水平在較好的狀態(tài)。（3）完善免疫監(jiān)測體系。檢驗免疫質量的最直觀、最有效地方法是進行免疫監(jiān)測。豬場參考監(jiān)測結果，從而制定首免日齡、免疫次數(shù)、免疫間隔時間，以期獲得良好的免疫效果。免疫監(jiān)測既可以全面了解豬群的抗體水平，又可以有效的評價疫苗質量。疫苗接種和免疫監(jiān)測兩者缺一不可，免疫監(jiān)測是制度合理免疫程序的關鍵[12]。

4 結論

本研究主要對安徽地區(qū)3個規(guī)?；i場的豬群抽樣進行高致病性豬藍耳病抗體檢測，通過檢測數(shù)據(jù)分析豬場的免疫抗體水平，直觀地了解豬場的免疫狀況。高致病性豬藍耳病免疫效果總體良好，ELISA方法具有靈敏、特異、快速、易操作的特點。高致病性豬藍耳病疫苗在種豬場和陽性場應該選用滅活苗，而陰性場最好選用免疫效果好的弱毒疫苗[13]。抗體檢測的目的是根據(jù)其檢測結果來指導生產實際，抗體檢測一般以群體為基礎，不能單一以某一頭豬的抗體高低來評判。規(guī)?；i場高致病性豬藍耳病的防控需以免疫接種為主，綜合防控為輔，從而使豬群具有良好的生長環(huán)境。

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（責編：張宏民）