GC—MS法測(cè)定豬尿中鹽酸克倫特羅的殘留量不確定度評(píng)定

劉正華 鄭飛騰

摘要 建立了氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）法測(cè)定豬尿中鹽酸克倫特羅殘留量的不確定度評(píng)定數(shù)學(xué)模型，分析了影響樣品測(cè)定結(jié)果不確定度的主要來(lái)源，計(jì)算出了各影響因素的不確定度分量，當(dāng)豬尿中鹽酸克倫特羅殘留量的測(cè)定結(jié)果為5.58 μg/L時(shí)，其擴(kuò)展不確定度為0.16 μg/L。

關(guān)鍵詞 豬尿；鹽酸克倫特羅；氣相色譜-質(zhì)譜法；不確定度；評(píng)定

中圖分類號(hào) TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）12-0231-02

鹽酸克倫特羅（α-[（叔丁氨基）甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇鹽酸鹽）是一種人工合成強(qiáng)選擇性的β-腎上腺受體激動(dòng)劑，俗稱“瘦肉精”[1-2]，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高瘦肉率的效果。研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸克倫特羅易在肌肉、內(nèi)臟中蓄積，導(dǎo)致了一些因食用“瘦肉精”的動(dòng)物源食品安全事件[3-4]。包括中國(guó)在內(nèi)的世界上許多國(guó)家要求動(dòng)物源食品中不得檢出鹽酸克倫特羅[5]。鹽酸克倫特羅已成為生豬屠宰前的必檢項(xiàng)目之一。因此，對(duì)豬尿中的鹽酸克倫特羅殘留量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)量具有重要意義，其直接關(guān)系到人們的身體健康和企業(yè)的經(jīng)濟(jì)利益。

本研究依據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF 1059.1—2012）建立了一套氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定豬尿中的鹽酸克倫特羅不確定度的評(píng)定方案[6]，通過(guò)分析不確定度的主要影響因素，提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜（美國(guó)安捷倫科技有限公司）、24位固相萃取裝置（美國(guó)Supelco公司）、T18 basic勻漿機(jī)（廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司）、AB-204-S電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）、Milli-Q Advantages A10超純水機(jī)（法國(guó)密理博中國(guó)有限公司）。

鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（10 mg，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer G-mbH公司），D9鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5 mg，德國(guó)Dr.Eh-renstorfer GmbH公司），乙酸乙酯、甲苯、異丙醇、甲醇，均為色譜純，由德國(guó)Merck公司生產(chǎn)；鹽酸、乙酸銨，均為優(yōu)級(jí)純，由廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

1.2 樣品制備

1.2.1 提取與凈化。準(zhǔn)確量取5.00 mL豬尿樣品于50 mL塑料離心管中，乙酸調(diào)pH值=5.2±0.1，加入1.00 mL 0.02 mol/L乙酸銨溶液，加入100 μL 500 ng/mL D9鹽酸克倫特羅內(nèi)標(biāo)工作液和50 μL 3 000U/mL β-葡萄糖醛酸苷酶，60 ℃衍生2 h，用2.0 mol/L NaOH溶液調(diào)pH值=9.5±0.2，渦旋30 s，再用20 mL乙酸乙酯異丙醇（V∶V=3∶2）振蕩提取15 min后旋蒸濃縮至近干，用3.00 mL 0.02 mol/L乙酸銨溶液溶解待凈化。將SCX小柱（500 mg/3 mL）依次用5.00 mL甲醇、5.00 mL水、5.00 mL 30 mmol/L鹽酸溶液活化，然后將待凈化的樣品液全部轉(zhuǎn)移至柱內(nèi)，再依次用5.00 mL水、5.00 mL甲醇淋洗，最后用6.00 mL 4%氨水甲醇洗脫，50 ℃水浴氮吹干。

1.2.2 衍生上機(jī)。在吹干的樣品瓶中加入100 μL甲苯和100 μL衍生試劑BSTFA，80 ℃衍生1 h，待冷卻后再加入300 μL甲苯渦旋混勻后供GC-MS測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度來(lái)源分析及數(shù)學(xué)模型確定

2.1.1 不確定度來(lái)源分析。由試驗(yàn)過(guò)程可知，影響豬尿中的鹽酸克倫特羅殘留量檢測(cè)結(jié)果的不確定因素主要來(lái)源于由擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品溶液中鹽酸克倫特羅的濃度引入的不確定度、豬尿樣品量取體積引入的不確定度[7-8]、樣品分取液體積及樣品分取液體積引入的不確定度、樣品定容時(shí)引入的不確定度。

3 結(jié)論與討論

綜上所述，采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定豬尿中的鹽酸克倫特羅殘留量，本樣品結(jié)果為（5.58±0.16）μg/L，k=2（95%的置信區(qū)間）。

試驗(yàn)討論了氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定豬尿中的鹽酸克倫特羅殘留量的不確定度評(píng)定方法，定量表征了測(cè)定結(jié)果的可信度，評(píng)估了標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度[7-8]。由計(jì)算得到的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度可以看出，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制和擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線的非線性是這種不確定度的主要來(lái)源，可以通過(guò)改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制方法來(lái)減少測(cè)量不確定度。此外，由于在移取、分取、定容時(shí)移液器容量允差帶來(lái)的溶液體積變化所帶來(lái)的不確定度也不容忽視，在實(shí)際檢測(cè)工作中應(yīng)選用合適量程的移液器以減少測(cè)量不確定度。

4 參考文獻(xiàn)

[1] ZHANG X，ZHAO H，XUE Y，et al.Colorimetric sensing of clenbutero using gold nanoparticles in the presence of melamine[J].Biosens Bioelec-tron，2012，34（1）：112-117.

[2] ZHANG G P，WANG X N，YANG J F，et al.Development of an immunoc-hromatographic lateral flow test strip for detection of β-adrenergic agon-ist clenbuterol residues[J].J Immunol methods，2006，312（1）：27-33.

[3] 王立斌，張永慧，梁春穗，等.鹽酸克倫特羅引起特大食物中毒的調(diào)查與思考[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2002，28（1）：54-56.

[4] 嚴(yán)華松，金樂(lè)君.15起鹽酸克倫特羅食物中毒的調(diào)查與分析[J].福建醫(yī)藥雜志，2004，26（6）：232.

[5] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)[A/OL].（2002-12-24）[2018-03-03].http：//jiuban.moa.gov.cn/zwllm/nybz/200803/t20080304_1028649.htm.

[6] 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示：JJF1059.1-2012 [S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[7] 黃美玲，聶飛，劉紅，等.ELISA法測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測(cè)量不確定度評(píng)定[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2012，32（12）：169-170.

[8] 李蘭英，丁敏，徐勤，等.LC-MS/MS測(cè)定豬尿中鹽酸克倫特羅不確定度的評(píng)定[J].中國(guó)計(jì)量學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，23（1）：7-12.